结直肠癌组织中KLF17的表达水平及临床意义

高鹤丽，周　娜，孙　昭，窦雪琳，管　梅，白春梅

中国医学科学院　北京协和医学院　北京协和医院肿瘤内科，北京 100730



·论著·

结直肠癌组织中KLF17的表达水平及临床意义

高鹤丽，周娜，孙昭，窦雪琳，管梅，白春梅

中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院肿瘤内科，北京 100730

摘要：目的检测KLF17在结直肠癌(CRC)组织的表达，评价其对CRC预后的影响。方法免疫组织化学法检测KLF17在CRC肿瘤组织及瘤旁正常组织中的表达，分析KLF17表达对CRC患者无病生存期的影响。结果73例CRC患者中，32例(43.8%)肿瘤组织中KLF17表达为阳性，41例(56.2%)表达为阴性；53例(72.6%)癌旁正常组织中KLF17表达为阳性，20例(27.4%)表达为阴性；KLF17在肿瘤组织中的表达阳性率明显低于癌旁正常组织(χ2=12.418，P=0.001)。在Ⅲ期CRC患者中，KLF17阳性患者的无病生存期为(56.3±7.2)个月(95% CI：42～70个月)，明显长于KLF17阴性患者的(32.3±5.5)个月(95% CI：22～43个月)(P=0.039)。结论KLF17在CRC中表达水平明显低于正常结直肠组织，KLF17表达阳性与Ⅲ期CRC患者的无病生存相关。

关键词：KLF17；结直肠癌；无病生存期

ActaAcadMedSin，2016,38(1)：69-72

结直肠癌(colorectal cancer，CRC)是威胁人类生命健康的主要疾病之一，其发病率在我国男女恶性肿瘤中分别居第5位和第3位，全国每年有近10万名患者诊断为CRC，诊断时约有20%患者已发生远处转移[1]。因此，研究CRC发生发展的分子机制及预后相关的生物标记物是研究之重。Krüppel样转录因子(Krüppel-like factors，KLFs) 家族属于锌指转录因子，其典型结构特征是在羧基端具有3个C2H2锌指结构。KLFs家族在肿瘤的发生发展中发挥重要的调控作用，包括肿瘤细胞的增殖、凋亡、分化等过程[2- 3]。KLF17是2006年才被证实的KLF家族新成员[4]。有研究显示，作为抑癌基因，KLF17在肺癌[5]、肝癌[6]等恶性肿瘤的表达水平明显减低，且低水平的KLF17与临床预后差相关。本研究测定了KLF17在CRC中的表达水平，初步探讨了KLF17基因与CRC的关系。

对象和方法

对象2005年1月至2010年1月在北京协和医院基本外科行标准CRC根治术R0切除、经病理科确诊为CRC、有明确随访结果、病理组织可进行检测的CRC患者73例，其中，男39例，女34例，中位年龄61岁(44～76岁)；结肠癌52例，直肠癌21例；卡氏功能状态(Karnofsky Performance Status，KPS)评分均≥80分；美国国立综合癌症网络(National Comprehensive Cancer Network，NCCN)肿瘤分期Ⅱ期 25例(34.2%)，Ⅲ期48例(65.8%)。Ⅲ期患者均采用含奥沙利铂标准方案化疗，其中使用FOLFOX方案(奥沙利铂联合氟尿嘧啶/四氢叶酸)39例，XELOX方案(奥沙利铂联合卡培他滨)化疗9例；Ⅱ期患者3例未化疗，3例采用5-FU/LV(氟尿嘧啶/四氢叶酸)方案化疗，19例采用FOLFOX方案化疗。随访截止至2013年1月30日，中位随访时间36.5个月(6～84个月)。对所有患者的病理重新阅片，分别选取肿瘤组织和瘤旁组织蜡块。

免疫组织化学方法石蜡组织切片常规脱蜡，柠檬酸盐缓冲液微波修复，过氧化氢阻断内源性过氧化物酶的活性，山羊血清封闭，加抗KLF17抗体(1∶50，美国Genetex公司)4℃过夜。加生物素标记的二抗，室温下孵育60 min。加链霉素抗生物素，室温下孵育30 min。DAB显色，封片，在显微镜下观察计数阳性细胞。免疫组织化学结果由2名医生分别阅片并判读结果，如果两人结果不一致将由第3名医生重新阅片。染色评分标准按照细胞质和/或细胞核染色强度以及阳性细胞数量进行：-：没有着色；±：淡黄色；+：黄色；++：棕黄色；+++：棕色。细胞无阳性着色(-、±)或≤10%的癌细胞着色被认为是阴性表达；>10%的癌细胞着色(+、++、+++)被认为是阳性表达。免疫组织化学评估时采用盲法处理。

