2012年江西省儿童急性出血性结膜炎病原学特征分析

杨洋，龚甜，殷小龙，徐刚，张艳妮

(1、南昌大学第二附属医院，江西　南昌330006；2、江西省疾病预防控制中心，330029)



·论著·

2012年江西省儿童急性出血性结膜炎病原学特征分析

杨洋1，龚甜2，殷小龙1，徐刚2，张艳妮2

(1、南昌大学第二附属医院，江西南昌330006；2、江西省疾病预防控制中心，330029)

摘要：目的了解2012年江西省儿童急性出血性结膜炎(AHC)病原学特征，为其防治提供科学依据。方法采集2012年江西省急性出血性结膜炎患儿44例结膜拭子标本，并运用PCR和RT-PCR方法对这44份结膜拭子标本同时进行肠道病毒70型、柯萨奇病毒24型变异株和腺病毒三种病毒检测。结果2012年江西省儿童流行性出血性结膜炎流行高峰在5-7月份；PCR和RT-PCR检测结果为腺病毒阳性31份。结论2012年江西省儿童急性出血性结膜炎病原体主要为腺病毒。

关键词：急性出血性结膜炎；腺病毒；肠道病毒70型；病原学

急性出血性结膜炎(acute hemorrhagic conjunctivitis，AHC)俗称红眼病，是近40年来世界暴发流行的一种新型急性病毒性眼病；其病原体为肠道病毒70型(Human Enterovirus 70，HEV70)、柯萨奇病毒A组24型的一个变种(Coxsackievirus A24 variant，CVA24v)和腺病毒[1]，由于其传染性极强，又缺乏有效的治疗方法，AHC会严重影响当地经济，并会消耗大量的医疗卫生资源。我国自1971年上海、北京等地区发生大流行以来，就不断发生过流行。临床上不同病毒引起的AHC不易鉴别，因此及时了解病原对其防治具有重要意义。本研究对2012年江西省儿童急性出血性结膜炎进行病原学检测和分析，现将研究结果报告如下。

1　材料与方法

1.1标本采集和处理标本采自2012年2月至11月经江西省儿童医院眼科门诊诊断为急性出血性结膜炎的病例44例，用无菌棉拭子擦拭患者的结膜，结膜拭子标本保存在3ml病毒标本运输液(含5%牛血清、终浓度2000U/ml青霉素、200μg/ml链霉素和25U/ml制霉菌素的细胞培养液)。

1.2病毒PCR和RT-PCR检测

1.2.1病毒核酸提取取结膜拭子标本200μl，采用Qiagen公司的QIAamp MinElute Virus Spin Kit （Cat No：57704）提取病毒RNA和DNA，具体操作步骤参照试剂盒说明书。

1.2.2HEV70、CVA24v和腺病毒基因检测对提取的核酸同时进行HEV70、CVA24v和腺病毒三种病毒核酸检测，检测引物[2]由上海生工合成，引物具体序列如下：

HEV70：上游引物为5'-AGGGATTCACCAGA CATTGG-3'，下游引物为5'-ATTTTCCACCAGGCA CTCTG-3'，产物大小为242bp

CVA24v：上游引物为5'-GTGAGTGCTTGCCC AGATTT-3'，下游引物为5'-CTCCACTAGTGAGCG GTGTG-3'，产物大小为184bp

腺病毒：上游引物为5'-GCCSCARTGGKCWTACATGCACATC-3'，下游引物为5'-CAGCACSCCI CGRATGTCAAA-3'，产物大小为301bp。

1.2.3扩增反应

1.2.3.1HEV70和CVA24v RT-PCR反应采用QIAGEN公司的One Step RNA PCR Kit（Cat No：210212）试剂盒进行逆转录扩增，反应体系为25μl，其中RNA模板5μl，10×PCR Buffer 5μl，dNTP 1μl，Taq DNA聚合酶和AMV逆转录酶酶1μl，RNA酶抑制剂0.1μl，上下游引物各0.5μl，蒸馏水11.9μl。反应条件：60℃1min，42℃10min，50℃30mim，95℃15min，PCR循环如下：94℃30s，50℃30s，72℃1min，35次循环；72℃10min。

1.2.3.2腺病毒PCR反应采用Promega公司的Go Taq Green Master Mix（Cat No：M7122）试剂盒进行核酸扩增，反应体系为25μl，其中DNA模板5μl，Go Taq Green Master Mix（2×）12.5μl，上下游引物各0.5μl，蒸馏水6.5μl反应条件：94℃5min，PCR循环如下：94℃40s，55℃40s，72℃1min，35个循环；72℃10min。

