槲寄生总生物碱的提取工艺研究

孙永慧，刘　磊，王育红，郎　悦

(黑龙江中医药大学 中医药研究院，哈尔滨 150040)

槲寄生总生物碱的提取工艺研究

孙永慧，刘磊，王育红，郎悦

(黑龙江中医药大学 中医药研究院，哈尔滨 150040)

摘要：优选提取槲寄生中总生物碱的最佳提取工艺.以离子交换树脂法提取，采用正交试验，以槲寄生中总生物碱的收得量为考察指标，优化总生物碱的提取工艺.结果表明，最佳提取工艺为盐酸渗漉液质量分数为0.2%，渗漉液的用量是药材的15倍，离子交换树脂的用量是药材的0.5倍，氨水用量是150 mL/mg药材.该提取工艺可以有效地提取出槲寄生中的生物碱，提取工艺合理、高效、经济.

关键词：槲寄生总生物碱；提取工艺；离子交换树脂；正交试验

槲寄生是桑寄生科(Lorantheceae)槲寄生属(Viscum)植物，药用部位是干燥带叶茎枝.槲寄生始载于《神农本草经》，列为上品，具有祛风湿、强筋骨、补肝肾、安胎元的功效，用于风湿痹痛，筋骨无力，崩漏经多，妊娠漏血，腰膝酸软，胎动不安，头晕目眩等症.据文献报道，槲寄生总生物碱抗肿瘤活性很强[1]，对其进行提取工艺研究具有重要意义.本实验采用离子交换树脂法，利用正交试验设计，以总生物碱收得量为考察指标，优选槲寄生总生物碱最佳的提取工艺条件.

1仪器与试药

1.1实验材料

槲寄生(哈尔滨顺合大药房有限公司)；强酸型阳离子交换树脂(天津市光复精细化工研究所，型号：001*7(732))；硫酸阿托品对照品(中国药品生物制品检定所，批号：100040 -201310)；其他试剂均为分析级.

1.2实验仪器

756-PC紫外可见分光光度计(上海光谱仪器有限公司)；METTLER TOLEDO AG135电子天平(梅特勒- 托利多仪器有限公司).

2方法与结果

2.1提取工艺

2.1.1提取工艺正交实验设计[2]

通过预试验，发现影响药材提取的因素主要有盐酸渗漉液质量分数(A)、渗漉液用量(B)、阳离子树脂用量(C)、树脂碱化氨水用量(D).分别选取了三个水平，采取了梯度设计，正交试验因素水平表见表1.

表1　正交试验因素水平表

2.1.2实验方法

槲寄生药材粗粉20 g，盐酸水溶液浸渍1 h，渗漉，渗漉液经阳离子交换树脂交换，氨水碱化，以二氯甲烷索氏提取，回收二氯甲烷至干，干燥得槲寄生总生物碱.粗总生物碱用酸性染料染色法[3]进行含量测定.采用正交试验法，按L9(34)表(见表2)正交试验设计提取方案，以槲寄生生物碱收得量为考察指标，优选最佳提取工艺条件.

2.2含量测定

2.2.1样品溶液的制备

取各组所得槲寄生总生物碱，加无水乙醇适量使溶解，定容至10 mL量瓶中，即得.

2.2.2对照品溶液的配制

精密称取硫酸阿托品对照品适量，置50 mL量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，摇匀，得质量浓度为0.29 mg/mL的对照品溶液.

2.2.3溴甲酚绿溶液的配制

精密称取邻苯二甲酸氢钾1.021 g、溴甲酚绿50 mg，放入100 mL量瓶中，加入0.2 mol/L的NaOH溶液6.0 mL，振摇，溶解，加蒸馏水定容至刻度，摇匀，备用.

2.2.4测定方法

精密量取待测溶液各1 mL，置于分液漏斗中，精密加二氯甲烷10 mL，再精密加入溴甲酚绿溶液2 mL，振摇提取，分取二氯甲烷层，在420 nm处检测吸收度.

2.3方法学考察

2.3.1线性关系考察

分别精密吸取对照品溶液1、2、3、4、5、6、7 mL，放入10 mL量瓶中，蒸馏水定容，取1 mL按2.2.4项下方法测定.以对照品质量浓度(C)为横坐标，纵坐标为吸光度(A)，绘制标准曲线，得到回归方程：A= 2.725 4C+ 0. 009 4(R2= 0. 999 0)，表明硫酸阿托品质量浓度在0.029～0.203 mg/mL的范围内有良好的线性关系.

