细胞辅助脂肪移植术中颗粒脂肪无菌低温保存技术的应用及护理

黄海玲 陈苑雯 廖选 张雅丽 曹凤 刘晖 刘宏伟

(暨南大学附属第一医院整形外科，广东 广州 510630)



·护理创新·

细胞辅助脂肪移植术中颗粒脂肪无菌低温保存技术的应用及护理

黄海玲 陈苑雯 廖选 张雅丽 曹凤 刘晖 刘宏伟

(暨南大学附属第一医院整形外科，广东 广州 510630)

脂肪移植； 脂肪源性干细胞； 抽脂术； 护理

Adipose transplantation; Adipose-derived stem cells; Liposuctio； Nursing

细胞辅助脂肪移植技术(Cell-assisted lipotransfer)是将自体脂肪源性干细胞(Adipose-derived stem cells，ADSCs)与脂肪细胞混合，联合注射移植[1-2]。该技术涉及到细胞的分离、提取、运输和保存等一系列操作程序，不同于普通脂肪移植获取脂肪后马上进行移植注射。如何在这期间保护颗粒脂肪活力就显得非常重要。因此，在临床操作中，从脂肪颗粒的获取、分离、运输到移植期间，需对脂肪进行无菌低温保存，以保持脂肪细胞良好的活性，提高组织成活率，并严防细菌污染的发生。我院于2011年6月—2015年5月应用自体细胞辅助脂肪移植技术对进行隆乳、面部年轻化治疗加面部脂肪充填的患者，采取了一系列的操作方法[3]，取得了良好的临床效果。现报告如下。

1 临床资料

1.1 一般资料 选取我院于2011年6月—2015年5月行自体细胞辅助脂肪移植技术的患者112例，其中隆乳89例，面部年轻化治疗加面部脂肪充填23例；患者均为女性；年龄22～51岁，平均年龄36.75岁。所有患者抽脂术和脂肪注射移植术两次手术均于24 h内完成，颗粒脂肪于4 ℃恒温冰箱内保存6～21 h，平均保存15.8 h。注射移植时脂肪低温保存时间60～145 min，平均低温保存时间78 min。

1.2 方法 患者先行抽脂术获取脂肪。其中111例患者采用局部肿胀麻醉，1例采用硬膜外麻醉；局部肿胀麻醉后，应用自制的获取可移植脂肪颗粒装置[4]，抽吸腹部、髂腰部和大腿脂肪；根据移植需要量获取相应的脂肪量。抽吸出来的脂肪分成两部分，一部分作为脂肪支架用于移植充填，脂肪支架放置于储存桶内存放于医用4℃恒温冰箱内保存。另一部分脂肪放置于移送桶送细胞处理室富集提取ADSCs。当天下午或次日行注射移植术，术前脂肪支架与ADSCs混合，用注射器装管后放置于存放器内低温保存。

1.3 结果 随机抽查15例患者，抽脂时，脂肪回收瓶壁冰水温度为1.3～10.3 ℃，平均温度为(5.8±2.4)℃；脂肪回收瓶壁脂肪抽出物部位温度7.6～12.8 ℃，平均温度为(9.3±3.6)℃。储存桶打包放冰箱前，桶内活动板下温度为11.6～16 ℃，平均温度为(12.8±1.4)℃；注射器脂肪处管壁为15.4～17.5℃，平均温度为(16.2±1.1)℃。脂肪注射时，开盖时桶内温度为3.7～4.8 ℃，平均温度为(4.1±0.3)℃；方盒里防水单上温度为1.6～8.9℃，平均温度为(5.3±1.8)℃；注射器脂肪处管壁温度为8.5～15.8 ℃，平均温度为(10.2±2.5)℃。同时对样本进行检测，即抽脂时保留脂肪、送分离提取脂肪源性干细胞脂肪、脂肪干悬液和保留脂肪颗粒，行ADSCs活性检测和细菌培养，结果所有检测标本显示ADSCs生长良好，细菌培养均为阴性。术后随访全部患者未发现移植区感染，患者满意度较高。

2 无菌低温保存技术及护理

2.1 特殊用物 1L容量脂肪回收瓶3个(上海吸引器厂)，CV-20型STNC单向阀1个(广州空气压缩机厂生产)，抽脂机和抽脂器械一套(上海众知天工医疗器械有限公司)，14 cm×16 cm不锈钢盅1个，20 cm×33 cm不锈钢储存桶1～2个(自制)，18 cm×28 cm不锈钢移送桶1～3个(自制)，29 cm×44 cm不锈钢存放器1个(自制)，3.5 mm×35 cm平头长针头1支(自制)，海尔恒温冰箱一台，红外线温度计1个(CEM DT-810,-30～260 ℃)，小冰箱一个(或40 cm×35 cm泡沫箱一个)，500 mL无菌盐水冰块3块，100 mL无菌盐水冰块12～14块，冰沙适量。

