102例慢性HBV感染者病毒基因变异情况分析*

张撷华，林爱清，胡忆玲，韦丽琴

102例慢性HBV感染者病毒基因变异情况分析*

张撷华，林爱清，胡忆玲，韦丽琴

目的探讨乙型肝炎病毒感染者病毒基因分型和变异情况及其临床意义。方法我院住院和门诊诊治的慢性HBV携带者53例和慢性乙型肝炎患者49例，取血清，送往北京地坛医院肝病研究所进行HBV DNA基因测序。结果在102例慢性HBV感染者中，HBV B型36例（35.29%），C型59例（57.84%），B/C混合型4例，未定型3例。慢性乙型肝炎组B型17例，C 型28例，B/C混合型3例，未定型1例，携带者组B型19例、C型31例、B/C混合型1例、未定型2例（x2=0.32 P=0.57）；在53例携带者中，检出耐药位点5例（9.4%），其中3例为rtA181T，1例为rtL180M+rtM204V，1例为rtM/V207I突变，在49例慢性乙型肝炎患者中，共检出耐药位点13例（26.5%），其中5例为rtA181T，1例为rtL180M+rtM204V，2例为rtM/V207I，2例为rtN236T，1例为rtA181T+rtM204I+rts202N，1例为rtI169V+rtV173D，1例为rtM204I+rtM204L。结论在HBV携带者和慢性乙型肝炎患者均检出耐药位点变异，其意义有待于进一步探讨。

慢性乙型肝炎；病毒基因型；基因耐药

Hepatitis B；Genotypes；Viral mutation

乙型肝炎病毒属嗜肝DNA病毒科，为双链DNA病毒，其长链（负链）携带了病毒的全部遗传信息，包含4个部分重叠的开放读码框架。由于乙型肝炎病毒聚合酶/逆转录酶缺乏纠错功能，导致病毒基因变异的发生十分常见。乙型肝炎病毒基因变异可以引起病毒生物学特性的改变，导致疾病临床表现、诊断、治疗和预后等方面出现一系列新问题。抗病毒是治疗关键，然而不同病毒基因型及基因变异对药物的应答率存在显著差异，严重影响药物的效果，耐药及无应答患者预后差，进展为肝硬化和肝癌的概率高［1］。本文探讨了慢性乙型肝炎患者乙型肝炎病毒基因分型和变异的临床意义。

1　资料与方法

1.1研究对象本研究共纳入102例慢性乙型肝炎病毒感染者，均为2012年～2013年我院住院及肝病门诊患者，诊断符合《慢性乙型肝炎防治指南》［2］，其中慢性HBV携带者53例，男35例，女18例，平均年龄33.8±9.2岁，血清谷丙转氨酶和谷草转氨酶正常，在入选前未接受过抗病毒治疗，HBVDNA＞1×107copies/ml，HBeAg阳性39例；慢性乙型肝炎患者49例，男39例，女10例，平均年龄48.2±15.7岁，HBeAg阳性27例。入选标准：（1）核苷类似物治疗3个月以上，HBV DNA仍阳性；（2）治疗过程中转氨酶出现反复波动；（3）治疗过程中曾出现过HBV DNA下降或低于检测值下线后再次升高。

1.2治疗方法给予慢性乙型肝炎患者拉米夫定【葛兰素史克制药（苏州）有限公司】100 mg，1次/d或阿德福韦酯10 mg，1次/d，单用或联用治疗失败者考虑为耐药，且拉米夫定或阿德福韦酯单用或联用抗病毒治疗时间为3个月以上，并在半年内未用过干扰素和其他免疫抑制剂。

1.3血清HBV DNA基因测序取患者血清，离心，-70℃保存，定期加干冰送往北京地坛医院肝病研究所。检测方法：①使用德国Roche MagNA Pure LC全自动核酸提取、加样系统，获得HBV DNA；②在美国PE9600扩增仪扩增；③用Promega公司的PCR产物纯化试剂盒纯化PCR产物；④纯化产物经Beckman测序试剂盒进行测序反应，然后在美国Beckman Coulter CEQ8000 Genetic Analysis System上得到HBV DNA的序列和图谱。

1.4统计学分析应用SPSS 17.0统计学软件进行分析，率的比较采用x2检验，正态分布的计量资料以±s表示，采用t检验，对可能引起基因耐药变异的各因素采用Logistic多元回归分析，P＜0.05被认为具有统计学意义。

