血清TGF-β1和VEGF水平判定吉西他滨联合卡铂治疗非小细胞肺癌患者反应性临床研究*

徐 佳，刘爱宁，严霜红

(江南大学附属医院，江苏 无锡 214062)

血清TGF-β1和VEGF水平判定吉西他滨联合卡铂治疗非小细胞肺癌患者反应性临床研究*

徐 佳，刘爱宁，严霜红

(江南大学附属医院，江苏 无锡 214062)

摘 要:目的:探讨TGF-β1和VEGF是否可以作为非小细胞肺癌(NSCLC)患者化疗后对药物反应性的生物学标志。方法:选取我院2012年4月至2014年4月收治的58例NSCLC患者作为NSCLC组，同期健康志愿者60名为对照组。NSCLC组吉西他滨联合卡铂化疗2个疗程，化疗前后酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测血清中TGF-β1和VEGF水平，同时在化疗结束后评价临床疗效。结果:NSCLC组患者治疗前的血清TGF-β1和VEGF水平明显高于对照组，差异均有统计学意义(P＜0. 05)；化疗后，CR+PR组患者血清TGF-β1和VEGF水平较化疗前明显降低，相反，化疗后SD+PD组患者血清TGF-β1和VEGF水平较化疗前明显升高，差异均有统计学意义(P＜0.05)。结论:非小细胞肺book=56,ebook=60癌患者血清中TGF-β1和VEGF水平升高，且治疗后TGF-β1和VEGF变化能反映患者对吉西他滨联合卡铂化疗的反应性。

关键词:转化生长因子β1； 血管内皮生长因子； 非小细胞肺癌； 化 疗

肺癌是最常见的恶性肿瘤之一，其发病率和致死率呈逐年上升的趋势，据统计，全球恶性肿瘤患者中约13%的患者为肺癌[1]。本文通过检测患者在吉西他滨联合卡铂化疗前后血清TGF-β1和VEGF水平，评估TGF-β1和VEGF水平变化是否可以作为判定患者对吉西他滨联合卡铂化疗的反应性。

1 资料与方法

1.1一般资料:选取我院2012年4月至2014年4月收治的58例非小细胞肺癌(NSCLC)患者作为NSCLC组，同时间段内选取60名健康志愿者纳入对照组。58 例NSCLC患者中女性患者17例，男性患者41例，平均年龄为57±2.7岁；对照组中女性21例，男性39例，平均年龄56±2.4岁。纳入研究的NSCLC患者符合以下标准:①组织学或病理诊断证实为非小细胞肺癌以及卡氏评分≥70分；②肝肾及血液功能正常；③心电图显示心功能正常。NSCLC组排除标准为:①NSCLC并发其它内科疾病或肾结石的患者；②患有除NSCLC意外的其它肿瘤的患者；③NSCLC并发风湿及免疫性疾病、血管栓塞疾病、血液凝固障碍或其它心血管疾病患者；④临床和病理资料不完整的患者；⑤怀孕和哺乳期妇女。60名入选的健康志愿者为我院体检中心体检的健康人员，所有健康受试者无任何肺部疾病。

1.2治疗方法:所有NSCLC组患者采用吉西他滨联合卡铂进行化疗，吉西他滨(gemcitabine，GEM，200mg/支，江苏豪森制药有限公司，批号:120210)1250mg/ m2加入250mL生理盐水中，静脉滴注，1次/ d，8d为1个疗程，卡铂Carboplatin，100mg/支，齐鲁制药，批号: 1110112ES)300mg/ m2加入250mL生理盐水中，静脉滴注，1次/ d，21d为一个疗程，所有患者治疗2个疗程。

1.3血清TGF-β1和VEGF水平的检测:在NSCLC组患者治疗的前1d和2个疗程治疗结束后取患者隔夜空腹的血液3mL，同时取60名健康受试者的隔夜空腹外周血液3mL。将收集的血液样品3500rpm/ s离心5min，将分离的血清置于-20℃冰箱冷藏待下一步的检测。TGF-β1和VEGF浓度采用双抗夹心酶联免疫吸附法(ELSIA)检测(ELSIA试剂盒购自上海岚派生物公司)。检测过方法参照文献[3]进行。根据标准曲线计算所测各样品的浓度值。每个标准品和空白孔以及样品孔均做复孔。

1.4化疗后疗效的评估:NSCLC组患者2个疗程结束后的1周行肺部CT扫描检查，根据文献[6]制定实体瘤疗效评价标准进行评价:①完全缓解(CR):所有已知病灶消失；②部分缓解(PR):已知病灶线性测量面积减少≥30%；③病情稳定(SD):已知病灶线性测量面积减少＜30%或增加＜20%；④病情进展(PD):已知病灶和新病灶增加＞20%。化疗后有效为CR+PR，无效为SD+PD。

