巨噬细胞移动抑制因子和血管内皮生长因子在食管癌组织中的表达情况及临床意义

董媛媛，刘石萍，孔卫平，史延卿，王海利

(1. 河北省邯郸市人民医院，河北 邯郸 056002；2. 河北省邯郸市中心医院，河北 邯郸 056001；3. 河北省邯郸市妇幼保健院，河北 邯郸 056001)



巨噬细胞移动抑制因子和血管内皮生长因子在食管癌组织中的表达情况及临床意义

董媛媛1，刘石萍2，孔卫平3，史延卿2，王海利1

(1. 河北省邯郸市人民医院，河北 邯郸 056002；2. 河北省邯郸市中心医院，河北 邯郸 056001；3. 河北省邯郸市妇幼保健院，河北 邯郸 056001)

[摘要]目的研究巨噬细胞移动抑制因子(MIF)和血管内皮生长因子(VEGF)在食管鳞癌组织中的表达情况及临床意义。方法选取食管鳞癌组织标本58例为研究对象，同时选取癌旁正常食管组织标本40份为正常对照，应用微波EliVisionTM免疫组织化学法检测2组组织标本中MIF和VEGF的表达情况，并进行分析研究。结果在食管鳞癌组织中MIF和VEGF阳性表达率显著高于癌旁正常食管组织(P均<0.05)，表达定位于细胞核和细胞质。两者的表达情况与淋巴结转移、分化程度及病理分期有明显关系(P均<0.05)；相关性分析发现，MIF与VEGF呈正相关表达(P<0.05)。结论MIF和VEGF在食管鳞癌组织中阳性表达率高，二者表达情况在食管鳞癌的发生、发展和转移过程中发挥不同的作用，临床上检测二者可为评估食管鳞癌恶性程度提供参考。

[关键词]食管鳞癌组织；MIF蛋白；VEGF蛋白；EliVisionTM免疫组化

食管癌是比较多见的恶性肿瘤，其发病率居恶性肿瘤发病的第6位，病死率居恶性肿瘤死亡的第4位。食管鳞癌属于最主要的食管癌病理类型，是目前食管癌的主要研究对象。考虑到因食管鳞癌的早期诊断比较困难，大多数患者出现临床症状就诊时已属中、晚期，临床亟待找到一种具有实用价值的解决方法。巨噬细胞移动抑制因子(MIF)在细胞增殖、凋亡等方面起着重要作用；血管内皮生长因子(VEGF)是血管新生的重要的促进因子，血管的形成是肿瘤生长、浸润、转移和侵袭的基础。本研究分析了二者在食管癌黏膜组织中的表达水平变化及与临床病理特征的关系，旨在为食管癌的早期发现、监测、预后的判断,确定复发和转移的风险提供依据。

1临床资料

1.1一般资料选择2011年1月—2013年12月邯郸市人民医院和邯郸市中心医院收治并存档的58例食管鳞癌病例的蜡块，男35例，女23例；年龄47～78岁，中位年龄63.6岁。由邯郸市中心医院高年资病理医师按照WHO标准[1]对全部病例的切片进行复查，均确保病历资料的准确性。并选取同期行食管鳞癌切除患者的食管上、下残端40例作为正常食管黏膜组织进行对照。

1.2方法采用微波EliVisionTM法, 参照文献[2-3]报道方法操作，阳性对照切片为已知阳性食管癌切片，阴性对照切片为PBS缓冲液代替一抗。试剂盒、二硝基联苯胺(DAB)显色液及兔抗人MIF单克隆抗体和兔抗人VEGF多克隆抗体均购自武汉博士德生物技术有限公司。

1.3结果判断MIF阳性主要定位于细胞核，VEGF阳性表达则主要定位于细胞质，阳性信号以各种抗体在细胞核或胞浆内出现棕黄色颗粒为标准。随机取每张切片的5个高倍视野(×400)，阳性细胞数<5%为(-)，5%～25%为(+)，>25%～50%为()，>50%为()。(～)为阳性表达。

