胎盘生长因子抗体对大鼠子宫内膜异位症模型的治疗作用

曾昭智，张锦红，陆少君

(广东药科大学 实验动物中心，广东 广州 510006)



胎盘生长因子抗体对大鼠子宫内膜异位症模型的治疗作用

曾昭智，张锦红，陆少君

(广东药科大学 实验动物中心，广东 广州 510006)

摘要:目的 探讨胎盘生长因子抗体(anti-PLGF)对大鼠子宫内膜异位症模型的治疗作用。方法 自体移植法建立大鼠子宫内膜异位症模型，分别观察anti-PLGF对大鼠子宫内膜异位症模型异位子宫内膜形态结构、腹腔液血管内皮生长因子和白细胞介素-8的影响。结果 anti-PLGF 1 mg/kg剂量组能明显抑制模型大鼠腹腔液中血管内皮生长因子水平，并能显著减小大鼠子宫内膜异位组织的体积，与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05)，而腹腔液中白细胞介素-8水平无明显变化。结论 anti-PLGF通过抑制异位内膜的血管形成，从而有效抑制异位内膜的生长。

关键词:胎盘生长因子抗体； 子宫内膜异位症； 血管内皮生长因子； 白细胞介素-8

子宫内膜异位症(endometriosis，EMs)是育龄妇女的常见疾病。临床主要表现有痛经、盆腔包块或触痛的结节、不孕、月经不调等，具有侵袭性、广泛种植、易复发的特性，有类似于恶性肿瘤的远处转移和种植生长的能力，其发病机制尚未完全阐明。有研究发现子宫内膜异位症患者腹腔液及子宫内膜等局部组织中胎盘生长因子(placental growth factor，PLGF)水平明显升高[1-3]，PLGF是血管内皮生长因子(vascular epithelial growth factor，VEGF)家族成员，PLGF与受体结合后发挥生物学作用，可增加VEGF活性及诱导血管生成。白细胞介素-8(IL-8)细胞因子同样具有强生血管活性，能促进新生血管的形成，使异位内膜基底部毛细血管的数量和面积均显著增多[4]。2007年Fischer等[5]的研究证明，胎盘生长因子抗体(anti-PLGF)可以抑制肿瘤组织的血管生成，而对正常的血管没有影响。本实验从抑制血管生成的角度探讨anti-PLGF对大鼠子宫内膜异位症模型的治疗作用及其机制。

1材料

1.1药物与试剂

anti-PLGF(上海瑞齐生物技术有限公司)；白细胞介素和血管内皮生长因子ELISA检测试剂盒(上海哈灵生物科技有限公司)；沙利度胺(上海阿拉丁生化科技股份有限公司)；磷酸盐缓冲液(武汉博士德生物工程有限公司)。

1.2主要仪器

FA2004B电子天平(上海精科天美)；BA310显微镜(麦克奥迪实业集团有限公司)；3K15冷冻离心机(德国SIGMA)；Infinite 200 pro酶标仪(瑞士Tecan)。

1.3实验动物

SPF级SD大鼠，雌性，体质量180～220 g，南方医科大学实验动物中心提供，生产许可证号SCXK(粤)2011-0015。

2方法

2.1大鼠子宫内膜异位症模型建立

参照文献[6]，取雌性SD大鼠，体质量180～220 g，各鼠以40 mg/kg戊巴比妥腹腔注射麻醉，在大鼠下腹部正中靠左上方做一个1.5 cm切口，挑出左侧子宫角，结扎子宫系膜血管，再结扎需切除的子宫段的两端，切取一段1.5 cm长的子宫。在无菌的戴克隆氏液中分离子宫内膜，然后切取5 mm×5 mm的内膜组织片段，将上皮层对着腹壁，缝合于腹壁上。建模后3周，择动情期大鼠，开腹见移植子宫内膜体积增大，形成内有液体积聚并有血管形成的透明小囊泡，以体积≥20 mm3，内膜囊泡可见透明积液为造模成功标准。

