角质细胞生长因子促进表皮细胞迁移研究

杨云

（定西市人民医院，甘肃 定西 743000）

角质细胞生长因子促进表皮细胞迁移研究

杨云

（定西市人民医院，甘肃 定西 743000）

目的 了解角质细胞生长因子（KGF）对人表皮细胞迁移的影响。方法 在试验组培养基中加入KGF，于48、96、144 h后观察表皮细胞的迁移距离，并与对照组比较。结果 KGF可有效促进表皮细胞迁移。144 h后，试验组细胞迁移的距离几乎是对照组的2倍。结论 KGF是一种特异性较强、能够促使上皮细胞迁移的生长因子，应对其做进一步研究。

角质细胞生长因子；表皮细胞；损伤修复；划痕试验

角质细胞生长因子（Keratinocyte Growth Factor，KGF）是一种特异性的高效促上皮细胞增殖的生长因子，在损伤修复过程中发挥重要作用[1，2]。KGF最初发现于人胚胎肺成纤维细胞培养中[3]，虽然不是由上皮组织产生，但属于FGF家族成员（也称之为FGF-7）[4]。本试验利用划痕创伤观察KGF对人皮肤细胞的促迁移能力，为临床应用提供科学依据。

1材料与方法

1.1材料收集与分离

取1例病人手术中切除的皮肤组织9块，重复试验3次。经PBS（磷酸缓冲盐溶液）冲洗后置入Dispase酶中，4℃过夜；收集皮片，置0.25%胰酶与0.02%EDTA（1∶1）混合液中，37℃，10～15 min，经吹打、过滤后收集单细胞悬液加入SKF上皮细胞培养液，以10×104/ml的密度接种于培养瓶中。当细胞铺满80%时，用0.25%胰酶消化后接种传代，取2~3代细胞进行试验研究。

1.2细胞培养与观测

在6孔板中接种表皮细胞，待细胞铺满后，制备80%μm宽的划痕并标记，作为细胞迁移的基点。用PBS洗细胞3次，去除划下的细胞，加入培养基，试验组培养基中加入15.0 ng/ml的KGF，对照组不添加。置于37℃、5%CO2培养箱继续培养，于48、96、144 h观察，取10个迁移最远的不同点测量距离，以平均值作为表皮细胞的迁移距离。

1.3统计学处理

试验结果以SPSS 13.0软件进行统计学分析，采用独立样本t检验。P<0.05表示有显著性差异。

2结果与分析

2.1细胞培养结果

原代培养皮肤表皮细胞，3~5 d可见细胞贴壁生长。细胞展开后为多角形，呈典型的铺路石样，具有明显的上皮细胞培养特征（见图1）。

图1　体外培养的人表皮细胞

2.2划痕试验结果

24 h后，细胞可见明显迁移；48 h后试验组迁移距离较对照组远，试验组为（29.20±0.02）μm，对照组为（21.70±0.03）μm；96 h后试验组为（50.10±0.01）μm，对照组为（37.50±0.04）μm，有显著性差异；144 h后试验组划痕基本覆盖，而对照组仍可见明显的细胞空白区（见图2、3）。

与对照组相比，KGF促表皮细胞迁移能力随着时间的延长逐渐明显。96 h后两组间出现显著性差异，144 h后试验组细胞迁移的距离几乎是对照组的2倍。

图2　KGF对人皮肤表皮迁移的影响

图3　KGF促进人皮肤表皮细胞迁移效应

3结论

划痕试验是体外试验中最常用的检测创伤愈合的模型，其有效模拟了创伤愈合初期由细胞伸展、增殖、迁移覆盖创面的过程[5]。本试验中，我们选择此模型用以观察KGF对表皮细胞迁移的影响。

Nguyen等[6]曾就KGF对乳腺癌细胞的增殖和迁移作用进行了观察，发现KGF可明显促进乳腺癌细胞迁移、增殖，并呈浓度依赖性。本次试验我们借鉴其他试验中所采用的KGF浓度来刺激人表皮细胞，结果发现，KGF可有效促进表皮细胞迁移。作用144 h后，试验组细胞迁移距离几乎是对照组的2倍，这与Marti等[7]在小鼠创伤模型中观察到的结果一致。已有研究表明，KGF是一种特异性的高效促上皮细胞增殖的生长因子，可以促进有丝分裂，这与c-myc、c-fos c以及核苷酸合成的调节酶的表达有关[8]。所以，试验组划痕愈合时间明显短于对照组，可能与KGF促进表皮细胞的增殖能力有一定关系，但对于KGF如何促进细胞迁移，目前还不明确，其机理有待进一步研究。

本试验利用体外表皮创伤模型观察KGF对人表皮细胞的促迁移能力，进一步证实和肯定其在皮肤创伤愈合方面的巨大潜能，为临床应用奠定了良好基础。

[1]Braun S，Krampert M，Bodó E，et al.Keratinocyte growth factor protects epidermis and hair foll icles from cell death induced by UV irradiation，chemotherapeutic or cytotoxic agents[J].J Cell Sci，2006，119（23）：4841-4849.

[2]Belleudi F，Leone L，Aimati L，et al.Endocytic pathways and biological effects induced by UVB-dependent or l igand-dependent activation of the keratinocyte growth factor receptor[J].FASEB J，2006，20（2）：395-397.

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[5]Mathew A C，Rajah T T，Hurt G M，et al.Influence of antiestrogens on the migration of breast cancer cells using an in vitro wound model[J].Clin Exp Metastasis，1997（15）：393-399.

[6]Nguyen T N，Zang X P，Pento J T.Keratinocyte growth factor stimulates the migration and proliferation of breast cancer cells in a culture wounding model[J].Pharmacol Res，2002，46（2）：179-183.

[7]Marti G P，Mohebi P，Liu L，et al.KGF-1 for wound healing in animal models[J].Methods Mol Biol，2008（423）：383-391.

[8]宗宪磊，蔡景龙，姜笃银，等.角质细胞生长因子研究进展[J].中国修复重建外科杂志，2009，23（2）：188-193.

G424.31

B

1671-1246（2016）13-0098-03