复方三七散外敷对静脉留置针所致静脉内皮细胞凋亡的保护作用*

张喜平，苏　艳，王杏敏沧州医学高等专科学校，河北沧州061001



复方三七散外敷对静脉留置针所致静脉内皮细胞凋亡的保护作用*

张喜平，苏艳，王杏敏
沧州医学高等专科学校，河北沧州061001

［摘要］目的：探讨复方三七散对静脉留置针所致静脉内皮细胞凋亡的保护效果，为临床推广应用提供理论依据。方法：将30只成年新西兰大耳兔随机分为3组，每组10只，兔外耳缘静脉血管穿刺后留置静脉留置针，每天注射生理盐水20 mL。对照组不用任何药物，硫酸镁组给予50％硫酸镁纱布湿敷，复方三七散组给予复方三七散药粉和70％酒精混合药糊外敷，每天换药1次，连续观察10天后处死，取外耳缘静脉标本制作切片，观察HE染色法和TUNEL法标本的细胞凋亡情况。结果：HE染色法和TUNEL法都显示复方三七散组细胞凋亡均少于其他2组（P＜0.05）。结论：复方三七散外敷对静脉留置针所致静脉内皮细胞凋亡具有保护作用，且效果优于硫酸镁。

［关健词］复方三七散；静脉留置针；静脉炎；细胞凋亡

Effects of Compound SanQi Powder for External Use on Venous Indwelling Needle-induced Cellular Apoptosis in Venous Endothelium

ZHANG Xiping,SU Yan,WANG Xingmin
Cangzhou Medical College，Cangzhou 061001,China

Abstract Objective:To provide theoretical evidence for clinical spread and application by exploring the effects of compound SanQi powder on venous indwelling needle-induced cellular apoptosis in venous endothelium.Methods:Thirty rabbits were randomized into three groups,ten rabbits each group,the rabbits were injected with physiological saline each day,20mL,after auricular vein of the rabbit were punctured and venous indwelling needle was retained,the control group was unhandled,magnesium sulfate group accepted 50％ magnesium sulfate wet compress,compound SanQi powder group compound SanQi powder and 70％ alcohol for external use,dressing changed once each day,the rabbits were sacrificed after observing for ten days consecutively,the sample of rabbit auricular vein was taken out and the slice was made,cellular apoptosis of the sample was observed after dealt with HE staining method and TUNEL method.Results:The results of HE staining method and TUNEL method demonstrated that compound SanQi powder was less than other two groups in cellular apoptosis (P＜0.05).Conclusion:Compound SanQi powder for external use could protect venous indwelling needle-induced cellular apoptosis in venous endothelium,and its effects are superior to these of magnesium sulfate.

Keywords compound SanQi powder;venous indwelling needle;phlebitis;cellular apoptosis

静脉留置针的广泛应用极大地方便了临床护理工作，然而随着留置时间的增长，患者静脉炎的发生率也随之增高。因此寻求能够延长静脉留置针留置时间的方法和药物就很有必要了。临床运用自拟方剂“复方三七散”外敷防治静脉留置针所致静脉炎取得一定疗效。为进一步探求其防治机理，笔者观察了复方三七散对兔耳缘静脉留置针所致静脉内皮细胞凋亡保护作用的实验研究，现报道如下：

1　材料与方法

1.1材料及药物选用同种健康新西兰大耳兔30只(购自河北医科大学实验动物中心，合格证号：医动字第DK0507-0108)，月龄：5个月，普通级，体质量3.5～4.0 kg，雌雄各半，实验前适应性喂养1周。美国BD公司生产Vialon材料制成的24G静脉留置针，3M透明敷贴；生理盐水注射液；封管液采用含量为25 U/mL肝素盐水。TUNEL试剂盒为promega公司的末端荧光标记TUNEL试剂盒。中药复方三七散的配制选用中药三七、大黄、远志、葛根、冰片，以4∶2∶2∶2∶1的比例混合，粉碎，过120目筛，备用。

1.2实验动物及分组选取同种健康新西兰大耳兔30只，随机分为3组，每组10只，单笼饲养，每只兔笼上按分组编号。3组大耳兔在体质量、性别、健康状况方面，差异无统计学意义(P＞0.05)。第1组右耳为静脉留置针空白对照小组，左耳为复方三七散外敷治疗小组；第2组右耳为静脉留置针空白对照小组，左耳为硫酸镁外敷治疗小组；第3组右耳为硫酸镁外敷治疗小组，左耳为复方三七散外敷治疗小组。