统计学处理采用SPSS 19.0统计软件，计量资料以均数±标准差表示，计量资料组间比较采用成组t检验；计数资料采用卡方检验或四格表确切概率检验；生存数据分析采用Kaplan-Meier法，组间比较采用Log-rank检验；对影响生存预后的联合效应采用Cox回归模型进行多因素分析；P<0.05为差异有统计学意义。

结果

一般临床病理特点73例CRC患者中，腺癌68例(93.1%)，黏液腺癌4例(5.5%)，印戒细胞癌1例(1.4%)。3例黏液腺癌和1例印戒细胞癌未描述分化程度，其余69例患者中，病理低分化10例(14.5%)，中分化29例(42%)，高分化30例(43.5%)。截止随访复发36例，无复发37例。

KLF17在肿瘤组织和瘤旁组织中的表达水平73例CRC患者中，32例(43.8%)肿瘤组织中KLF17表达为阳性，41例(56.2%)表达为阴性；53例(72.6%)癌旁正常组织中KLF17表达为阳性，20例(27.4%)表达为阴性；KLF17在肿瘤组织中的表达阳性率明显低于癌旁正常组织(χ2=12.418，P=0.001)。进一步亚组分析结果显示，25例Ⅱ期CRC患者中，10例肿瘤组织中KLF17表达为阳性，15例表达为阴性；20例癌旁正常组织中KLF17表达为阳性，5例表达为阴性；KLF17在肿瘤组织中的表达阳性率明显低于癌旁正常组织(χ2=8.333，P=0.009)。48例Ⅲ期CRC患者中，22例肿瘤组织中KLF17表达为阳性，26例表达为阴性；33例癌旁正常组织中KLF17表达为阳性，15例表达为阴性；KLF17在肿瘤组织中的表达阳性率明显低于癌旁正常组织(χ2=5.151，P=0.038)。

肿瘤组织中KLF17表达与临床病理因素关系将CRC组织中KLF17表达与73例患者的临床病理资料进行统计学分析后结果显示，CRC患者正常结肠黏膜组织中KLF17的表达情况和临床病理因素均不相关(P均>0.05)，患者肿瘤组织中KLF17表达水平也与患者的性别、年龄、有无脉管侵润、病理组织类型、TNM分期、分化程度、术中淋巴结数目和有无淋巴结转移等临床病理特征无关(P均>0.05)(表1)。

表 1　结直肠癌患者肿瘤组织中KLF17表达与临床病理因素关系[n(%)]

KLF17表达水平对CRC患者DFS的影响在所有CRC患者中，KLF17阴性和阳性患者的无病生存期(disease free survival，DFS)分别为(42.8±4.7)个月(95%CI：34～52个月)和(53.9±5.8)个月(95%CI：43～65个月)，两者相比差异无统计学意义(P=0.454)(图1A)。在Ⅲ期CRC患者中，KLF17阳性患者的DFS为(56.3±7.2)个月(95%CI：42～70个月)，明显长于KLF17阴性患者的(32.3±5.5)个月(95%CI：22～43个月)(P=0.039)(图1B)。

Ⅲ期CRC患者根治性手术后的预后影响因素采用Cox回归分析分析了性别、年龄、有无脉管侵润、肿瘤部位、病理组织类型、T分期、N分期、分化程度、术中淋巴结数目、KLF17表达等因素对患者DFS的影响，单因素分析结果显示T分期(P=0.038)、N分期(P=0.032)及KLF17表达情况(P=0.039)与患者的DFS预后相关。多因素分析结果显示，KLF17(P=0.034)及N分期(P=0.039)是影响Ⅲ期CRC患者的独立预后因素。

A.全部患者；B.48例Ⅲ期患者

A.all patients；B.48 stage Ⅲ patients

图1KLF17表达水平与结直肠癌患者无病生存期的关系

Fig1Relationship between KLF17 expression and disease-free survival in colorectal cancer patients

讨论

KLF17属于特化蛋白/Krüppel 样因子(specificity protein/Krüppel-like factor，Sp/KLF)锌指蛋白家族，该家族包含功能各异的转录因子，通过结合不同的启动子或细胞蛋白，在各种细胞过程中发挥激活子或抑制子的作用。近来研究显示，KLF17表达下调参与肿瘤的多种生物学功能，如侵袭、生长，并与肿瘤患者的预后相关[5- 6]。

