新疆地区口腔颌面部淋巴瘤患者EBV感染与临床病理特征的相关性分析

胡露露 张晋 刘慧 龚忠诚 凌彬 克热木·阿巴斯 尹小朋 邵博 王冰 林兆全

[摘要]目的：通过检测口腔颌面部淋巴瘤患者的EBV水平，分析其与临床病理特征之间的相关性。方法：选取2014年1月1日至2015年1月1日在新疆医科大学第一附属医院收住的口腔颌面部淋巴瘤患者，采用ISH技术检测EBV的水平，从性别、年龄、肿瘤部位、HL淋巴结内外、病灶数量、临床分期、肿瘤分型、病理类型、LDH水平等方面分析其相关性。结果：ISH技术检测EBV感染阳性者占45%。与性别、年龄、肿瘤部位、病灶数量无关（P>0.05）；与HL淋巴结内外发生部位（结内60%，结外25%，P=O.012）、临床分期（I+II：30.8%，III+IV：71.4%，P=O.023）、肿瘤分型（NHL：54.9%，HL：11.1%，P=O.017）、病理类型（NKT：84.6%，BCL：23.1%，TCL：20%，HL：11.2%，P=O.034）、LDH水平（LDH>250mmol/l：60%，LDH≤250mmol/1.36%，P=O.026）有关（P<0.05）；HL淋巴结内外发生部位、临床分期、肿瘤分型、病理类型、LDH水平均是颌面部淋巴瘤患者EBV感染的独立危险因素（P<0.05）。结论：EBV感染在口腔颌面部淋巴瘤患者呈高度阳性表达，HL淋巴结内外发生部位、临床分期、肿瘤分型、病理类型、LDH水平均是颌面部淋巴瘤患者EBV感染的独立危险因素。

[关键词]口腔颌面部肿瘤；恶性淋巴瘤；EB病毒；临床病理特征；相关性分析

[中图分类号]

R739.8

[文献标志码]A

[文章编号]1008-6455（2016）02-0024-04

淋巴瘤原发于淋巴结或淋巴组织，是一种恶性肿瘤，全身各部位均可发生。近年来，口腔颌而部淋巴瘤发病率上升快，占头颈部肿瘤的3%，占全身淋巴瘤的8%-27%。EB病毒（EPstein-Barr virus，EBV）属于疱疹病毒亚科，病毒潜伏，易致肿瘤发生。研究表明，许多肿瘤发生与EBV感染有关，如鼻咽癌、何杰金氏病、伯基特淋巴瘤等。本研究通过对在我院收治的40例口腔颌而部淋巴瘤患者进行分析，探索口腔颌而部淋巴瘤的临床病理特征与EBV感染的相关性，为临床治疗提供理论依据。

1 对象和方法

1.1 一般资料

收集2014年1月1日201 5年1月1日在新疆医科大学第一附属医院口腔颌而外科首诊的，经病理学检查确诊为非霍奇金淋巴瘤的病例40例，其中男22例，女18例；年龄24-75岁，平均年龄（52.8±6.4）岁，中位年龄（51.7±5.6）岁，临床分期：I期：12例，II期：14例，III期：14例，IV期：IO例。

1.2 仪器与试剂

CD20、CD79a、Pax-5. CD15、CD30. CD45Ro.CyclinDI、CD23、CD5、Ki-67、HMB45、S-IOO、CKpan、波形蛋白、CDIO，ALK、CD65、CD56封闭液+一抗，兔抗鼠免疫组化二抗试剂盒，DAB试剂盒，过氧化氢，多聚赖氨酸，0.01%柠檬酸钠缓冲液；二甲苯，无水乙醇，石蜡，苏木素，中性树胶（中国常州山峰化工有限公司）。

超净工作台（美国Formal）；普通离心机（上海飞鸽）；倒置显微镜（日本Olympus）；组织包埋机（日本SAKURA）；脱水机（日本TIYODA）；超薄切片机（德国Leica）；台式恒温振荡器（上海精宏）；计算机图像分析系统（美国惠普）。

1.3 方法及诊断

入组病例为手术切除标本及活检标本，均行HE染色及免疫组织化学染色，由2名高年资病理医师阅片。参照WHO（2008版）造血与淋巴组织肿瘤分型。免疫组织化学采用二步法，包括CD20、CD79a、Pax-5、CD15、CD30、CD45Ro、CyclinDI、CD23、CD5、Ki-67、HMB45、S-IOO、CKpan、波形蛋白、CDIO、ALK、CD65、CD56等。

1.4 ISH检测

应用ISH技术检测40例淋巴瘤石蜡包埋组织EBV的感染情况，采用地高辛标记的EBER RNA寡核苷酸探针，与EBV编码的小RNA互补结合。连续切片，厚度3-4μm，附于3氨丙基三乙氧硅烷（APEC）处理过的载玻片上。58℃烤片2h，二甲苯脱蜡lOmin，无水乙醇浸泡5min。空气干燥，加胃蛋白酶于37℃环境下消化30min，梯度乙醇脱水、空气干燥。滴加探针，加盖玻片，37℃孵育过夜。PBS冲洗，加辣根过氧化物酶标记的地高辛抗体，37℃孵育30min，DAB显色，苏木精复染。分别使用阳性对照探针与阴性对照应用于已知的阳性切片。