2.3.2精密度试验

取质量浓度为0.116 mg/mL的对照品溶液，按2.2.4项下方法重复测定5次，RSD值为0.73%，结果显示精密度良好.

2.3.3稳定性试验

取质量浓度为0.116 mg/mL的对照品溶液，按2.2.4项下方法操作，在0、l、2、3、4、5 h分别测定其吸光度.RSD值为1.12%，表明样品在5 h内稳定性良好.

2.3.4重现性试验

分别取同一批供试品溶液5份，按2.2.4项下方法测定，总生物碱的平均得量为4.703 0 mg，RSD值为0.87%，表明重现性良好.

表2　正交试验方案及结果

2.3.5加样回收率试验

取重现性试验项下同一批供试品6份，每份

0.5 mL，分别精密加入对照品0.23 mg，按2.2.4项下方法操作，测定，平均回收率为97. 39%，RSD值为1.31 %.

2.4结果及分析

2.4.1实验结果

见表2.

2.4.2结果分析

直观分析结果表明，极差RA>RD>RC>RB，说明酸水渗漉液质量分数对提取槲寄生总生物碱的影响最大，其次是树脂碱化氨水的用量，影响最小的是渗漉液的用量.因此把影响最小的因素(渗漉液的用量)作为误差项，进行方差分析，结果见表3所示.

表3　综合评分方差分析

注：F0.05(2，2)=19.00，F0.01(2，2)=99.00

方差分析结果表明：酸渗漉液质量分数和碱化氨水的用量为关键因素，对总生物碱的得率有显著影响，阳离子树脂用量无显著影响.

综上所述，阳离子交换树脂法提取槲寄生生物碱的最佳工艺为A2B1C1D3，即药材经15倍量的质量分数为0.2%盐酸溶液渗漉，渗漉液过0.5倍量的阳离子交换树脂，交换过的树脂用150 mL/mg的氨水碱化，再用二氯甲烷进行索氏提取，即得.

3讨论

3.1测定波长的选择

分别取对照品溶液、供试品溶液，在200～700 nm扫描，二者显色后在420 nm 处均呈现最大吸收，且不受供试品溶液、溴甲酚绿溶液干扰，因而选择测定波长为420 nm.

3.2生物碱的提取

本研究采用酸水浸渍后渗漉，再用离子交换树脂法富集，碱化后索氏提取，制得总生物碱.该法得到的生物碱纯度较高，有机溶剂用量少，工艺简单易行，可作为槲寄生总生物碱的提取工艺.

参考文献：

[1]彭海燕, 章永红, 韩英, 等. 槲寄生碱抗肿瘤作用的研究[J]. 中国中药杂志, 2005, 30 (5): 381.

[2]王震, 常金花, 刘翠哲. 离子交换树脂法提取野罂粟中总生物碱的工艺优化[J]. 承德医学院学报, 2010, 27(1): 14-15.

[3]孙永慧, 凌勇, 张嵩, 等. 不同寄主红果槲寄生中总生物碱的含量测定[J]. 中医药信息, 2009, 26(3): 15-16.

Study on extraction process of total Alkaloids from Viscum coloratum (Kom.) Nakai

SUN Yong-hui, LIU Lei, WANG Yu-hong, LANG Yue

(Academy of Chinese Medicine, Heilongjiang University of Traditional Chinese Medicine, Harbin 150040, China)

Abstract：To optimize the optimal extraction process with ion exchange resin for total alkaloids from Viscum coloratum (Kom.) Nakai. The ion exchange resin was used to extract. An orthogonal test was adopted in this paper. Four main factors were optimized, with the extraction efficiency of total alkaloids of Viscum coloratum as markers, and the L9 (3)4 orthogonal test table was used to arrange sequent experiments. Results indicated that the best extraction technology was as follows: 2% acid percolation fluids, 15 times amount of acid percolation fluids of medicinal materials, 0.5 times amount of ion exchange resin of medicinal materials, 150 mL ammonium chlorides every 1 mg medicinal materials. The optimized extraction process can extract the alkaloids from Visum coloratum (Kom.)Nakai, and the extraction is reasonable, efficient and economic.

Key words：total alkaloids of Viscum coloratum (Kom.) Nakai; extraction process; ion exchange resin; orthogonal test

收稿日期：2015-07-01.

基金项目：黑龙江省教育厅科学技术研究项目(12531635)

作者简介：孙永慧(1974-)，女，博士，副研究员，研究方向：中药药效物质基础.

中图分类号：R284

文献标识码：A

文章编号：1672-0946(2016)03-0261-02