八角茴香配方颗粒的制备工艺

谢 滟， 黄丽贞， 廖敏君， 曾伊姚（广西中医药大学，广西南宁530001）



八角茴香配方颗粒的制备工艺

谢 滟， 黄丽贞*， 廖敏君， 曾伊姚
（广西中医药大学，广西南宁530001）

摘要：目的 优选八角茴香配方颗粒的制备工艺。方法 以挥发油包合率和包合物得率为评价指标，正交试验考察八角茴香β-环糊精的最佳包合工艺；以莽草酸含有量为指标，优选去挥发油八角茴香的水煎煮工艺。结果 挥发油最佳包合工艺为挥发油∶β-CD＝1∶8，β-CD∶水＝1∶6，包合温度为40℃，搅拌时间为1.5 h；去挥发油药材的水煎煮最佳条件为加水量15倍，提取时间120 min，提取次数3次。结论 该工艺能有效提取利用挥发油和莽草酸，为八角茴香配方颗粒的标准化、规范化生产工艺提供实验依据。

关键词：八角茴香；配方颗粒；挥发油；莽草酸；正交试验

八角茴香为木兰科八角茴香Illicium verum Hook.f.的干燥成熟果实，具有温阳散寒，理气止痛的功效［1］，作为广西道地药材之一，在全省各地均有种植［2-3］。现代研究发现，八角茴香中含有大量的挥发油［4-5］，含有量达10%，主要成分为反式茴香脑［6-8］。除挥发油外，其水溶性成分之一莽草酸的近年研究较多，为抵抗禽流感药物达菲的原料成分［9-11］，而且药理研究表明，它具有镇痛作用［12］。

中药配方颗粒是经现代制药技术提取、浓缩、分离、干燥、制粒、包装精制而成的纯中药产品，由于它保证了原中药饮片的全部特征，同时又具有不需要煎煮、直接冲服等许多优点得以迅速发展［13-14］。八角茴香饮片多以水煎为传统用药方式，其挥发性成分易损失，影响其疗效。本实验制备八角茴香配方颗粒，首先通过β-环糊精包合挥发油，防止其逸散，提高稳定性，并以具有镇痛作用的水溶性成分莽草酸为评价指标，确定水煎煮工艺，从而优选八角茴香配方颗粒的制备工艺。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Waters2695高效液相色谱仪（美国Waters公司）；赛多利斯BT125D电子天平（德国赛多利斯公司）；SB25-12D超声波清洗器（宁波新芝生物科技股份有限公司）；加热磁力搅拌器（金坛市医疗仪器厂）；烘干箱（南京实验仪器厂）。

1.2 试药 反式茴香脑（纯度99%，25 mL，批号101424586）、莽草酸（纯度99%，1 G，批号1001702635）对照品（美国Sigma公司）；β-环糊精（天津市光复精细化工研究所，批号CNAB035-Q）。无水乙醇为分析纯；甲醇为色谱纯；实验用水为娃哈哈蒸馏水。

八角茴香购自广西省南宁市上林县，经广西中医药大学梁子宁教授鉴定为为木兰科八角茴香Illicium verum Hook.f.的干燥成熟果实。

2 方法与结果

2.1 挥发油的提取 称取八角茴香药材（粉碎后过三号筛）150 g，加入10倍量水，水蒸气蒸馏法连续提取6 h，无水硫酸钠脱水，即得。

2.2 正交试验优选挥发油β-环糊精（β-CD）包合工艺

称取一定量β-CD，加入适量的蒸馏水，置于加热磁力搅拌器上恒温水浴搅拌，同时缓缓滴加八角茴香挥发油，设定一定的搅拌时间。搅拌结束后，将包合物混悬液冷却至室温，置于冰箱中冷藏24 h，抽滤，滤饼用少量水和石油醚多次洗涤，弃去滤液，沉淀减压干燥，称重计算包合物得率。精密称取挥发油β-CD包合物，置于圆底烧瓶中，加入100 mL水，按《中国药典》2010年版一部附录XD挥发油测定法项下甲法，煮沸4 h至油量不再增加，读取挥发油回收量，计算挥发油包合率。

选择挥发油与β-环糊精投料比、β-环糊精与水配比、包合温度、包合时间4个因素，每个因素选取3个水平，以挥发油包合率和包合物得率为评价指标，采用L9（34）正交表安排试验，设计方案见表1，试验结果见表2，方差分析结果见表3和表4。

表1 因素和水平

表2 挥发油β-环糊精包合正交试验结果

表3 挥发油包合率方差分析结果

表4 包合物得率方差分析结果

由表2的直观分析可知，以挥发油包合率为评价指标时，各影响因素的顺序依次为A＞B＞C＝D，最佳包合条件为A2B3C1D2，其中A因素，即挥发油与环糊精投料比，对挥发油包合率有显著影响（表3）；以包合物得率为评价指标时，各影响因素的顺序依次为D＞B＞C＞A，最佳包合条件为A2B3C1D2，方差分析结果表明均无显著影响因素（表4）。最终确定，最佳包合工艺为A2B3C1D2，即挥发油∶β-CD为1∶8，β-CD∶水为1∶6，包合温度为40℃，搅拌时间为1.5 h。

2.3 去挥发油的八角茴香水提工艺 由于八角茴香的水溶性成分莽草酸具有镇痛作用，故以浸膏量、莽草酸为测定指标，考察去挥发油的八角茴香水液煎煮方法。

2.3.1 莽草酸的HPLC测定方法

2.3.1.1 色谱条件 Synergi Hydro-IP80A C18色谱柱（4.6 mm×150 mm，4 μm）；流动相0.1%磷酸-水溶液；检测波长210 nm；柱温30℃；进样量2 μL；体积流量1.0 m L/min。莽草酸对照品和供试品HPLC图谱见图1。

