中药三棱的总黄酮提取工艺研究

张建中，徐菲菲，陈小燕，周　蓉（.扬子江药业集团，江苏泰州53；.老百姓大药房江苏有限公司，江苏南京0000）



中药三棱的总黄酮提取工艺研究

张建中1，徐菲菲2，陈小燕1，周蓉1
（1.扬子江药业集团，江苏泰州225321；2.老百姓大药房江苏有限公司，江苏南京210000）

摘要：目的研究和确定中药三棱总黄酮的最佳工艺条件。方法以芦丁为对照，总黄酮提取率为考察指标，采用正交设计L16（45），以提取温度（A）、粉末粒度（B）、提取时间（C）、溶剂体积分数（D）和料液比（E）为参数进行提取工艺的优选。结果最佳提取工艺：粒度为40目药材粉末，1：30的料液比，在80℃下，60%乙醇提取3h。结论经优化后的提取工艺总黄酮提取率得到明显提高。

关键词：三棱；总黄酮；提取工艺；正交实验

中药三棱为黑三棱科植物黑三棱Sparganium stoloniferum.Buch.-Ham.去皮的块茎。始载于《开宝本草》，具有破血行气，消积止痛的功效［1］，主治瘕痞块，瘀血经闭，食积胀痛［2-3］。现代药理研究表明，黄酮类成分系三棱活性部位之一［4］，三棱中总黄酮具有较强的抗血小板聚集和抗血栓的作用［5］。对不同产地三棱中总黄酮的提取工艺及含量研究较少。本文在单因素实验的基础上，利用正交试验对总黄酮提取工艺进行研究，确定了最佳的提取工艺参数，并用紫外分光光度法对郑州、湖南岳阳等十个产地的三棱进行总黄酮含量测定。

1　仪器与材料

754型紫外可见分光光度计（上海精密仪器有限公司）；XS205DU分析天平（瑞士梅特勒—托利多）；芦丁对照品（上海源叶生物科技有限公司提供，批号：YN1103SA14）；材料均为国药集团化学试剂有限公司生产，亚硝酸钠（批号：20150109）、无水乙醇（批号：20140629）、甲醇（批号：20140531）、丙酮（批号：20120627）、硝酸铝（批号：20131209）、氢氧化钠（批号：20131125）。所有试剂均为分析纯。三棱药材购于安徽亳州药材市场，经鉴定为黑三棱科植物黑三棱Sparganium stoloniferum Buch.-Ham.的块茎。药材粉碎，过40目筛备用。

2　方法与结果

2.1对照品溶液的配制及标准曲线的绘制

精密称取芦丁对照品5mg，60%乙醇溶液溶解、定容至25ml，摇匀即得浓度为0.2mg·ml-1的芦丁标准储备液。经过标准液显色后用1cm比色皿在波长400～700nm区间进行紫外扫描，确定最大吸收波长为480nm。移取上述芦丁储备液0、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00ml于6个25ml的量瓶中，加入5%的NaNO2溶液1.0ml，摇匀、静置5min，加入10%Al（NO3）3溶液1.0ml，摇匀、静置5min，加入1.00mol·l-1NaOH溶液5.0ml并摇匀，60%乙醇溶液定容，10min后于波长480nm下测定吸光度，试剂空白为参比液，绘制标准曲线［6］，见图1。采用最小二乘法进行回归分析，得线性回归方程：A=11.20c+0.011，r=0.999。

图1　总黄酮标准曲线

2.2含量测定方法

精密称取三棱药材粉末（40目）1g，用60%乙醇溶液，料液比1︰30，在80℃下进行回流提取，每次提取3h。定容后进行测定分析。

三棱药材中总黄酮含量测定：以芦丁对照品溶液为标样，采用亚硝酸钠-三氯化铝比色法，在480nm处测定其吸光值。总黄酮提取率［7］（%）=（黄酮类化合物总质量/干物料质量）100%。

2.3提取溶剂的选择

黄酮苷元易溶于甲醇、乙醇等有机溶剂，难溶于水；黄酮苷易溶于水，难溶于有机溶剂，因此可用不同浓度的有机溶剂来提取。分别称取三棱药材样品1g，在80℃下，用不同浓度的甲醇、乙醇、丙酮25ml提取，时间1h，结果表明丙酮得率最高，乙醇次之，甲醇最低，结果见图2。综合考虑实验安全等因素，选用乙醇溶液作为提取溶剂。

图2　不同溶剂对总黄酮提取的影响

2.4单因素实验

2.4.1粒度对提取效果的影响分别精密称取20目、40目、60目和100目三棱样品粉末各1g于250ml锥形瓶中，加入60%乙醇溶液25ml于80℃水浴回流提取1h，放冷过滤，取续滤液5ml，定容至25ml，测定三棱总黄酮含量并计算出得率。结果见图3。