PCR扩增产物在含溴化乙锭的2%琼脂糖电泳，在自动凝胶成像系统下观察结果。

1.3统计方法采用Microsoft Excel 2003对数据进行整理和分析。

2　结果

2.1流行病学特征2012年江西省5岁及以下儿童急性出血性结膜炎报告发病数共151例，发病呈常态散发水平。采集标本各月份均有发病，均为年初开始发病，于4月至7月份和11月至12月出现两个高峰，详见图1。

图1　2012年江西省5岁及以下儿童急性出血性结膜炎月报告发病数

2.2病毒核酸检测情况本研究采集的5岁以下儿童44份结膜拭子标本中，病毒腺病毒核酸阳性31份，阳性率为70.45%，HEV70和CVA24v检测结果均为阴性。

3　讨论

AHC首次在1969年爆发于非洲加纳随后在世界范围内发生多次大流行，是40多年来世界流行的一种新型急性病毒性眼病[3]。

本研究于2012年2月-11月期间每周一次赴江西省儿童急性出血性结膜炎的采集患儿结膜拭子，并对结膜拭子同时检测HEV70、CVA24v和腺病毒三种病毒核酸。国家传染病网络直报系统数据分析表明2012年江西省儿童急性出血性结膜炎流行高峰在4月至7月份和11月至12月，本研究病毒核酸检测结果为44份结膜拭子标本中31份核酸阳性，且均为腺病毒，提示江西省2012年儿童急性结膜炎病原主要为腺病毒。目前，国内关于腺病毒感染的报道较少，在我国1994年AHC流行期间，3型腺病毒占病毒阳性者的22%[4]。本研究结果不同于我国既往研究自1971年以来至2010年AHC流行优势病原体以CVA24v为主[5]，可能是由于以往报道主要都是关于的AHC的暴发疫情病原学研究，因为根据研究证明，我国AHC的暴发多是由CVA24v[6-10]所导致的，由HEV70和人腺病毒所致的AHC的暴发报道较少，而本研究为对儿童AHC持续近一年病例的病原学监测研究。

AHC具有隔几年出现一次发病高峰的现象，江西省与我国于2010年同步出现一次流行高峰[5，11，12]，并且有研究表明[4]AHC流行间隙期内腺病毒占病毒阳性的比率逐年上升，肠道病毒比率则逐年下降，腺病毒是AHC流行间隙期内急性结膜炎的主要病原，而AHC也是急性结膜炎的一种。因此，本研究得出江西省2012年儿童急性结膜炎病原主要为腺病毒，提示2012年为江西省儿童AHC流行间隙期，与王晓芳等报道一致。由于本研究标本数不多，因此及时掌握AHC病原谱构成变化，是否能为AHC出现新一轮发病高峰预测预警提供科学依据，有待进一步扩大对AHC甚至对急性结膜炎进行的病原学监测研究阐明。

参考文献

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·论著·

中图分类号：R777.31

文献标识码：A

文章编号：1674-1129(2016)03-0277-02

DOI：10.3969/j.issn.1674-1129.2016.03.006

基金项目：江西省教育厅科学技术研究项目(GJJ11356)；江西省卫生厅科研计划项目(20113116)

作者简介：杨洋，女，1981年1月生，硕士，主要从事儿童眼科疾病临床诊断和研究。

(收稿日期2016-03-22；修回日期2016-05-24)

Etiology analysis in children with acute hemorrhagic conjunctivitis in Jiangxi province in 2012

YANG Yang1，GONG Tian2，YIN Xiaolong1，et al. 1.The Second Affiliated Hospital to Nanchang University，Nanchang 330006；2.Jiangxi Province Center for Disease Control and Prevention，Nanchang 330029，China.

Abstract：Objective To understand the pathogens spectrum in the children with acute hemorrhagic conjunctivitis (AHC) in Jiangxi province in 2012，and provide the scientific evidence for its prevention and treatment. Methods The specimens of conjunctival swabs were collected from 44 children with AHC in 2012，and the virus nucleotide of enterovirus type 70，coxsackievirus A24 variant and adenovirus were detected with PCR and RT-PCR. Results Epidemic peaks of acute hemorrhagic conjunctivitis in children arose in the 5-7 months in Jiangxi province in 2012；the 31 samples detected with PCR and RT-PCR were adenoviruspositive. Conclusion The dominant pathogens of acute hemorrhagic conjunctivitis in children was adenovirus in Jiangxi province in 2012.

Key words:Acute hemorrhagic conjunctivitis；Adenovirus；Human Enterovirus 70；Pathogenic