1.5统计学方法:应用SPSS20.0统计软件进行数据分析，计量资料以均数±标准差(±s)表示，组间比较采用独立样本t检验，组内比较采用配对样本的t检验，以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结 果

2.1NSCLC患者化疗前血清TGF-β1和VEGF水平: 58例NSCLC患者化疗前检测的血清TGF -β1和VEGF水平在不同性别、年龄、病理类型间比较差异均无统计学意义(P＞0.05)，但在不同临床分期间比较差异均有统计学意义(P＜0.05)，见表1。

表1　58例NSCLC患者化疗前血清TGF-β1和VEGF水平(±s)

表1　58例NSCLC患者化疗前血清TGF-β1和VEGF水平(±s)

项目　例数　TGF-β1(ng/ mL)　t　p　VEGF(pg/ mL)　t　p性别　男　41　41.19±10.84　1.01　0.158　246.8±52.7　1.0599　0.1468 女17　38.16±9.71　263.1±54.8年龄　≤70　39　39.91±9.15　0.329　0.3716　249.7±50.8　0.4147　0.3399 ＞70　19　40.79±10.37　255.7±53.6病理类型　鳞状细胞癌　26　37.98±9.42　1.4248　0.0798　256.2±51.7　0.5322　0.2983腺癌　32　42.06±11.87　248.9±49.3临床分期　Ⅰ、Ⅱ　40　36.83±8.49　3.817　0.0001　243.5±48.6　1.9764　0.026Ⅲ、Ⅳ　18　47.92±13.41　269.9±51.4

2.2NSCLC患者化疗前与健康受试者血清TGF-β1 和VEGF水平比较:58例NSCLC患者化疗前检测的血清TGF-β1和VEGF水平明显高于健康受试者，差异具有统计学意义(P＜0.05)。见表2。

表2　58例NSCLC患者化疗前与健康受试者血清TGF-β1和VEGF水平比较

2.3NSCLC患者化疗前后血清TGF-β1和VEGF水平变化:对58例化疗的NSCLC患者进行疗效评价，其中CR为0，PR63.79%(37/58)，SD20.69%(12/58)，PD(9/58) 15. 52%，临床有效(CR + PR) 37例(63. 79%)，临床无效(SD+PD)21例(36.21%)。联合方案化疗后有效(CR+PR)的患者血清TGF-β1和VEGF水平明显较化疗前降低，差异显著(P＜0.05)。相反，联合方案化疗后无效(SD+PD)的患者血清TGF-β1 和VEGF水平明显较化疗前升高，差异显著(P＜0. 05)，见表3。

表3　58例NSCLC患者化疗前后血清TGF-β1和VEGF水平变化

3 讨 论

TGF-β1是一种能够调节细胞生长、分化、免疫抑制和肿瘤生成的多功能细胞因子。有研究表明，肿瘤分泌的TGF-β1能够促进肿瘤的转移、血管生成以及免疫逃避等，如乳腺癌及肺癌等[4]。与此研究一致的是，血清TGF-β1高水平的NSCLC患者生存期普遍较差[5]。我们的研究也表明，血清TGF -β1水平在NSCLC患者化疗前后均较正常健康人高。正常情况下，TGF-β1和其它组织因子之间的相互抑制处于一个平衡状态，然而，当过度表达TGF-β1而打破这个平衡时，那么它的表达就有利于肿瘤的进展。因此，TGF -β1长期过度在肿瘤微环境中表达将增强肿瘤细胞的侵袭及迁移能力，从而促进肿瘤的转移。在我们的研究中，联合化疗方案治疗2个疗程后，NSCLC有效的患者血清中TGF-β1水平较化疗前明显降低，但是，显示出抗药性的无效组NSCLC化疗患者血清中TGF-β1水平变化则正好相反。药物敏感的有效组NSCLC患者血清中TGF-β1水平较化疗前明显降低的原因可能是由于肺部肿瘤病灶的减小，从而导致血液中释放的TGF-β1减少。相反，抗药性的无效组NSCLC患者则可能是由于肿瘤的复发和转移造成的。