1.3静脉留置针的操作方法指定一名经验丰富的护士进行操作，选取兔外耳缘静脉血管，用剃毛刀剃去实验兔耳毛，选取兔外耳缘静脉距耳尖1 cm处为穿刺点，皮肤常规消毒后，用BD 24G静脉留置针由耳尖向耳根方向穿刺，刺入静脉见回血后沿静脉方向将穿刺针刺入少许，边拔出针芯边将导管全部轻轻送入静脉，以常规输液贴固定，缓慢匀速注射生理盐水20 mL，15分钟注完。如有外渗废弃不用。注射完毕时生理盐水2 mL脉冲式正压封管，妥善固定包扎。用自制兔耳套包裹双耳，以防抓脱。每隔24小时摘下兔耳套，按编号顺序再次注射。

1.4各组药物外敷方法复方三七散外敷小组：以穿刺血管为中线两侧各宽1 cm，共宽2 cm，以穿刺点为标记远心端1 cm，近心端5 cm，共长约6 cm的矩形面积，作为药物外敷范围。每日注射生理盐水20 mL，正压封管后外敷一次。将复方三七散药粉和70％酒精按2∶1比例混合成糊状，用棉签涂抹在外敷范围，厚度2 mm左右，外敷后用保鲜膜覆盖。24小时后用生理盐水棉球擦去外敷药，观察局部皮肤，再采用同样的药物、方法外敷，1次/d。硫酸镁外敷组：纱布需4层，用50％硫酸镁溶液浸湿纱布湿敷，外敷后用保鲜膜覆盖，24小时后更换纱布，范围同复方三七散组。每日注射生理盐水20 mL。静脉留置针空白对照小组：每日常规注射生理盐水20mL，正压封管后不做外敷。

1.5对各组动物处理实验开始后，每天上午9∶00开始按编号顺序进行注射、外敷药物，然后给予正常饮食和水，观察实验兔饮食、活动情况。相同操作进行240小时(10天)后，实验兔按编号顺序进行腹腔麻醉，左右两耳均切取活体标本。切取活体标本约5.5cm×1cm，即取以穿刺血管为中线两侧各宽0.5cm，共宽1 cm，以穿刺点为标记远心端切取1.0 cm，近心端切取4.5 cm，共长约5.5 cm的矩型标本，立即放入Bouin氏固定液中固定。

1.6形态学观察及凋亡细胞检测3组标本均取材后立即放入Bouin氏固定液，固定24小时后常规脱水透明，石蜡包埋，从穿刺点端连续切片10张，厚度5～7 μm，脱蜡至水。做如下检测：1)HE染色法：每份标本10张切片中，从第1张开始间隔取5张切片进行HE染色，光镜观察血管内皮细胞的形态改变，获得有价值切片258张，其中空白对照组90张，硫酸镁组82张复方三七散组86张。2) TUNEL法：对每份标本剩余5张切片采用TdT介导的dUTP末端标记法检测，实验步骤按说明书进行，获得有价值切片262张，其中空白对照组92张，硫酸镁组84张，复方三七散组86张。

1.7结果判断HE染色：光镜观察耳缘静脉内皮连续光滑，血管周围结构清晰，未见典型凋亡细胞为阴性；血管内皮结构模糊，细胞有不同程度的围绕核膜的染色质浓缩，胞质空泡样改变和细胞皱缩，胞膜出现“疱样结构”为阳性［1］；TUNEL法［2］：显示亮绿色荧光即为凋亡细胞，荧光显微镜下观察分为4级：无凋亡(-)：未见或≤3个亮绿色荧光点；轻度(+)：3～7个亮绿色荧光点；中度(++)：8～15个亮绿色荧光点；重度(+++)：＞15个亮绿色荧光点［3］。

1.8统计学方法实验数据使用SPSS 13.0统计软件进行处理，3组独立样本计数资料比较采用行乘列表的χ2检验，若有统计学差异则采用卡方分割进行两两比较，P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

实验结束后采用HE染色切片3组间血管内皮细胞凋亡程度比较显示：3组间细胞凋亡阳性率差异有统计学意义(χ2=203.190，P=0.0001)，见表1。3组间两两比较显示：硫酸镁组与空白对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05)；复方三七散组与空白对照组比较，差异有统计学意义(P＜0.05)；复方三七散组与硫酸镁组比较，差异有统计学意义(P＜0.05)。见表2。

表1　采用HE染色3组间血管内皮细胞凋亡程度分布构成比

表2　3组间血管内皮细胞凋亡情况的比较

采用TUNEL法切片3组间血管内皮细胞凋亡程度比较显示：3组间细胞凋亡阳性率差异有统计学意义(χ2=114.829，P=0.000 1)，见表3。3组间两两比较显示：硫酸镁组与空白对照组对比差异有统计学意义(P＜0.05)；复方三七散组与空白对照组对比差异有统计学意义(P＜0.05)；复方三七散组与硫酸镁组对比差异有统计学意义(P＜0.05)。见表4。