2.2分组及给药

取建模成功40只大鼠，按异位内膜体积大小随机分为4组，即模型组、沙利度胺阳性药物组、anti-PLGF高、低剂量组，另取同批正常10只大鼠作为正常对照，各组每天腹腔注射1次，阳性药物组注射沙利度胺50 mg/kg，anti-PLGF高、低剂量组分别注射anti-PLGF 1 mg/kg、0.5 mg/kg，正常组和模型组注射等体积的生理盐水，连续2周。

2.3观察指标

2.3.1大鼠异位内膜体积测量除正常对照组外，其余各组动物用游标卡尺测量异位子宫内膜病灶的长、宽和高，并计算体积(V)，V=长mm×宽mm×高mm。

2.3.2腹腔液中VEGF和IL-8细胞因子的含量测定末次注射24 h后，乙醚麻醉大鼠，腹腔注射磷酸盐缓冲液(PBS)5 mL，轻揉腹部，打开腹腔，沿腹壁吸取约5 mL 腹腔液，4 ℃，2 000 r/min离心15 min，取上清液-80 ℃保存备用，腹腔液中VEGF和IL-8细胞因子含量的测定按照ELISA试剂盒说明书操作。

2.4统计学处理

3结果

3.1anti-PLGF对大鼠子宫内膜移植物体积和大致形态的影响

肉眼观察除正常对照组外，各组大鼠均在右侧腹壁见有异位病灶。模型组大鼠异位内膜生长良好，体积明显增大，呈隆起透亮的小囊状，内部充满积液，表面血管清晰可见，而给药组体积明显较模型组缩小，周围血管形成没有模型组丰富。从表1可以看出，与模型组比较，沙利度胺组、anti-PLGF高剂量组动物的内膜移植物体积明显变小，差异有统计学意义(P<0.05)，提示anti-PLGF有抑制子宫内膜异位症大鼠移植物体积的作用。

表1anti-PLGF对大鼠子宫内膜移植物体积的影响

组别剂量/(mg·kg-1)给药前体积/mm3给药后体积/mm3模型组-88.47±11.4389.86±10.87沙利度胺组5089.51±10.8841.59±3.63*anti-PLGF 高剂量组192.83±9.6652.47±6.52* 低剂量组0.591.12±11.2884.19±7.85

与模型组比较：*P<0.05。

3.2anti-PLGF对子宫内膜异位症大鼠腹腔液中VEGF和IL-8细胞因子含量的影响

模型组大鼠腹腔液中VEGF和IL-8细胞因子水平明显高于正常对照组，而anti-PLGF和沙利度胺治疗14 d 后，腹腔液中VEGF水平明显下降，差异有统计学意义，anti-PLGF对IL-8细胞因子水平无明显影响，结果见表2。

表2anti-PLGF对子宫内膜异位症大鼠腹腔液中VEGF和IL-8细胞因子含量的影响

组别剂量/(mg·kg-1)w(VEGF)/(ng·kg-1)ρ(IL-8)/(ng·L-1)正常对照组-3.27±0.76*14.22±2.46*模型组18.58±3.2144.00±8.85沙利度胺组507.15±1.24*20.23±5.87*anti-PLGF 高剂量组114.15±1.10*40.39±6.53 低剂量组0.517.25±2.3040.68±7.00

与模型组比较：*P<0.05。

4讨论

在子宫内膜异位症的发生发展过程中，新生血管可以为异位病灶提供充足的氧气和营养物质，因此血管生成是异位病灶种植和增殖的必要条件[7]，相关研究已证实，子宫内膜异位症异位病灶及腹腔液中存在多种血管生长因子且水平较正常明显升高，其中包括VEGF和IL-8细胞因子，其均能促进血管生成。PLGF是VEGF家族成员之一，PLGF与受体结合后可增加VEGF的活性，促进血管生成，PLGF在子宫内膜异位症发病过程中有一定作用，anti-PLGF或其受体抗体制剂等抑制血管生成的药物治疗可能会为子宫内膜异位症的治疗开辟一条新的途径[8]。本实验用anti-PLGF作为药物观察其对子宫内膜异位症大鼠的治疗作用，结果显示：anti-PLGF和沙利度胺能有效缩小大鼠内膜移植物体积，减少异位病灶周围血管形成，模型组中大鼠腹腔液中VEGF和IL-8细胞因子水平明显高于正常对照组，anti-PLGF和沙利度胺治疗后能降低子宫内膜异位症大鼠腹腔液中VEGF水平，使异位内膜的增殖速度降低，从而减少血管生成，降低血供，抑制异位内膜组织的生长。但anti-PLGF对腹腔液中IL-8细胞因子水平无明显影响。因此，anti-PLGF通过调节VEGF生成，抑制异位内膜组织的生长发育，达到治疗子宫内膜异位症的作用，但其对子宫内膜异位症大鼠组织及血液中VEGF和IL-8细胞因子水平的影响还不清楚，尚需进一步探讨。