1.5 结果判断结果

阳性信号呈紫蓝色，定位于细胞核，每（20×10）倍视野中阳性细胞数≤1%为1分，2%-lO%为2分，11%-50%为3分，大于等于51%为4分。1-4分为阳性，O分为阴性。

1.6 统计学方法

采用SPSS17.O统计软件，淋巴结转移与各临床病理特征关系的单因素分析采用卡方检验，多因素分析采用Logistic回归模型，以P

2 结果

2.1 颌而部淋巴瘤的临床病理特征与EBV感染的相关性

入组的40例颌而部淋巴瘤患者中，出现EBV感染有18例，占45%。从性别、年龄、肿瘤部位、HL淋巴结内外、病灶数量、临床分期、肿瘤分型、病理类型、LDH水平进行比较，性别、年龄、肿瘤部位、病灶数量各亚组间比较差异无统计学意义（P>O.05）；HL结内占60%，高于结外，差异有统计学意义（P<0.05）；临床分期方而，III+IV期者71.4%，高于I+II期，差异有统计学意义（P<0.05）；肿瘤分型上，NHL占54.9%，HL占11.1%，差异有统计学意义（P<0.05）；病理分型中，NKT出现EBV感染者占76.9%，BCL占23.1%，TCL占200h，HL占11.1%，差异有统计学意义（P250mmol/l者占60%，高于LDH≤250mmol/l者，差异有统计学意义（P<0.05）；具体结果见表1所示。

2.2 颌而部淋巴瘤的临床病理特征与EBV感染的多因素分析

对HL淋巴结发生部位、临床分期、肿瘤分型、病理类型、LDH水平进行logistic多因素分析，结果发现，HL淋巴结发生部位、临床分期、肿瘤分型、病理类型、LDH水平均是颌而部淋巴瘤患者EBV感染的独立危险因素，其相对危险度见表2。

3 讨论

恶性淋巴瘤发生于淋巴细胞及前体细胞，首发症状为肉眼可见的，呈局灶性的肿瘤性质的肿物。淋巴瘤分两大类：霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤，后者占淋巴瘤总数的80%-90%。EBV主要入侵人体的口腔、鼻咽部淋巴组织，感染B淋巴细胞、T淋巴细胞，约90%成人血清中可检测到EBV抗体，EBV隐性感染者可终身携带。截至目前的研究发现，EBV感染与鼻咽癌、淋巴瘤、淋巴组织增生性疾病有关。然而，EBV感染与淋巴瘤的临床病理特征是否有相关性，研究者们仍未经研究证实。

在本研究ISH技术检测EBV感染情况，出现EBV感染有18例，占45%。男性患者约45.5%出现EBV感染，女性占44.5%，60岁以下有52.2%出现EBV感染，60岁以上占35.3%。有研究者发现，该病发病男性患者偏多，年龄2-82岁，男女比例2.4：1。口腔颌而部淋巴瘤发生于牙龈、腭、颊、颌骨等部位，多为非霍奇金淋巴瘤。本研究中，发生于腮腺者占62.5%，牙龈区占71.4%，硬腭占57.1%，下颌骨占50%，在发病部位上无明显差异。口腔颌而部淋巴瘤多为淋巴结外病变，有的表现为无淋巴结受累，发生于颌而骨的伯基特淋巴瘤都存在EBV感染。本研究中，NHL占54.9%，明显高于HL的11.1%，HL结外者占60%，高于结内，提示HL淋巴结内外发病与EBV感染有关。此外，本研究还从病灶数目、临床分期、肿瘤分型、LDH水平等方而进行比较发现，单发病灶占39. 3%，多发者占58.3%，无明显差异，III+IV期者71.4%，高于I+II期；NKT出现EBV感染者占76.9%，BCL占23.1%，TCL占20%，HL占11.1%； LDH>250mmol/l者占60%，高于LDH≤250mmol/l者。表明，EBV感染与颌而部淋巴瘤的临床分期、肿瘤分型、LDH水平具有相关性。

进一步对单因素分析结果行logistic多因素分析发现，HL淋巴结内外发生部位、临床分期、肿瘤分型、病理类型、LDH水平均是颌而部淋巴瘤患者EBV感染的独立危险因素。在EBV的作用机制上，EBV通过gp350结合CD21，通过受体介导的细胞内吞作用进入被感染细胞，感染B淋巴细胞后，DNA自我复制。在口腔颌而部淋巴瘤中，NHL较HL更多见，约占总数的5%。EBV与经典型HL所有亚型相关，但EBV感染是NHL的非主要事件，是病因、促发因素、伴随因素尚未证实。Kimura指出，口腔颌而部淋巴瘤与EBV感染有关的常发生于淋巴结外组织。口腔颌而部EBV阳性淋巴瘤以NK/T为主，EBV感染与NK/T细胞淋巴瘤的生、发展密切相关。这均与本研究结果相近似。

综上所述，EBV感染在口腔颌而部淋巴瘤患者呈高度阳性表达，与性别、年龄、肿瘤部位、病灶数量无关，HL淋巴结内外发生部位、临床分期、肿瘤分型、病理类型、LDH水平均是颌而部淋巴瘤患者EBV感染的独立危险因素，可能在淋巴瘤的发生、发展过程中发挥重要作用。EBV感染与口腔颌而部淋巴瘤发生发展的具体机制仍需进一步实验研究，为临床上寻找淋巴瘤新的治疗方式提供理论依据。