2　结果

2.1慢性HBV感染者基因型分型分布在纳入的102例慢性HBV感染者中，HBV B型36例（35.29%），C型59例（57.84%），B/C混合型4例，未定型3例。慢性乙型肝炎组B 型17例，C型28例，B/C混合型3例，未定型1例；携带者组B型19例、C型31例、B/C混合型1例、未定型2例。慢性乙型肝炎组与携带者组间B、C两种基因型无显著性差异（x2= 0.32，P=0.57）。

2.2耐药位点检出情况在53例携带者中，检出耐药位点5例（9.4%），其中3例为rtA181T，1例为rtL180M+rtM204V，1例为rtM/V207I突变；在49例慢性乙型肝炎患者中，共检出耐药位点13例（26.5%），其中5例为rtA181T，1例为rtL180M+rtM204V，2例为rtM/V207I，2例为rtN236T，1例为rtA181T+rtM204I+rts202N，1例为rtI169V+rtV173D，1例为rtM204I+rtM204L。在所有102例受检者中，在基因B型中检出耐药5例（13.9%），在基因C型中检出耐药13例（22.0%），两组检出率无统计学差异（x2=2.15，P=0.14）。

2.3影响耐药变异的多因素回归分析对可能影响基因耐药变异的多种因素（年龄、性别、抗病毒疗程、病毒基因型、HBeAg阳性）进行Logistic回归分析，首先进行单因素分析，试图筛选出有意义的因素，结果基因B型和C型之间耐药变异检出率无统计学差异（x2=2.15，P=0.143），HBeAg阳性与否无明显统计学差异，年龄、性别之间亦无统计学差异。由于未能筛选出有意义的统计学因子，无法进一步行多因素回归分析。

3　讨论

乙型肝炎病毒基因型有不同的地理分布，感染不同基因型的乙型肝炎病毒患者经治疗后HBeAg血清转换、疗效、预后和应答率都有差异［3-5］，国内以基因C型和B型占绝对优势［6，7］。本研究显示，B型36例（35.3%），C型59例（57.8%），B/C混合型4例，未定型3例，与文献报道相符。

既往研究表明，B基因型感染后导致HBeAb阳性率高于C基因型，感染HBV基因B型患者HBeAg血清转换要早于感染基因C型患者［8］。有人［9，10］在对131例慢性乙型肝炎患者研究中发现，各耐药位点在HBeAg阳性组的突变率均高于HBeAg阴性组，差异有统计学意义，可能与HBeAg更能反映出HBV复制，具有更强的传染性有关。杨彦麟等［11］报道137例拉米夫定经治患者YMDD变异检出率与基因型无显著相关。Tan［12］在未经拉米夫定治疗的慢性乙型肝炎患者中发现YMDD变异与基因B型或基因C型之间存在显著差异。

本研究发现，性别、年龄、基因型等与病毒变异之间无明确的关系，无法对检出的耐药变异进行多因素回归分析，但在抗病毒治疗患者中，慢性乙型肝炎患者经治疗达到较低拷贝的病毒载量后，如出现病毒载量的上升，最终大多数患者发生了病毒变异。因此，一旦发生基因变异，就有产生临床耐药的危险性，最终导致肝炎复发、病情恶化。因此，在治疗过程中，监测基因是否存在病毒学突破成为临床治疗的需要。

有研究［11，13］显示基因C型为肝癌发生的危险因素，提示与B型感染者相比，C型HBV慢性感染者发生癌变的可能性较大，因此对于基因C型HBV慢性感染者，应定期随访，早期干预。

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（收稿：2016-02-17）

（本文编辑：陈宗炳）

10.3969/j.issn.1672-5069.2016.03.025

内蒙古自治区高等学校科学研究项目（编号：NJZZ11173）

014010内蒙古自治区包头市包头医学院第一附属医院感染病科（张撷华，林爱清，胡忆玲）；包头医学院（韦丽琴）

张撷华，女，30岁，硕士研究生，住院医师。E-mail：zhangxiehua187448@163.com

林爱清，E-mail：linda5335@sina.com

Hepatitis B viral gene mutation in 102 patients with hepatitis B viral infectionZhang Xiehua，Lin Aiqing，Hu Yiling，et al.DepartmentofInfectiousDiseases，FirstAffiliatedHospital，BaotouMedicalCollege，Baotou014010，InnerMongolia Autonomous Region，China