补肾化瘀方对PCOS大鼠血清激素水平的影响*

张翌蕾，潘　文，汪永娟，王贵霞，李明明甘肃中医药大学，甘肃兰州70000；2甘肃省中医药研究院；甘肃省中医院



补肾化瘀方对PCOS大鼠
血清激素水平的影响*

张翌蕾1，潘文2△，汪永娟1，王贵霞3，李明明1
1甘肃中医药大学，甘肃兰州730000；2甘肃省中医药研究院；3甘肃省中医院

［摘要］目的：观察补肾化瘀方对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠内分泌水平的影响。方法：选取120只6周龄雌性SD大鼠，设立空白对照组20只，余100只大鼠采用来曲唑溶液对大鼠灌胃，并喂以高脂高糖饲料建立PCOS大鼠模型，成模大鼠随机分为5组：模型对照组、二甲双胍组、中药低浓度组、中药中浓度组、中药高浓度组，每组20只。分别给予相应药物进行干预，干预14天后采用酶联免疫（ELISA）法测定大鼠血清雌醇（E1）、双氢睾酮（DHT）、促性腺激素释放激素（GnRH）、胰岛素（INS）水平，HE染色观察各组大鼠卵巢形态学变化。结果：与空白对照组比较，模型对照组血清E1、DHT、INS水平明显增高(P＜0.05)，卵泡呈囊性扩张，颗粒细胞层数减少，卵泡个数增多，卵母细胞消失；与模型对照组比较，各治疗组大鼠血清E1、DHT、INS水平显著降低(P＜0.05)，卵巢HE染色镜下可见黄体以及不同阶段卵泡、颗粒细胞层数明显增多，卵泡内可见卵母细胞以及放射冠。结论：补肾化瘀方可有效改善PCOS大鼠血清激素水平，降低INS水平，改善E1过高引起的高雌酮血症，并且能够改善卵巢功能与排卵情况。

［关键词］多囊卵巢综合征；补肾化瘀方；胰岛素抵抗；激素水平

The Influence of BuShen HuaYu Prescription on the Levels of Hormone of PCOS Rats

ZHANG Yilei1,PAN Wen2△,WANG Yongjuan1,WANG Guixia3,LI Mingming1
1 Gansu University of Traditional Chinese Medicine,Lanzhou 730000,China;2 Gansu Provincial Academy of Chinese Medicine;3 Gansu Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine

Abstract Objective:To observe the influence of BuShen HuaYu prescription on endocrine levels of the rats with polycystic ovarian syndrome (PCOS).Methods:All 120 rats were chosen,20 rats were established as blank control group,the rest 100 rats received intragastric administration of letrozole solution,and they were fed with high fat and high sugar fodder to establish PCOS rat model,the models were randomized into five groups:model control group,metformin group,high,moderate and low doses groups of herbs,20 rats each group.The rats were intervened by the corresponding medicine,the levels of estrogen (E1),dihydrotestosterone (DHT),gonadotropin-releasing hormone(GnRH) and insulin(INS) were detected by adopting ELISA method,and morphological changes of ovaries were observed by HE staining method after intervened for 14 days.Results:Compared with blank control group,the levels of E1,DHT and INS of model control group increased obviously (P＜0.05),ovarian follicles were in cystic dilatation,granular cell layers decreased,the number of ovarian follicles increased,oocytes disappeared;compared with model control group,the levels of E1,DHT and INS lowered in different groups significantly (P＜0.05).Corpora luteum and ovarian follicles in different stages could be seen,granular cell layers increased notably,oocytes and corona radiate could be seen in the ovarian follicles under HE chromoendoscopy.Conclusion:BuShen HuaYu prescription could effectively improve endocrine levels of PCOS rats,decrease the levels of INS and improve high E1-induced ketonemia,ovarian function and ovulation.