1.4统计学方法采用SPSS 16.0统计软件处理数据。计数资料采用2检验；相关性分析采用Pearson方法。P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1MIF和VEGF在正常食管组织、食管鳞癌组织中的表达情况40例正常食管黏膜组织中MIF阳性表达4例(10%)，VEGF阳性表达7例(18%)；58例食管鳞癌组织中MIF阳性表达35例(62%)，VEGF阳性表达44例(76%)。2组MIF及VEGF阳性表达率比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。MIF和VEGF在食管鳞癌组织中的表达情况见图1和图2。

图1　MIF在食管鳞癌组织中的表达(×400)

2.2食管鳞癌中MIF和VEGF的表达与临床病理指标的关系食管鳞癌中MIF和VEGF的表达与组织学分级、临床病理分期、肌层浸润深度以及淋巴结转移有关(P均<0.05)。见表1。

2.3食管鳞癌组织中MIF和VEGF的相关性分析食管鳞癌组织中MIF和VEGF的表达呈明显正相关(r=-3.233，P<0.05)。见表2。

图2　VEGF在食管鳞癌组织中的表达(×400)

例

表2　MIF和VEGF在食管鳞癌组织中的表达相关性　例

3讨论

MIF 是一种由活化T 细胞产生的细胞因子，是一种独特的促进恶性肿瘤发生的细胞因子，可以抑制肿瘤微环境中巨噬细胞的游走， 参与多种细胞的生物学功能，如影响正常细胞的有丝分裂和恶性细胞增殖、黏附、血管生成和器官纤维化等，与多种恶性肿瘤的发生、进展、转移及预后有密切关系。临床上检测发现MIF在正常人体血清中呈低水平表达，而在前列腺癌、肝癌、肺癌、乳腺癌、黑色素瘤等[4-7]恶性肿瘤患者的血清中检测到MIF呈过度表达。 研究证实MIF在肿瘤组织中的主要作用机制是诱导肿瘤血管生成和降解ECM及基底膜使其发展、浸润，首先MIF诱导巨噬细胞增加金属蛋白酶(MMPs)的分泌[8]，MMPs是降解肿瘤组织ECM及基底膜的必要步骤；接着参与肿瘤的血管新生过程，血管生成需要白细胞介素(IL)和组织生长因子等促血管生长因子的调控，MIF可以通过调控肿瘤细胞达到控制促血管生长因子分泌[9]。本研究结果显示MIF在食管癌组织中表达水平明显高于正常食管组织，说明MIF蛋白在食管鳞癌中的表达水平的增高参与了食管鳞癌的发生。进一步分析发现，在食管鳞癌组中MIF蛋白的表达与cTNM、分化程度和淋巴结转移有关 ，其中淋巴结转移组中差异较为明显，提示MIF蛋白高表达在食管癌的浸润、进展、发生转移中发挥一定的促进作用，其作用机制印证MIF蛋白通过降解肿瘤组织ECM及基底膜和促进微血管形成等方面参与肿瘤转移的各个环节。检测其在食管鳞癌的水平高低有一定的临床价值和实际意义。

肿瘤不管在转移还是自身需要的营养均需要通道路径提供运输，其中新生的血管扮演着重要的角色。新生血管不仅为肿瘤生长提供所需的营养物质，还为癌细胞播散提供途径。有研究发现VEGF和MMPs共同作用可以通过降解血管内皮细胞基质、降低血管屏障作用，使新生血管基底膜缺损加重[10]，并通过渗透作用，促进大量的癌细胞进入血液循环，从而在多种肿瘤的血管形成、浸润、转移中起关键作用[11]。检测发现食管鳞癌患者血清中VEGF水平的升高[12]，反映出癌症患者血清中VEGF水平升高从某种程度上促进癌组织的发展，为肿瘤的侵袭性生长提供了条件，在肿瘤血管新生过程中起到重要的作用。研究发现食管鳞癌组织中VEGF的表达水平与肿瘤分化、浸润深度、淋巴结转移、TNM分期有关[13]，本研究也得到了相同的结果，这些证据证实VEGF和肿瘤分化、TNM分期等密切相关，提示VEGF在食管癌发展、浸润过程中发挥了一定作用。