图1 莽草酸HPLC色谱图

2.3.1.2 对照品溶液的制备 精密称取莽草酸对照品适量，甲醇配成0.826 0 mg/mL的溶液。精密吸取适量，稀释成0.082 6、0.165 2、0.330 4、0.495 8、0.660 8 mg/mL的溶液，即得。

2.3.1.3 供试品溶液的制备 精密称取八角茴香150 g，加入适量水提取后抽滤，滤液浓缩喷雾干燥。精密称取干燥粉末0.2 g，加入甲醇50 mL，超声提取90 min，滤液置于100 mL量瓶中，甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2.3.1.4 线性关系考察 分别精密吸取上述各质量浓度对照品溶液2 μL，在“2.3.1.1”项色谱条件下进样，记录峰面积，以对照品溶液峰面积为纵坐标（Y），对照品质量浓度（mg/mL）为横坐标（Y）进行线性回归，得到回归方程Y＝7×106X-37 724（R2＝0.999 6），表明莽草酸在0.082 6～0.826 mg/mL范围内线性关系良好。

2.3.1.5 精密度考察 精密吸取上述供试品溶液2 μL，重复进样6次。结果，ISD为1.50%（n＝6），表明仪器精密度良好。

2.3.1.6 稳定性考察 精密吸取上述供试品溶液2 μL，分别于0、2、4、8、12、24 h进样，在“2.3.1.1”项色谱条件下测定。结果，ISD为1.60%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.3.1.7 重复性考察 取同一方法提取的干燥粉末6份，按“2.3.1.3”项下方法操作，在“2.3.1.1”项色谱条件下测定。结果，ISD为1.97%，表明该方法重复性良好。2.3.1.8 加样回收率考察 精密称定含有量已知的粉末0.1 g，平行6份，分别精密加入适量莽草酸，按“2.3.1.3”项下方法操作，在“2.3.1.1”项色谱条件下测定。结果，莽草酸平均加样回收率为99.55%，ISD 为1.89%。

2.3.2 工艺与结果 选择加水量、提取时间、提取次数3个因素，每个因素3个水平，以莽草酸含有量为评价指标，L9（34）正交表安排试验，设计见表5，试验结果见表6，方差分析见表7和表8。

表5 因素和水平

表6 正交试验结果

表7 浸膏得率方差分析结果

表8 莽草酸含有量方差分析结果

根据表6的直观分析可知，以浸膏得率为评价指标时，各影响因素的顺序依次为C＞B＞A，最佳包合条件为A2B3C3，其中C因素，即提取次数，对浸膏得率有非常显著的影响（表7）；以莽草酸含有量为评价指标时，各影响因素的顺序依次为C＞B＞A，最佳包合条件为A2B3C3，其中C因素，即提取次数，对浸膏得率有非常显著的影响（表8）。由此可知，最佳包合工艺为A2B3C3，但是B因素，即提取时间120 min与150 min差别不大，从节约能源成本的角度考虑，最终确定提取工艺为A2B2C3，即加水量为15倍，提取时间为120 min，提取次数为3次。2.3.3 验证工艺 称取八角茴香饮片150 g，根据确定的提取工艺A2B2C3，试验3次，结果见表9。由表可知，该工艺重复性好，具备可行性。

表9 验证试验结果

2.4 八角茴香配方颗粒制备工艺验证 称取八角茴香饮片150 g，各3份，加10倍量水，水蒸气蒸馏提取挥发油，提取时间为6 h，收集挥发油，备用。残渣过滤，收集滤液，备用。残渣加15倍量水煎煮3次，每次2 h，合并煎液，过滤，滤液浓缩至相对密度为1.05～1.15（80℃），喷雾干燥。将提得的挥发油按挥发油∶环糊精∶水为1 mL∶8 g∶48倍量的比例混合搅拌1.5 h，然后静置冷藏24 h，滤过，减压干燥，制成包合物。将药材提取物、挥发油包合物和糊精混合均匀，干法制粒。结果见表10。

表10 八角茴香配方颗粒制备工艺验证试验

3 讨论

预试验对八角茴香挥发油的提取进行单因素考察，发现提取时间、加水量对挥发油提取有影响，而浸泡时间无影响。因此，单因素试验确定挥发油的提取工艺为提取时间6 h，加水量10倍。

本试验首次确立了八角茴香配方颗粒提取工艺的一系列参数，通过正交试验，最终确定挥发油β-环糊精包合工艺和去挥发油药材的水煎煮工艺。

挥发油为八角茴香的主要活性成分，现代研究方面，其水溶性成分莽草酸具有镇痛作用。本实验有效提取利用了挥发油和莽草酸，将八角茴香饮片制成配方颗粒，既保证其疗效，又是对其饮片剂型的发展和补充。

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*通信作者：黄丽贞（1982—），女，硕士，实验师，从事中药药效研究。Te1：（0771）3137585，E-mai1：88011457@qq.com

作者简介：谢 滟（1984—），女，硕士，讲师，从事中药药效物质基础研究。Te1：（0771）4928385，E-mai1：1733013057@qq.com

基金项目：国家科技支撑计划（2011BAI01B04）；广西中药药效研究重点实验室建设（14-045-12）

收稿日期：2015-05-14

doi：10.3969/j.issn.1001-1528.2016.03.049

中图分类号：I944

文献标志码：B

文章编号：1001-1528（2016）03-0695-04