Keywords polycystic ovarian syndrome;BuShen HuaYu prescription;insulin;endocrine levels

多囊卵巢综合征(polycystic ovarian syndrome，PCOS)是一种发病多因性、临床表现多态性的内分泌紊乱综合征。PCOS的临床表现主要有多毛、痤疮、肥胖、闭经、不孕等。近几年，PCOS的发病呈上升趋势，PCOS对女性身心健康影响之大以及并发症涉及范围之广，使得近年来对PCOS的关注和研究越来越多。研究发现，胰岛素抵抗(insulin resistance，IR)与PCOS的发生发展密切相关［1］，在PCOS患者中，70％以上都伴有IR［2］，并且PCOS患者血清雌酮(E1)含量升高，诱发高雌酮血症。目前临床治疗PCOS多采用生活方式干预和药物治疗，但存在不良反应和用药后易复发的弊端［3］。随着中医对PCOS研究的不断深入，认识到肾虚血瘀是PCOS的基本病机［4］。补肾化瘀方是甘肃省中医院妇科经验方，治疗PCOS具有较好疗效。本实验通过建立PCOS大鼠模型，观察补肾化瘀方对PCOS大鼠的内分泌调控作用，为临床运用补肾化瘀方提供客观依据。

1　材料与方法

1.1动物与分组选用体质量180 g左右、6周龄有规律排卵的SD雌鼠(清洁级)120只，由甘肃中医学院动物实验中心提供，许可证号：SCXK(甘) 2011-0001。SPF级喂养。将动物编号后采用随机数计表法随机抽取20只大鼠设为正常对照组，常规饲料饲养，饮水及食物自由摄取。其余大鼠待造模完成后重新编号根据随机数字表法将大鼠分为模型对照组，二甲双胍组，中药高、中、低浓度组，每组各20只，以高脂高糖饲料和5％葡萄糖水喂养，饮水以及食物自由摄取。

1.2仪器、试剂与药物超低温冰箱(三洋MDF-U53V)，TDZ4-WS低速离心机(长沙平凡仪器仪表有限公司提供)，日本OLYMPUS显微镜光学显微镜(甘肃嘉瑞贸易有限责任公司提供)，DHG-9031恒温箱(上海医用分析仪器厂提供)，PFZ-5酶标仪(长沙平凡仪器仪表有限公司提供)。来曲唑(sigam公司提供)，羟甲基纤维素(sigam公司提供)，高脂高糖饲料(北京科澳协力有限公司提供)，ELISA试剂盒(RD公司提供)。补肾化瘀方(女贞子、墨旱莲、菟丝子、山茱萸、赤芍、丹参、桃仁、川芎等)药物由甘肃省中医院药房提供，药物煎制与浓缩由甘肃省中医院药剂科负责，依据人与大鼠之间用药剂量换算系数公式(大鼠剂量=6.3×人的剂量mg/kg)换算实验给药剂量。二甲双胍组4.498 mg/mL(等效剂量换算)；补肾化瘀方高浓度组(2倍等效剂量)1.98 g/mL中浓度组(等效剂量)0.989 g/mL，低浓度组(1/2倍等效剂量) 0.494 5 g/mL。

1.3模型制备实验组大鼠灌胃服用来曲唑［5］1 mg/(kg·d)，溶于1％羟甲基纤维素中，连续灌胃24天，自造模当天起，每天观察大鼠阴道脱落细胞涂片。

1.4给药方法造模结束次日开始给药：正常对照组与模型对照组给予生理盐水0.01mL/(g·d)灌胃；二甲双胍组给予二甲双胍溶液0.01 mL/(g·d)灌胃；中药高、中、低浓度组分别给予高、中、低浓度补肾化瘀方0.01 mL/(g·d)灌胃；连续灌胃14天。

1.5标本采集与存储大鼠灌胃14天后，当晚8∶00禁食，次晨8∶00称重。腹腔注入10％水合氯醛麻醉，行腹主动脉取血5～8 mL，静置30分钟后将全血3 000 r/min离心10分钟得血清，-80℃冻存备用。取大鼠双侧卵巢组织固定于体积分数4％多聚甲醛中。

1.6观察指标及方法雌酮(E1)、双氢睾酮(DHT)、促性腺激素释放激素(GnRH)采用酶联免疫(ELISA)法进行测定；卵巢组织用石蜡包埋切片后行HE染色，光镜下观察卵巢形态学变化。

1.7统计学方法采用SPSS 17.0软件进行统计分析，计量资料用(±s)表示，检验资料正态性，非正态分布的资料行正态性转换进行分析。组间比较采用单因素方差分析，P＜0.05表示差异有统计学意义。

2　结果

2.1激素水平模型对照组E1、DHT、INS水平明显高于空白对照组(P＜0.05 )，各治疗组与模型对照组相比，E1、DHT、INS水平明显降低(P＜0.05)，各组相比GnRH无明显变化。见表1。

