HPLC法测定复方胃宁片中腺苷的含量

贺　婕， 张爱荣， 姜建芬

(山西华元医药集团有限公司，太原　030032； *通讯作者，E-mail:hejie_huayuan@163.com)



HPLC法测定复方胃宁片中腺苷的含量

贺婕*， 张爱荣， 姜建芬

(山西华元医药集团有限公司，太原030032；*通讯作者，E-mail:hejie_huayuan@163.com)

摘要：目的建立复方胃宁片中腺苷的含量测定方法。方法采用高效液相色谱-紫外检测方法测定复方胃宁片中腺苷含量，色谱柱为C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流动相为甲醇-0.02 mol/L磷酸氢二钠溶液(20 ∶80)，流速为1.0 ml/min。结果腺苷在0.830 4-8.304 0 μg/ml范围内线性关系良好，平均回收率为97.86%，RSD为2.6%(n=9)。结论所建立的高效液相色谱法测定样品准确、 简便、快速，可用于复方胃宁片的质量控制。

关键词：复方胃宁片；腺苷；HPLC

复方胃宁片是由延胡索、猴头菌粉、海螵蛸3味药粉碎成细粉，加入适宜的辅料后制粒压片而成，具有理气止痛、制酸的功效，用于肝胃不和，胃脘疼痛，吞酸喛气。方中猴头菌粉为多孔菌目齿菌科猴头菌深层发酵的培养物经分离提取干燥的菌粉，其本身即用于胃溃疡、萎缩性胃炎、慢性胃炎等，是复方胃宁片的重要组成成分。该原料的标准收载于《国家药品标准第十三册》，采用紫外分光光度法测定其所含的多糖和肽的含量[1]。原复方胃宁片质量标准采用半微量定氮法测定产品中的含氮量，以控制产品的质量[2]。

文献报道猴头菌粉的含量测定方法多见对其多糖、含氮量、总甾体等的测定[3-7]，关于高效液相色谱法对猴头菌中腺苷的含量测定有少量报道[8-10]，而对复方胃宁片中腺苷的测定无以查询。为更好地控制产品质量以保证其临床疗效，简化检验步骤，满足复方胃宁片再注册时提升质量标准的要求，笔者对其进行了腺苷含量测定的方法研究，经考察该方法准确、简便，可用于该制剂的质量控制。

1仪器与材料

1.1仪器

岛津LC-10A高效液相色谱仪； Mettler AL204电子天平。

1.2材料

腺苷对照品(批号110879-200202)，购于中国药品生物制品检定所；甲醇色谱纯(DIKMA公司)，甲醇分析纯(北京化工厂)，磷酸氢二钠为分析纯(天津市致远化学试剂有限公司)，水为纯化水；复方胃宁片，由山西华元医药生物技术有限公司提供。

2方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱为Diamonsil(迪马)C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相为甲醇-0.02 mol/L磷酸氢二钠溶液(20∶80)；柱温为30.0 ℃，流速为1.0 ml/min；进样量为20 μl；检测波长为260 nm；理论板数按腺苷峰计算应不低于2 000。

2.2溶液的制备

2.2.1对照品溶液的制备取腺苷对照品适量，精密称定，加水制成每1 ml含4 μg的溶液，即得。

2.2.2供试品溶液的制备取装量差异下的供试品内容物，研细，取约0.5 g，精密称定，置50 ml量瓶中，加50%甲醇适量，超声处理(功率250 W，频率33 kHz)30 min，放冷，加50%甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.3阴性对照溶液的制备按处方比例取海螵蛸药材，按复方胃宁片制备工艺制成不含猴头菌粉和延胡索的阴性样品，按照供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。

2.3系统适用性试验

分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各20 μl注入色谱仪进行分析，记录色谱图。理论板数按腺苷峰计算大于2 000，色谱分离度大于1.5。阴性对照溶液谱图中在此位置无干扰峰出现(见图1)。

2.4线性关系考察

分别吸取腺苷对照品溶液(质量浓度为8.3040 μg/ml)1，3，5，7，9 ml，置10 ml容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀。各精密吸取20 μl注入高效液相色谱仪，按2.1项色谱条件进行测定。结果以浓度为横坐标，相应峰面积为纵坐标，进行线性回归，计算回归方程为y=25 838x+11 004，r=0.999 8。结果表明：腺苷在0.830 4-8.304 0 μg/ml范围内峰面积值与样品质量浓度有良好的线性关系。

2.5重复性试验

取同一批号复方胃宁片样品6份，每份0.4 g，精密称定，按2.2.2项下方法制成供试品溶液，精密吸取供试品溶液20 μl，按2.1项下色谱条件测定，计算腺苷的含量，RSD为1.9%。结果表明：本试验方法重复性良好。

2.6稳定性试验

取同一供试品溶液，分别在放置0，2，4，6，8，12 h后进行测定，进样量20 μl，RSD为1.5%。结果表明：供试品溶液在12 h内基本稳定。

2.7加样回收率试验

取已知含量的同一批号供试品9份，每份约0.25 g，精密称定，至50 ml容量瓶中，分别精密加入一定量的腺苷对照品，按2.2.2项下方法制备成供试品溶液，按2.1项下色谱条件测定，计算回收率。结果表明：方法可靠、易行，具有良好的回收率(见表1)。

