RCAS1在食管癌中的表达及其临床意义

刘　婷，李　晶，高　峰

(河北省优抚医院，河北 石家庄 050051)



RCAS1在食管癌中的表达及其临床意义

刘婷，李晶，高峰

(河北省优抚医院，河北 石家庄 050051)

[摘要]目的评估受体结合型肿瘤抗原(RCAS1)与人食管鳞癌发生发展的关系及临床意义。方法选取61例食管鳞癌术后组织、34例癌旁非典型增生组织及21例正常黏膜上皮组织，采取免疫组化SP法测定各组织中RCAS1蛋白表达情况，分析RCAS1蛋白表达情况与食管鳞癌患者临床病理参数的关系。结果食管鳞癌患者RCAS1阳性表达率与年龄、性别无关(P均>0.05)，与肿瘤浸润深度、淋巴结转移情况、组织分化程度相关(P均<0.05)。结论RCAS1在食管鳞癌组织中的异常表达与肿瘤的浸润深度、淋巴结转移和组织分化程度有明显的相关性，检测RCAS1蛋白表达情况有助于食管癌的诊断、临床治疗及预后判断。

[关键词]食管癌；RCAS1蛋白；免疫组化

食管癌是一种发生在食管上皮组织中的恶性肿瘤,约占全部恶性肿瘤的2%[1]。自20世纪70年代至今,食管癌的发病率和病死率虽然有一定程度的下降,但是食管癌高发地区的发病率仍达478.87/10万,标化的病死率达19.90/10万[2]。我国在世界上属于食管癌的高发地域之一,其中又以河南省为最高。食管癌以食管鳞状细胞癌(鳞癌)为最多,约占90%[3]。食管癌的发生发展过程比较复杂,其发生发展的机制目前尚未完全研究清楚,只是猜测可能与多个基因及分子水平的变化密切相关。受体结合型肿瘤抗原(receptor-binding cancer antigen expressed On SiSo cells，RCAS1)是一种人类肿瘤相关抗原，可以帮助肿瘤逃避免疫监视，从而使肿瘤细胞得以生存。本研究探讨了RCAS1在食管癌发生进展中的作用，旨在为该病的诊治及预后判断提供一定依据。

1临床资料

1.1一般资料选取我院2010年3月—2014年3月61例经手术切除的食管鳞癌病理组织存档蜡块，其中男34例,女27例；年龄35～79(61.27±9.10)岁；手术前均未接受放化疗和免疫制剂治疗。每例标本均于癌灶、癌旁组织和正常组织分别取材。癌旁非典型增生组织要求距癌灶边缘3 cm内；正常食管黏膜上皮组织自手术残端组织获取,要求距癌组织3 cm以上。共获得癌旁组织标本34例，正常食管黏膜组织标本21例。61例食管鳞癌标本中，浸润深度未侵及外膜35例，侵及外膜26例;有淋巴结转移29例，无转移32例;分化程度为低分化26例，中分化19例，高分化16例。

1.2方法采取免疫组化SP法测定各标本中RCAS1蛋白表达量。标本均由10%中性福尔马林固定,石蜡包埋,4 μm厚度连续切片。将石蜡切片置于由APES 处理过的载玻片上，55 ℃烤片，时间1 h。二甲苯脱蜡，梯度乙醇入水。PBS冲洗，3% H2O2溶液室温下孵育20 min，以除去内源酶。PBS冲洗，浸入pH值6.0的枸橼酸缓冲液，微波抗原修复8 min。PBS冲洗，1∶50 PBS稀释的正常山羊血清封闭，室温下20 min。倒去血清，不洗，滴加特异性一抗，4 ℃下孵育过夜。PBS冲洗，滴加特异性生物素化二抗，覆盖组织37 ℃下孵育30 min。PBS冲洗后，滴加过氧化物酶复合物，覆盖组织37 ℃下孵育30 min。PBS冲洗，滴加DAB显色试剂，覆盖组织，室温避光显色5 min。PBS冲洗，双蒸水冲洗终止显色。苏木素复染，PBS浸泡，直至切片变蓝。梯度乙醇脱水，二甲苯透明，树脂封片，镜检。染色时均设立阴性对照(以 PBS 液代替一抗)及阳性对照。