图3　不同粒度对总黄酮提取的影响

2.4.2乙醇体积分数对提取效果的影响精密称取三棱样品1g（40目）样品7份于250ml容量瓶中，分别加入20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%的乙醇溶液25ml，80℃水浴回流1h，放冷过滤，取续滤液5ml，定容到25ml，测定总黄酮含量并计算得率。结果见图4。

图4　不同体积分数溶剂对总黄酮提取的影响

2.4.3温度对提取效果的影响精密称取三棱样品1g（40目）4份于250ml锥形瓶中，加60%乙醇溶液25ml，分别在不同温度（50℃、60℃、70℃和80℃）水浴回流提取1h，放冷过滤，精密吸取续滤液5ml，定容到25ml，测定总黄酮含量并计算得率。结果见图5。

图5　不同温度对总黄酮提取效果的影响

2.4.4料液比对提取效果的影响精密称取三棱样品1g（40目）7份于250ml锥形瓶中，分别加入60%乙醇溶液10ml、20ml、25ml、30ml、35ml、40ml和50ml。在80℃水浴回流提取1h，放冷过滤，精密吸取续滤液5ml，定容至25ml，测定总黄酮含量并计算得率。结果见图6。

图6　不同料液比对总黄酮提取效果的影响

2.4.5时间对提取效果的影响精密称取三棱样品1g（40目）4份于250ml锥形瓶中，加60%乙醇溶液30ml，于80℃水浴回流提取，提取时间分别为1h、2h、3h和4h，放冷过滤，精密吸取续滤液5ml，定容到25ml，测定总黄酮含量并计算得率。结果见图7。

图7　不同提取时间对总黄酮提取的影响

2.5正交实验结果与分析

在上述实验的基础上，对影响三棱中总黄酮得率的因素：粒度、提取时间、料液比、温度、提取温度以及乙醇浓度进行L16（45）正交试验，结果如表1、表2所示。极差分析［7］可知，5种因素对总黄酮得率影响大小依次为A＞B＞E＞D＞C，5种因素的最佳组合为：40目三棱样品粉末用60%乙醇溶液，料液比1∶30，在80℃温度下提取3h。

表1　正交实验因素水平

表2　正交实验结果

2.6验证实验结果

依据上述最佳提取工艺参数，对三棱药材中总黄酮含量进行测定，结果见表3，表明在此工艺条件下三棱药材总黄酮得率较稳定。

表3　验证实验结果

3　结论

（1）粒度、提取时间、料液比、温度、提取温度以及乙醇浓度对三棱药材总黄酮的提取率均有影响，影响大小：提取温度＞粒度＞料液比＞乙醇体积分数＞提取时间。

（2）三棱中总黄酮最佳提取工艺参数为：粒度40目，乙醇浓度60%，温度80℃，料液比1∶30，提取时间3h。三棱药材总黄酮最佳提取工艺参数为：80℃，40目，60%乙醇，1∶30料液比，提取3h。

参考文献：

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典［M］.北京：化学工业出版社，2010.

［2］江苏新医学院.中药大辞典（上）［M］.上海：科学技术出版社，1977.

［3］国家中医药管理局编委会.中华本草［M］.上海：科学技术出版社，1999.

［4］张卫东，杨胜.中药三棱化学成分研究［J］.中国中药杂志，1995，20（6）：356-357.

［5］邓英君.三棱不同提取物镇痛剂抗凝血作用研究［J］.时珍国医国药，1999，10（12）：882-883.

［6］毛淑杰，沈鸿，解爱萍，等.三棱不同炮制品黄酮成分含量测定［J］.中国中药杂志，1999，24（1）：29.

［7］余俊，陈晓青，蒋新宇，等.凤尾草中总黄酮的提取工艺研究［J］.中成药，2007，29（11）：1683-1685.

（责任编辑刘红）

Study on Extraction Process of Total Flavonoids from Rhizoma Sparganii

ZHANG Jian-zhong1，XU Fei-fei2，CHEN Xiao-yan1，ZHOU Rong1
（1. Yangtze River Pharmaceutical Group，Ltd，Taizhou Jiangsu 225321；2. Lao Baixing Pharmacy Jiangsu Co.，Ltd，Nanjing Jiangsu 210000，China）

Abstract：To study and establish the extraction process of total flavonoids from Rhizoma Sparganii. Methods：Use orthogonal design L16（45）to screen out the best extraction process condition with the rate of total flavonoids for index，rutin as reference substance，take the extraction temperature，the size of Rhizoma Sparganii，extraction time，concentration of ethanol and the ratio of Rhizoma Sparganii to solution as the factors. Results：The extraction temperature was 80℃，the size of Rhizoma Sparganii was 40，the extraction time was 3h，the concentration of ethanol was 60%，the ratio of Rhizoma Sparganii to solution was 1：30. Conclusion：The rate of total flavonoids of Rhizoma Sparganii was increased after optimizing the extraction process.

Key words：Rhizoma Sparganii；Total flavonoids；extraction process；orthogonal test

中图分类号：R284.2

文献标志码：A

文章编号：1671-0142（2016）01-0058-03

作者简介：张建中（1978-），男，江苏泰州人，工程师.