结直肠癌组织中EZp蛋白阳性表达及意义

姚坤厚，魏伦收，马万里，胡军红(河南大学淮河医院，河南开封475001)



结直肠癌组织中EZp蛋白阳性表达及意义

姚坤厚，魏伦收，马万里，胡军红(河南大学淮河医院，河南开封475001)

摘要：目的探讨果蝇zeste基因增强子同源物2(EZp)蛋白在结直肠癌发生、发展中的作用。方法选择结直肠癌组织52例份(结直肠癌组)及远癌正常肠组织22例份(正常组)，采用免疫组化SP法检测两组EZp蛋白表达，并分析其阳性表达与结直肠癌患者临床病理参数及预后的关系。结果结直肠癌组EZp阳性表达率为69.2%(36/52)，正常组为4.5%(1/22)，二者比较P<0.05。结直肠癌组EZp阳性表达与患者性别、年龄、肿瘤部位及临床分型无关(P均>0.05)，与组织分化程度、Duke分期及肿瘤直径有关(P均<0.05)。EZp阳性者3年无疾病进展生存率为49.8%，EZp阴性者为79.6%，EZp阳性者疾病进展风险显著高于阴性者(HR=2.91，95% CI为1.23～3.66，P<0.05)。结论EZp蛋白阳性表达变化与结直肠癌发生、发展密切相关，可作为判断预后不良的指标。

关键词：结直肠癌；EZp蛋白；免疫组化；临床病理特征；预后

结直肠癌是临床常见的消化系统肿瘤，近年来其发病率呈逐年上升趋势[1]。目前关于结直肠癌发生、发展、侵袭及转移的分子生物学机制尚不十分清楚[2]，但普遍认为其恶性生物学行为是涉及多基因、多步骤的调控过程。研究发现，果蝇zeste基因增强子同源物2(EZp)在多种实体肿瘤组织中异常表达，并与肿瘤的恶性生物学行为密切相关[3，4]，但其在结直肠癌组织中表达的研究报道较少。2010年4月～2015年8月，我们观察了结直肠癌组织中EZp蛋白阳性表达情况，并分析其阳性表达与患者临床病理参数及预后的关系。现报告如下。

1资料与方法

1.1临床资料选择同期我院收治的结直肠癌患者52例。纳入标准：术后经组织病理学检查确诊为结直肠癌；术前未接受过新辅助化疗；术后随访数据完整；组织标本获取经家属签署知情同意书。排除标准：术后病理诊断不明者；术前接受过放化疗或生物治疗者；合并其他恶性肿瘤者。其中，男28例、女24例，年龄36～75岁(58.6±12.3)岁。结肠癌20例、直肠癌32例，肿瘤直径1.2～10.3 cm；组织分化程度：高、中分化11例，低、未分化41例；Duke分期：A、B期30例，C、D期22例；临床分型：肿块型23例，浸润型20例，溃疡型9例。

1.2EZp蛋白表达检测取52例患者手术切除的癌组织标本(结直肠癌组)，取其中22例患者远癌正常肠组织标本(正常组)。采用免疫组化SP法检测两组EZp蛋白表达。结果判定[5]：采用双盲法对染色结果进行判定，在400倍显微镜下每张切片选取5个视野，计数每个视野中的细胞总数及EZp阳性细胞数。EZp阳性染色定位于细胞核，呈棕黄色颗粒状。根据染色强度和染色面积综合计分。染色强度：不着色为0分，轻度着色为1分，中度着色为2分，强着色为3分；染色面积：无着色为0分，<25%为1分，25%～50%为2分，>50%为3分。两积分相加≤2分为EZp阴性表达，>2分为EZp阳性表达。

1.3随访术后定期随访，记录患者疾病进展或死亡事件的发生时间，采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线，比较不同EZp表达者3年无疾病进展生存率。

2结果

2.1两组EZp阳性表达比较结直肠癌组EZp阳性表达率为69.2%(36/52)，正常组为4.5%(1/22)，二者比较P<0.05。

2.2EZp阳性表达与结直肠癌患者临床病理参数的关系EZp阳性表达与结直肠癌患者性别、年龄、肿瘤发生部位及临床分型无关(P均>0.05)，而与组织分化程度、Duke分期及肿瘤直径有关(P均<0.05)。见表1。

表1　EZp阳性表达与结直肠癌患者临床病理参数的关系

2.3不同EZp表达者预后比较EZp阳性者3年无疾病进展生存率为49.8%，EZp阴性者为79.6%，EZp阳性者随访期间疾病进展风险显著高于阴性者(HR=2.91，95%CI为1.23～3.66，P<0.05)。见图1。

图1　不同EZp表达者预后状况生存曲线

3讨论

EZp是1996年发现的一个新基因，当时命名为ENX-1[6]。EZp在体内外均能与Vav相互作用，是果蝇zeste基因增强子[E(z)]的人类同源物[7，8]。EZp基因定位于人7号染色体3带5区，为多梳蛋白复合体PcG家族的重要成员之一[9]。EZp基因对干细胞表型的维持是必不可少的。既往研究发现，EZp表达产物可促进肿瘤细胞增殖及扩散，在多种恶性肿瘤(如前列腺癌、膀胱癌、乳腺癌等)组织中异常表达[7，10～12]。临床研究还发现，在人类前列腺癌演化过程中，EZp基因表达逐渐升高，并随着其表达水平逐渐升高，多个分化相关基因的表达受到抑制。EZp具有组蛋白甲基转移酶和多种基因的调控作用，参与多个基因的转录抑制[13]。EZp介导的基因沉默依赖HDAC活性，HDAC抑制剂可完全消除EZp的抑制作用。故EZp发挥功能既需要完整的SET结构域，又需要内源性HDAC的活性。提示HDAC抑制剂在EZp高表达的肿瘤中可能有效。但EZp与结肠癌的关系研究较少，其与结肠癌发生、发展、侵袭和转移等生物学行为及患者预后的关系不十分清楚[14]。我们前期研究发现，通过小干扰RNA下调人结肠癌细胞HCT116中EZp基因表达后，细胞凋亡比例增加，细胞增殖能力明显降低[15]，表明EZp可能参与人结肠癌细胞增殖与凋亡过程。也有文献报道，EZp为典型的癌基因，在多种恶性肿瘤细胞(如乳腺癌、前列腺癌、肺癌等)高表达[16，17]。本研究结果显示，结直肠癌组EZp阳性表达率显著高于正常组；EZp阳性表达与患者性别、年龄、肿瘤部位及临床分型无关，与组织分化程度、Duke分期及肿瘤直径有关。在组织分化程度较低、Duke分期较高和肿瘤直径较大者EZp阳性表达率较高。说明EZp与结直肠癌的恶性行为有关，EZp阳性表达者恶性生物学行为明显高于阴性表达者。生存分析显示，EZp阳性者3年无疾病进展生存率明显低于EZp阴性者。说明EZp阳性表达与患者预后不良有关。

综上所述，EZp阳性表达变化与结直肠癌的发生、发展密切相关，且与患者预后有关，可作为判断预后不良的指标。

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(收稿日期：2015-12-04)

中图分类号：R735.3

文献标志码：B

文章编号：1002-266X(2016)08-0052-03

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2016.08.020

通信作者：马万里(E-mail： wanlima_g@126.com)

基金项目：河南省科技公关计划项目(14A320064)。