图1　对照品、复方胃宁片和缺猴头菌粉和延胡索阴性对照高效液相色谱图Figure 1　HPLC chromatograms of reference substance,sample and negative sample

表1加样回收率试验结果

Table 1Results of recovery tests

原有量(μg)加入量(μg)测得量(μg)回收率(%)平均回收率(%)RSD(%)48.11924.91273.734102.8297.862.647.67524.91272.05397.8647.79224.91271.58695.5148.49349.82497.04497.4548.04949.82495.15694.5547.72249.82496.45497.8147.37174.736121.86999.6848.14374.736120.76497.17

2.8样品测定

我们选择不同批次的延胡索药材、猴头菌粉和海螵蛸药材随机做成10批样品，分别按2.2.2项下方法制备供试品溶液，按2.1项下色谱条件进样，记录色谱图，结果见表2。

表2不同批号的样品测定结果(n=3)

Table 2Contents of adenosine in samples(n=3)

批号腺苷(μg/粒)RSD(%)2015030191.31.32015030293.21.12015040169.60.42015040267.40.92015040366.81.22015050143.41.92015060119.52.02015070144.70.52015070245.91.22015080149.61.6

3讨论

3.1考察指标的选择

我们首先参考猴头菌粉原料质量标准进行多糖和肽类的考察，结果发现，复方胃宁片所用的三种原料延胡索、猴头菌粉、海螵蛸均含有多糖和肽类。其后选择甘氨酸、亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸、尿苷等进行考察，三种原料也均含有以上成分，如作为含量测定指标无法有效地控制产品质量。经考察，延胡索中也含有少量腺苷，但经过反复筛选，未找出某单一有效成分仅为猴头菌粉所有，故最终选定腺苷作为含量测定的检测指标。

3.2预处理方法的选择

我们对不同提取溶剂(水、50%甲醇、甲醇、50%乙醇、乙醇)进行考察，乙醇提取基本测不出有效成分，50%甲醇提取效果最好，且超声30 min提取最为完全，故确认此方法做为供试品的处理。

3.310批样品含量结果差别很大，经分析为原药材的腺苷含量不同所致

我们从10家药店分别购买回延胡索药材，从两家药厂购买回6批猴头菌粉，参照2.2.2项下的样品处理方法进行考察，腺苷含量结果差别很大，高者能达到低者的4倍以上。由于样品量少尚不足以代表，因此制定复方胃宁片的腺苷含量限度，还有待对猴头菌粉和延胡索药材的腺苷进行进一步的考察。

参考文献：

[1]国家药典委员会.国家药品监督管理局药品标准：化学药品地方标准上升国家标准第十三册[S].2002：13-14.

[2]国家药典委员会.卫生部药品标准：中药成方制剂第八册[S].1993：125.

[3]刘晓明，闫云宇，毕华，等.猴头菇菌丝体和发酵液中多糖的含量测定[J].中国医药科学，2013，3(6)：94-95.

[4]郝涤非.猴头菇含氮物质测定[J].北方园艺，2011，(23)：152-153.[5]李迎雪，戴肖东，詹亚光.HPLC法测定猴头菌菌丝体中麦角甾醇含量[J].食用菌，2010，32(6)：63-64.

[6]张立秋，刘敬，张晓燕.紫外线照射对猴头菌菌丝体多糖含量的影响[J].人参研究，2015，(4)：46-47.

[7]张鹏.珊瑚状猴头菌子实体化学成分及总甾体含量测定的研究[D].长春：吉林农业大学，2012.

[8]钟倩霞,吕广萍,彭亮,等.高效液相色谱法测定不同产地棘托竹荪中4个核苷含量[J].药物分析杂志，2014，34(3)：411-414.

[9]岳显可，曹岗，吴瑶，等.HPLC法测定猴头菇核苷类成分腺苷的含量[J].实用药物与临床，2015，18(4)：432-436.

[10]顾慧芬，庄意丽，张梦玲.HPLC法测定猴头菌片中腺苷[J].中成药，2012，34(7)：1405-1406.

Determination of contents of adenosine in compound Weining tablets by HPLC

HE Jie*,ZHANG Airong, JIANG Jianfen

(ShanxiHuayuanPharmaceuticalGroupCo.,Ltd,Taiyuan030032,China;*Correspondingauthor,E-mail:hejie_huayuan@163.com)

Abstract：ObjectiveTo establish a HPLC method for determining the content of adenosine in compound Weining tablets.MethodsHPLC was used to determine the content of adenosine with C18column(4.6 mm×250 mm,5 μm) and methanol-0.02 mol/L disodium hydrogen phosphate solution(20∶80,V/V) as the mobile phase.The flow rate was 1.0 ml/min.ResultsThe calibration curve was linear in the range of 0.830 4-8.304 0 μg/ml for adenosine.The average recovery was 97.86% and RSD was 2.6%(n=9). ConclusionThis method is precise, convenient and rapid, and can be used for the quality control of adenosine in compound Weining tablets.

Key words:compound Weining tablet;adenosine;HPLC

作者简介：贺婕,女，1978-12生，硕士，药师，E-mail:hejie_huayuan@163.com

收稿日期：2016-02-24

中图分类号：R927.1

文献标志码：A

文章编号：1007-6611(2016)05-0444-03

DOI：10.13753/j.issn.1007-6611.2016.05.010