研究表明，KLF17为抑癌基因，其表达水平在多种常见肿瘤中明显减低，如肺癌[5]、肝癌[6]、乳腺癌[7- 8]。但也有研究发现，KLF17在子宫内膜癌 (endometrioid endometrial cancer，EEC)中过度表达，并起到致癌作用[9]。本研究检测了KLF17在CRC中的表达情况，结果显示CRC肿瘤组织的KLF17表达水平明显低于癌旁正常组织，与KLF17在其他消化系统肿瘤中的表达情况相近。

有研究提示，KLF17的表达与肿瘤的某些临床病理因素存在负相关，如肿瘤大小、淋巴血管侵润和N分期[5- 6]。但本研究未发现KLF17与CRC的临床病理因素之间有相关性，推测可能与本组病例数目较少有关，也有可能是因为KLF17在CRC中的作用机制可能不同于其他肿瘤，尚需进一步明确KLF17在CRC中的分子学机制。

KLF17表达异常对肿瘤的发生发展有重要作用。KLF17表达下调与肿瘤的生长、侵袭转移密切相关，在乳腺癌[8]和肝癌[6]的相关研究中均发现过KLF17在肿瘤组织中表达水平明显减低，KLF17表达减低可促进肿瘤侵袭转移。KLF17水平升高可以抑制肿瘤细胞的生长[5]。同时KLF17可促进肿瘤的上皮-间质转化(epithelial mesenchymal transitions，EMT)过程，在乳腺癌[7]、肝癌[6]细胞系中，抑制KLF17表达可促进肿瘤细胞的EMT，从而促进侵袭转移。此外，KLF17与肿瘤患者的预后有关，在肝癌[6]、肺癌[5]、胃癌[10]中，KLF17的表达水平减低是肿瘤患者较差预后的独立危险因素。本研究亦发现，KLF17的表达水平与Ⅲ期CRC患者的DFS相关，KLF17表达阳性患者的DFS较长。但在Ⅱ期患者中未发现KLF17与DFS的关系，推测其原因可能是：(1)Ⅱ期患者的病例数较少；(2)Ⅱ期患者大多DFS长，在研究时尚有2/3的Ⅱ期患者处于DFS期，影响了生存分析结果。今后的研究将增加Ⅱ期患者数量，延长随访时间，以明确KLF17与Ⅱ期CRC患者的DFS关系。此外，由于本研究患者死亡数目也较少，无法计算OS，仍需继续随访，以研究KLF17表达和OS的关系。

参考文献

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KLF17 Expression in Colorectal Carcinoma and Its Clinical Significance

GAO He-li，ZHOU Na，SUN Zhao，DOU Xue-lin，GUAN Mei，BAI Chun-mei

Department of Oncology，PUMC Hospital，CAMS and PUMC，Beijing 100730,China Corresponding author：BAI Chun-meiTel：010- 69158315，E-mail：baichunmei1964@163.com

ABSTRACT：ObjectiveTo detect KLF17 expression in colorectal carcinoma (CRC) and to evaluate its effect on the prognosis of colorectal carcinoma. MethodsImmunohistochemistry was performed to detect the expression of KLF17 in CRC and matched pericarcinous tissue，and the relationship between KLF17 expression and disease-free survival(DFS)was analyzed. ResultsOf 73 CRC patients，KLF17 expression was positive in 32 patients and negative in 41 patients. KLF17 expression rate was significantly lower in CRC tissue than in pericarcinous tissue (χ2=12.418，P=0.001). The DFS of KLF17-positive stage Ⅲ colon cancer patients was (56.3±7.2) months (95% CI：42- 70 months)，which was significantly longer than that [(32.3±5.5) months (95% CI：22- 43 months)] of KLF17-negative patients (P=0.039). ConclusionKLF17 expression decreases in CRC tissue，and a positivie KLF17 expression predicts a better prognosis in stage Ⅲ CRC patients.

Key words：KLF17；colorectal carcinoma；disease-free survival

(收稿日期：2015- 03- 30)

DOI：10.3881/j.issn.1000- 503X.2016.01.012

中图分类号:R735.3

文献标志码:A

文章编号：1000- 503X(2016)01- 0069- 04

通信作者：白春梅电话：010- 69158315，电子邮件：baichunmei1964@163.com

基金项目：国家自然科学基金(81472785) Supported by the National Natural Sciences Foundation of China(81472785)