1.3阳性判定标准参考文献[1]方法，依据RCAS1免疫组织化SP法的染色程度来判定是否阳性表达，RCAS1免疫组化染色阳性细胞为细胞质与细胞膜着色，呈棕黄色颗粒。按照染色强弱情况和免疫阳性细胞占肿瘤细胞总数的构成比行综合评分，阳性细胞所占比例<10%计为1分,10%～50%计为2分,>50%计为3分;染色阴性计为0分,淡黄色计为1分,中度黄色计为2分,棕褐色计为3分。上述二者乘积计为总分，总分<3分判定为阴性,总分>3分判定为阳性。

1.4统计学方法采取SPSS 11.0软件进行统计学处理。RCAS1阳性表达率的比较采用2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1食管鳞癌组织、癌旁非典型增生组织及正常食管黏膜上皮组织中RCAS1表达情况比较在正常食管黏膜组织、癌旁非典型增生组织及食管鳞癌组织中,RCAS1的阳性表达率呈依次升高趋势,分别为28.6%(6/21)，64.7%(22/34)和85.2%(52/61)，3组RCAS1蛋白阳性表达率比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。RCAS1蛋白染色后阳性信号位于细胞质和细胞膜,呈现棕黄色颗粒；正常食管黏膜组织中仅有少量表达，癌旁非典型增生组织中有明显表达，食管鳞癌组织中强阳性表达，见图1～3。

图1　正常食管黏膜中RCAS1蛋白表达情况(SP，×400)

2.2RCAS1表达与食管鳞癌临床病理因素的关系RCAS1阳性表达率与患者性别、年龄无明显关系，与肿瘤侵润深度、淋巴结转移、组织分化程度明显相关(P均<0.05)。见表1。

3讨论

在临床实践中,虽然我国已经对食管癌的综合干预治疗进行了和正在进行诸多有益与不懈的探索和努力，并且取得了相当不错的成绩,但是，综合评价目前的临床疗效仍然不够理想,术后平均生存率仍为30%左右[4]。究其原因，主要是临床治疗过程中尚欠缺监测与评估食管癌生物学行为方面的可靠有效指标,并且缺少更有效地预防和治疗食管癌的方法与措施。

图2　食管黏膜不典型增生组织中RCAS1蛋白表达情况(SP，×400)

图3　食管鳞癌组织中RCAS1蛋白表达情况(SP，×400)

临床病理参数n阳性2P年龄≤60岁>60岁253621(84.0)30(83.3)0.0170.849性别男女342729(85.3)22(85.2)0.0130.914浸润深度未及外膜侵入外膜352627(77.1)24(92.3)3.1180.029淋巴结转移有无382336(94.7)15(65.2)3.6290.005组织分化程度低分化中分化高分化27181625(92.6)15(83.3)10(62.5)5.1890.036