非小细胞肺癌的生长、侵袭和转移受到肿瘤血管生成的影响，而VEGF则是目前已知的能够调控肿瘤血管的生成最强细胞因子之一，VEGF能够直接促进血管内皮细胞增殖的有丝分裂，同时还能参与蛋白的水解以及细胞外基质基底膜的降解，从而促进血管内皮细胞迁移，为肿瘤新生血管生成提供良好的条件，此外，VEGF还能够直接作用于肿瘤细胞表面的相应受体，促进肿瘤病灶的生长。我们的研究结果表明，NSCLC患者联合方案化疗前后血清中VEGF的水平能够反映出肿瘤对药物的反应性。这一结果表明，血清中VEGF的水平可以作为生物标志物，反映NSCLC患者对吉西他滨联合卡铂化疗的反应性。药物敏感的有效组NSCLC患者血清中VEGF水平较化疗前明显降低，其原因可能是肿瘤新生血管减少，导致肿瘤营养和微环境发生改变，从而导致肿瘤病灶减小，使肿瘤表达的VEGF减少，释放入血液中的VEGF也同时减少。相反，抗药性的无效组NSCLC患者则可能是病情无法得到有效控制，肿瘤进一步恶化导致肿瘤表达的VEGF增多而释放入血液中，释放出来的VEGF进入肿瘤微环境后，通过改造微环境，如增加各种蛋白酶和肿瘤基质降解酶的分泌、促进新生血管的形成等来进一步促进肿瘤的进展，包括发生远处的侵袭和转移。

近年来，利用联合化疗的方案进行NSCLC的治疗已经成为一个重要的研究领域。越来越多的研究表明，联合化疗能有效地抑制肿瘤新生血管的生成，从而能够有效地抑制肿瘤的生长、侵袭和转移，达到延长患者生存期的目的。然而，对化疗药物的敏感性降低这又成为了NSCLC治疗面临的难题之一，确定患者在化疗时对药物的反应性，是临床治疗制定化疗方案的有效依据之一。因此寻找反映化疗反应性的血液生物学标志物非常重要，本研究使用吉西他滨联合卡铂对NSCLC患者进行2个疗程的化疗。结果显示，血清TGF-β1和VEGF水平变化能够有效的反映联合化疗方案治疗NSCLC的效果，这提示，在NSCLC联合化疗中，使用血清TGF-β1和VEGF作为血液生物标志物反映患者对药物的反应性是可行的，可以为制定化疗方案提供切实的依据。

参考文献:

[1] Wu H，et al. Association between the telomerase reverse transcriptase (TERT) rs2736098 polymorphism and cancer risk: evidence from a case-control study of non-small-cell lung cancer and a meta-analysis[J].PLoS One，2013，8 (11): 763～772.

[2] Aberle D R，et al.Reduced lung-cancer mortality with lowdose computed tomographic screening [ J]. N Engl Med，2011，365(5): 395～409.

[3] 陈洁，苟淑萍，栾文革，等.重组人血管内皮抑制素联合顺铂治疗非小细胞肺癌恶性胸腔积液的疗效及对VEGF、HIF-1α肿瘤标志物的影响[J].临床和实验医学，2014，(21):1778～1780.

[4] 黄永红.外周血及大肠癌组织TGF-β1含量检测及临床意义[J].南方医科大学学报，2014，(12):1790～1793.

[5] 卢红阳.小细胞肺癌肿瘤组织VEGF表达及其与预后的

Serum TGF-β1 and VEGF Levels Predicting Patients Response in Gemcitabine Pluscarboplatin Treating Non-small Cell Lung Cancer

XU Jia，LIU Aining，YAN Shuanghong
(The Affiliated Hospital of Jiangnan University，Jiangsu Wuxi 214062，China)

Abstract:Objective: To investigate whether the serum levels of transforming growth factor beta 1 (TGF-β1) and vascular endothelial growth factor (VEGF) are biomarkers of response to the chemotherapy. Method: A total of 118 subjects were recruited at our hospital between April 2012 and April 2014，including 58 NSCLC patients receiving chemotherapy (gemcitabine plus carboplatin)(NSCLC group) and 60 healthy controls(control group).Serum TGF-β1and VEGF levels were measured before and after chemotherapy using enzyme-linked immunosorbent assay (ELSIA)，and the serum TGF-β1and VEGF levels were measured when undergoing physical medical examination. The clinical efficacy was evaluated after chemotherapy. Result: Compared to control group，the serum TGF-β1and VEGF levels were significantly higher in NSCLC group before chemotherapy(P＜0.05).Importantly，serum TGF-β1and VEGF levels decreased significantly after chemotherapy in CR+PR group in comparison with before chemotherapy(P＜0.05). By contrast，serum TGF-β1and VEGF levels were markedly higher after chemotherapy in the SD+PD group in comparison with before chemotherapy(P＜0.05). Conclusion: The serum TGF-β1and VEGF levels of NSCLC patients were raised，which can show the patients' respense to GC regimen

Key words:TGF-β1； VEGF； NSCLC； Chemotherapy

文献标识码:B

doi:10.3969/ j.issn.1006-6233.2016.01.019

文章编号:1006-6233(2016)01-0055-05

*基金项目:江苏省自然科学基金青年基金项目，(编号:BK2012101)