本研究发现，MIF蛋白和VEGF蛋白表达呈正相关，表明两种蛋白的高表达在食管癌的发生、发展、浸润转移过程中起到协同作用，MIF可能参与和促进肿瘤血管生成，肿瘤血管新生是依赖于多因子调节的病理过程，其中VEGF是最重要的调节途径之一。MIF可能是通过上调VEGF的表达，进而刺激肿瘤血管新生或血管形成，从而促进肿瘤的浸润和转移。联合检测MIF及VEGF表达情况，有助于临床对食管癌转移及预后进行评估，值得临床推广。

[参考文献]

[1]Yoshinaga K,Ito K,Moriya T,et al. Roles of intrinsic angogenesis in hibitor, vasohibin,in cervical carcinomas[J]. Cancer Sci,2011,102(2):446-451

[2]宋文庆,武世伍,俞岚,等. maspin在食管鳞状细胞癌中的表达及其与微血管密度的关系[J]. 中国组织化学与细胞化学杂志,2013,33(3),25-29

[3]李明珠,戴顺东,齐新阳,等. 结直肠癌中δ-catenin的表达与癌细胞增殖状态的相关性[J]. 中国医科大学学报,2013,40(12)：1065-1068

[4]Bando H，Matsumoto G，Bando M,et al. Expression of maerophage migration inhibitory faetor in human breast cancer:association with nodal spread[J]. Jpn J Cancer Res,2002,93(4):389-396

[5]He XX,Yang J,Ding YW，et al. Increased epithelial and serum expression of migration inhibitory factor(MIF) in gastric cancer:potential role of MIF in gastric carcinogenesis[J]. Gut,2006,55(6):797-802

[6]White ES,Flaherty KR,Carskadon S,et al. Macrophage migration inhibitory faetor and CXC chemokine expression in non-small cell lung cancer:role in angiogenesis and Prognosis[J]. Clin Cancer Res,2003,9(2):853-860

[7]Akbar SM,Abe M,Murakami H,et al. Macrophage migation inhibitory factorin hepatocellular careinoma and liver cirrhosis:relevance to pathogenesis[J]. Cancer Lett,2001,171(2):125-132

[8]刘倩,杨红,张尚福. MIF和CD147在非小细胞肺癌中的表达及意义[J]. 四川大学学报：医学版,2010，41(1)：85-90

[9]邓玮,易永芬,闫田静,等. 胃癌组织和细胞中P115、M IF的表达及意义[J]. 第三军医大学学报,2011,33(3):241-245

[10] 徐海涛,张庆广,张连国,等. VEGF在食管鳞癌中的表达及意义[J]. 滨州医学院学报,2010，33(3):182-185

[11] Lee ES,Hua SW,Bell DH. Differences in cell proliferation and prognostics significance of prolifetating cell nuclear antigen and Ki-67 antigen immunoreaction in situ and invasive carcinomas of the extrahepatictract[J]. Cancer,2005,78(5):1001-1005

[12] 刘石萍,董媛媛,孔卫平,等. MIF、MMP-9和VEGF在食管癌组织中的表达及临床意义[J]. 大连医科大学学报,2015，37(2):133-136

[13] Chen L,Ren GS,LI F,et al. ExPression of Livin and vaseular endothelial growth factor in different clinieal stages of human esophageal eareinoma[J]. World J Gastroenterol，2008，14(37):5749-5754

[收稿日期]2015-11-19

[中图分类号]R735.1

[文献标识码]B

[文章编号]1008-8849(2016)12-1331-03

doi:10.3969/j.issn.1008-8849.2016.12.028