表3　TUNEL法3组间血管内皮细胞凋亡程度构成比　例

表4　采用TUNEL法3组间血管内皮细胞凋亡情况的比较

3　讨论

血管内皮细胞是血管内壁表面覆盖的一层细胞，属单层扁平细胞，对血管壁起到屏障作用。同时，内皮细胞还有传递信息、调节分泌等多种重要功能。在生理情况下，血管内皮细胞凋亡和再生同时进行，凋亡和再生的细胞数量保持一个平衡的稳定状态，从而维持血管正常的生理功能［4］。病理过程中，有很多原因可以导致血管内皮细胞凋亡。静脉留置针对穿刺点的血管内皮细胞可产生机械性刺激，从而导致血管内皮细胞的外形变形、细胞簇集、细胞内骨架重排，甚至凋亡。留置针对血管的介入，可部分阻塞血管，致使血液流动缓慢，改变血流切变，也可引起血管内皮细胞脱落。另外，留置针穿刺时切割穿刺点血管，损伤了血管内皮的完整性，再加上静脉留置针对血管壁的刺激，局部可引起炎症反应。炎症反应致使氧自由基增多，血液中活性氧含量增多，出现氧应激状态，导致细胞膜脂质过氧化，改变细胞内酶活性的变化从而诱导血管内皮细胞凋亡［5］。此外，静脉留置针可使局部血流变慢，产生血栓，血栓可促进局部细胞凋亡［6］，而细胞凋亡又可加速血栓的形成［7］，这是导致细胞凋亡的又一机理。综上所述，静脉留置针所致静脉炎是细胞凋亡的原因，如能积极地预防静脉炎的发生必将有效地保护血管内皮细胞免于或减少凋亡。

从实验可见采用HE染色法，3组间血管内皮细胞凋亡情况对比显示复方三七散组细胞凋亡均少于其他2组(P＜0.05)。采用TUNEL法3组间血管内皮细胞凋亡情况与采用HE染色法一致。这充分说明，复方三七散外敷具有防治静脉留置针所致静脉炎而导致的血管内皮细胞凋亡的作用。而且，其防治效果好于硫酸镁溶液湿敷。

中医认为静脉炎的发生病因病机常为湿热内蕴，气滞血瘀。本实验所用中药自拟方剂复方三七散针对此病机而设，由三七、大黄、葛根、远志、冰片组成。这些中药是临床治疗相关疾病的常用药物。三七活血化瘀；大黄清热解毒，远志消肿散结；葛根现代药理研究有扩张局部毛细血管，增加局部血液循环的作用；冰片有增强药物渗透皮肤的作用。5药合用，共同起到防治静脉炎的作用，临床疗效较好。通过本次实验，再次验证：复方三七散外敷可起到防治静脉留置针所致静脉炎的作用，进而保护静脉血管内皮细胞减少凋亡，其效果确切，值得同道借鉴和推广。

参考文献

［1］佟俊杰，张广耘，袁晓.细胞凋亡检测方法的研究进展［J］.口腔医学，2010，30(7):437-439.

［2］高荣花，赵改婷，耿少英.静脉留置针留置时间对静脉损伤的影响［J］.护理研究，2006，7（20）：1846-1847．

［3］陈海燕，路雪芹，陈传波.留置针刺激诱导血管内皮细胞凋亡的实验研究［J］.中华医院感染学杂志，2011，21（19）：3981-3983.

［4］Mal ach T，Jerassy Z，Rudensky B，et al.Prospect i ve survei l l ance of phl ebi -t i s associ at ed wi t h peri pheral i nt ravenous cat het ers［J］.Am J Infect Cont rol，2006，34(7):308-312.

［5］崔爱荣，焦光琳，张玉敏，等.静脉留置针留置时间与静脉血管的炎症反应相关性研究［J］.中外医疗，2008，27(13)：6-7．

［6］陈主初.病理生理学［M］.北京：人民卫生出版社，2005:170-171．

［7］Takeya H，Tanaka Y，Suzuki K.Thrombosi s and apopt osi s［J］.Ri nsho Byori，1997，45(6)：614-620.

作者简介：张喜平(1977—)，女，主管护师。研究方向：中医护理。

*基金项目：沧州市2013年科学技术研究与发展指导计划项目（编号131302081）。

收稿日期：2015-07-27

［中图分类号］R285.6

［文献标识码］A

［文章编号］1004-6852(2016)02-0016-03