肿瘤的发生发展过程中自始至终贯穿着癌基因、抑癌基因的改变。1999年Nakashima等[5]发现一个新的肿瘤相关抗原-SiSo细胞表达的RCAS1，它可以被单克隆抗体22-1-1识别，并发现该抗原正是由eba99编码。RCAS1总共有213个氨基酸，其N端第8～27位的氨基酸属于跨膜段，C端第179～206位的氨基酸为盘绕结构，由此即可判断出RCAS1归为II型膜蛋白，能够以盘绕结构的形式构成寡聚体。此外，RCAS1还有可溶性形式存在，可在细胞代谢过程中被分泌到细胞外[5]。RCAS1被发现之初是作为妇科肿瘤的标志物，子宫颈鳞状上皮细胞癌组织中RCAS1的表达率约为87%,子宫颈腺癌组织中RCAS1的表达率也为87%,而子宫内膜腺癌中RCAS1的表达率约为66%,卵巢癌组织中RCAS1的表达率为58%；同时RCAS1在肿瘤细胞的胞膜与胞浆均有一定表达[6]。之后相关研究表明, RCAS1在多种恶性肿瘤中呈现高表达，如肺癌、乳腺癌、子宫肿瘤、胆管癌、肝癌、胃癌等，而且RCAS1蛋白表达程度与肿瘤的分化、转移及预后相关[7-8]。免疫组织化学研究结果表明，约有98%的胃癌患者能检测到RCAS1表达[7]。RT-PCR和免疫组织化学检测结果表明，在进展期结肠癌中RCAS1呈现高水平表达,在正常结肠组织中却仅能检测到微弱的表达[9]。近年有研究发现，RCAS1在胰腺癌、皮肤肿瘤及霍奇金淋巴瘤等许多肿瘤组织中均有一定表达[10]。基础研究指出免疫系统的一部分细胞可以表达出RCAS1受体，比如CD3+T细胞与NK细胞表面就有RCAS1受体分子存在，尤其是当它们被某些因素激活后，RCAS1蛋白则作为配体与这些表达其受体的细胞结合，即T细胞、NK细胞，使细胞生长周期出现停滞，或细胞显示凋亡[1，11]。因而，肿瘤细胞可能是以表达RCAS1蛋白的方式来降低机体免疫系统的自我保护开启程度，并逃避免疫监视，这样肿瘤细胞即能有条件生存。综上，RCAS1有可能成为临床上肿瘤基因治疗的新的靶点。

本研究结果表明,在正常食管黏膜、癌旁非典型增生及癌组织中,RCAS1蛋白阳性表达率依次升高；RCAS1阳性表达率与患者的性别、年龄无关，而与肿瘤浸润深度、淋巴结转移、组织分化程度有关。提示RCAS1在食管鳞癌组织中的异常表达与肿瘤的浸润深度、淋巴结转移和组织分化程度有明显的相关性，检测RCAS1蛋白表达情况有助于食管癌的诊断、临床治疗及预后判断。

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[2]李连弟,张思维,鲁风珠,等. 中国恶性肿瘤死亡谱及分类构成特征研究[J]. 中华肿瘤杂志,1997,19(5):323

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Expression of RCAS1 in esophageal carcinoma and its clinical significance

LIU Ting, LI Jing, GAO Feng

(Youfu Hospital of Hebei Province, Shijiazhuang 050051, Hebei, China)

Abstract:Objective It is to evaluate the relationship between the receptor-binding cancer antigen expressed on SiSo cells (RCAS1) with the occurrence and development of human esophageal squamous cell carcinoma and clinical significance. Methods 61 cases of esophageal squamous cell carcinoma tissues and 34 cases of paracancerous atypical hyperplasia tissues and 21 cases of normal mucosa tissue were selected, and the expression of RCAS1 protein were detected by immunohistochemical SP method. The relationship between the expression of RCAS1 protein and the clinicopathological parameters in patients with esophageal squamous cell carcinoma was analyzed. Results The rate of RCAS1 positive expression in patients with sex, age and has nothing to do with benign or malignant tumor related. The positive expression rate of RCAS1 in patients with esophageal squamous cell carcinoma was not related with age and sex (all P>0.05), and it was significantly related to the depth of tumor invasion, lymph node metastasis, and the degree of differentiation (all P<0.05). Conclusion the abnormal expression of RCAS1 in the esophageal squamous cell carcinoma tissue is significantly related to tumor invasion depth, lymph node metastasis and tissue differentiation degree, the detection of the RCAS1expression is helpful to the diagnosis, clinical treatment and prognosis of esophageal carcinoma.

Key words:esophageal cancer; receptor-binding cancer antigen expressed on SiSo cells protein; immunohistochemistry

[收稿日期]2015-10-10

[中图分类号]R735.1

[文献标识码]A

[文章编号]1008-8849(2016)15-1629-03

doi:10.3969/j.issn.1008-8849.2016.15.010

[作者简介]刘婷，女，主管检验师，研究方向为医学检验。