表1　各组激素水平比较

2.2卵巢形态学正常对照组卵巢组织切片光镜下可见不同发育阶段的卵泡和黄体，卵泡内颗粒细胞分布均匀，颗粒细胞层多为8～11层，卵泡内可见卵母细胞以及放射冠；模型对照组卵泡多呈囊性扩张，颗粒细胞层减少至2～3层，卵泡内卵母细胞或放射冠消失，个别卵巢镜下可见黄体；各治疗组囊性扩张卵泡较模型对照组明显减少，各级卵泡和黄体数量明显增加，颗粒细胞层增厚。见图1。

图1　各组卵巢形态学比较

3　讨论

中医古籍中并无“多囊卵巢综合征”这一病名，而根据其临床表现多将PCOS归为“月经后期”“闭经”“不孕”“崩漏”“癥瘕”等范畴，中医从整体观念入手，认为PCOS的病机多以肾虚为基础，兼有痰湿、血瘀，病性多为虚实夹杂［5-6］。“经本于肾”，“经水出诸肾”，卵泡的发育与成熟与肾中精气的充盛密切相关，并且肾中阳气鼓动、冲任气血调畅又可促使卵泡排出［7］。肾虚可使肾-天癸-冲任-胞宫轴失衡，卵巢正常功能受到抑制，使卵泡生长、发育受限，成熟卵泡不能正常排出，从而造成卵巢多囊样改变，并且PCOS患者子宫、卵巢供血存在异常，阻力指数增高，子宫与卵巢长期处于血瘀状态，瘀滞不通则阻碍卵泡的生长发育和排出［8］。PCOS兼有血瘀患者的INS水平要显著高于单纯PCOS患者，可见肾虚血瘀是PCOS伴IR的主要病机［1］。

补肾化瘀方是甘肃省中医院妇科经验方，原方重用菟丝子、女贞子、墨旱莲、山茱萸等滋肾养血，酌加川芎、桃仁、丹参、赤芍等药物活血化瘀，针对PCOS的主要发病机制运用活血化瘀药物，使精充血足并得以疏导则经自调。中药药理研究发现，补肾中药［9］有类激素作用，可以调节激素水平，使卵巢功能得到改善。活血化瘀药［10］可改善子宫、卵巢局部微环境，使子宫、卵巢供血加强，并可改善胰岛素抵抗，增加胰岛素效应，使机体内分泌环境得到改善，卵泡得以生长发育，促使成熟卵泡排出，恢复正常排卵。此外，活血化瘀药物还具有抗炎、增强脂代谢、抗氧化［11］等作用，可以有效控制PCOS的远期并发症的发生发展。

PCOS患者中70％以上伴有IR［2］，胰岛素水平过高对卵巢和肾上腺的雄激素分泌具有促进作用，进而成为PCOS雄激素水平升高的另一重要因素［12］。临床多采用抗雄激素、降糖、胰岛素增敏等方法对PCOS进行对症治疗，虽然临床疗效显著，但存在一定的药物毒副作用及停药后反复的弊端［3］。

基于以上理论和临床现状，在动物实验研究中观察补肾化瘀方的疗效，并与二甲双胍的疗效进行对比。补肾化瘀方可有效降低INS水平，改善胰岛素抵抗，降低E1水平，改善高雌酮血症，并可有效降低DHT水平；改善卵巢功能，促使卵泡发育，有效改善机体内环境，从整体上对PCOS进行调控。

参考文献

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通讯作者：△潘文(1963—)，女，硕士研究生导师，主任医师，甘肃省领军人才，甘肃省555创新人才，甘肃省卫生厅中青年学术技术带头人，中华中医药学会理事，中华中医药学会编辑出版分会副主任委员，中华中医药学会科普分会副主任委员，中华中医药学会文化分会常务理事，甘肃省中医药学会副会长兼副秘书长，甘肃省中医药学会文化专业委员会副主任委员兼秘书长，甘肃省中西医结合学会妇科专业委员会主任委员。研究方向：补肾活血法治疗多囊卵巢综合征伴胰岛素抵抗的机理研究。

作者简介：张翌蕾（1990—），女，硕士研究生。研究方向：中医妇科血瘀证。

*基金项目：国家自然科学基金资助项目（编号81360604）；甘肃省技术研究与开发专项计划项目（编号1305TCYA029）；甘肃省教育厅硕士研究生导师项目（编号1206-07)；甘肃省卫生行业科研计划管理项目（编号GWGL2013-3）。

收稿日期：2015-11-22

［中图分类号］R285.5

［文献标识码］A

［文章编号］1004-6852(2016)02-0005-04