参考文献:

[1] SUZNMORI N,SUGIURA-OGASAWARA M,KATANO K,et a1.Woman with endometriosis have increased levels of placental growth factor in the peritoneal fluid compared with women with cystodenomas[J]. Hum Reprod,2003,18(12):2595-2598.

[2] ADINI A,KOMAGA T,FIROOZBAKHT F,et a1.Placental growth factor for tumor endothelial cells and macrophages[J]. Cancer Res,2002,62(10):2749-2752.

[3] OURA H,BERTONCINI J,VELASCO P,et a1. A critical role of placental groth factor in the induction of inflammation and edema formation[J]. Blood,2003,101(2):560-567.

[4] 郭永红,李光荣.丹赤胶囊对子宫内膜异位症模型大鼠腹腔液中IL-8和TNF-α水平的影响[J]. 天津中医药,2009,26(5):417-419.

[5] FISCHER C，JONCKX B，MAZZONE M，et a1. Anti-PLGF inhibits growth of vegf(r)-inhibitor-resistant tumors without affecting healthy vessels[J]. Cell，2007，131(3)：463-475.

[6]江涛,杨超燕,唐春萍.奇丹颗粒治疗子宫内膜异位症的实验研究[J]. 中成药,2009,31(7):1017-1020.

[7] TAYLOR H S,OSTEEN K G,BRUNER-TRAN K L,et al. Novel therapies targeting endometriosis[J]. Reprod Sci,2011,18(9): 814.

[8] 王竹辉,何福仙.胎盘生长因子(PLGF)及其受体血管内皮生长因子受体-1(VEGFR-1)在子宫内膜异位症中的表达及意义[J].中国优生与遗传杂志,2006,14(10):16-18.

(责任编辑：幸建华)

Effect of anti-placenta growth factor antibody on endometriosis in rats

ZENG Zhaozhi,ZHANG Jinhong,LU Shaojun

(DepartmentofLaboratoryAnimalCenter,GuangdongPharmaceuticalUniversity,Guangzhou510006,China)

Abstract:Objective To explore the effect of anti-placenta growth factor (PLGF) antibody on endometriosis in rats. Methods The endometriosis model was established by autologous transplantation of endometrial tissue in rats. The effect of anti-PLGF antibody on the production of peritoneal VEGF and IL-8 and endometrium morphosis in endometriosis rats were detected. Results Compared with the model group,treatment with anti-PLGF antibody (1 mg/kg) reduced the level of VEGF and the volume of endometriosis tissue in rats (P<0.05). But the level of IL-8 did not show a significant difference in both groups. Conclusion Treatment with anti-PLGF antibody can inhibit the vasifaction and growth of ectopic endometrium in rats.

Key words:anti-placenta growth factor (PLGF) antibody; endometriosis; VEGF; IL-8

DOI:10.16809/j.cnki.1006-8783.2016030201

中图分类号:R965

文献标志码:A

文章编号:1006-8783(2016)02-0228-03

作者简介：曾昭智(1980—)，男，硕士，高级实验师，主要从事实验动物学研究，Email: 2000zzz@163.com。

基金项目：广东省医学科研基金(B2013191)

收稿日期：2016-03-02

网络出版时间：2016-03-28 15:52网络出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/44.1413.R.20160328.1552.001.html