2.2 抽脂获取脂肪过程中的无菌低温保存技术及护理 为了获取颗粒均匀、适合移植的脂肪细胞，需要使用小管径抽脂针(管径2.5～3.5 mm)、(30±5)kPa的低压力进行抽脂术获取脂肪，这使得抽脂手术所需时间比较长，因此，获取脂肪过程中脂肪颗粒要置于低温环境。脂肪抽吸过程中，用不锈钢盅内装500 mL无菌盐水冰块1块加4 ℃无菌冰盐水700 mL，脂肪回收瓶放入其中，使瓶内所收集脂肪处于低温环境，以保持脂肪获取过程中能保持脂肪细胞良好活性。

2.3 等待分离提取脂肪源性干细胞过程中的无菌低温保存技术及护理[5]

2.3.1 密闭无菌保存可移植脂肪颗粒储存桶的制作 选用不锈钢材料，制成直径20 cm、高33 cm圆柱形桶；桶内高15 cm处设一圈0.4 cm支撑突出；一块直径19.5 cm圆形平面不锈钢薄板，平面设12个直径为3.2 cm的圆形掏空；使用时把有12个掏空的不锈钢圆形活动板放置于储存桶内支承突出处，此板可活动拿出；桶口设四个活动密封扣；盖子内贴密封胶板。盖上盖子，扣上4个密封扣后，桶内处于密封状态。

2.3.2 具体操作方法及护理配合 (1)脂肪装管。用50 mL注射器连接内径3.5 mm×35 cm平头长针头，从脂肪回收瓶盖吸入口抽吸脂肪，即操作过程中脂肪颗粒始终处于密闭中，尽可能不暴露在空气中，根据移植需要量抽取相应脂肪量。抽好脂肪后注射器针头端连接塞子。(2)储存桶内放置冰块。打开已灭菌好的储存桶盖子，把2袋100 mL的无菌盐水冰块放进已灭菌好的储存桶内，再把有12个掏空的不锈钢活动板放置于储存桶内支承突出处。装好脂肪的注射器塞子端朝下放进桶内圆形掏空处，让注射器呈垂直状。桶内放冰块的目的是为了在收集脂肪的过程中，桶内脂肪处于低温环境。(3)脂肪需要量收集完毕后，把桶内融化那部分冰水去掉，盖上盖子，扣紧密封扣。密封盖子一旦盖上，直到取用脂肪时方能开盖，避免中途开盖导致污染。红外线温度计检测储存桶打包放冰箱前桶内活动板下温度和注射器脂肪处管壁温度。(4)脂肪放进储存桶后尽可能在1 h内进4 ℃恒温冰箱。用无菌包布将储存桶无菌打包，再交给巡回护士。巡回护士在储存桶外面贴好标签，然后放进专门存放无菌脂肪的医用4 ℃恒温冰箱内保存。标签必须准确，以防不同患者的颗粒脂肪混淆不清，发生移植错误。

2.4 移送脂肪过程中的无菌低温保存技术及护理 如果细胞处理室是和手术室分隔两处，脂肪移送至细胞处理室的运输过程中也要进行低温保存。

2.4.1 密闭移送桶的制作 选用不锈钢材料，制成直径18 cm、高28 cm圆柱形桶；桶口设4个活动密封扣；盖子内贴密封胶板。盖上盖子，扣上4个密封扣后，桶内处于密封状态。

2.4.2 具体操作方法及护理配合 (1)把脂肪回收瓶的吸入口和引出口用短无菌管封口。(2)把脂肪回收瓶放进已灭菌的移送桶内，盖上盖子，扣紧密封扣。(3)把移送桶无菌打包，放进小冰箱内进行运送。没有小冰箱可用内装冰沙的泡沫箱代替。

2.5 注射时可移植脂肪颗粒的无菌低温技术及护理[6]

2.5.1 脂肪存放器的制作 选用不锈钢材料，制成一个长方形大方盒，由盒体和盖子组成。盒体由两个独立的内、外盒组成，内盒小外盒大，内盒为42 cm×28 cm×7.5 cm，外盒为44 cm×29 cm×8 cm，内外盒间有1 cm的空隙；盖子也由内外两层组成，内层为42 cm×28 cm、外层为44 cm×29 cm，内外层间隔是1 cm的焊接死隙。盖上盖子后，盒内形成相对封闭空间。

2.5.2 具体操作方法及护理配合 (1)巡回护士从4 ℃医用冰箱内取出储存桶，核对标签无误后打开无菌包布，带无菌手套后打开密封盖子，再由手术台上人员从罐内拿出装有脂肪颗粒的注射器放置于手术台上。红外线温度计检测开盖时桶内温度。(2)把已灭菌的内盒放进外盒，然后把10块100 mL无菌冰块放进盒内，冰块上面铺上一次性使用治疗巾。(3)脂肪源性干细胞混悬液和脂肪支架混合后，用20 mL螺纹注射器装管后放置于冰块盒内治疗巾上，盖上盖子。(4)注射时打开盖子拿出注射器，再分装到5 mL螺纹注射器进行注射。红外线温度计检测方盒里防水单上温度和注射器脂肪处管壁温度。

3 讨论

脂肪组织作为充填材料应用于临床已有100多年历史，特别是自体细胞辅助脂肪移植技术的问世[1]，不仅提高了脂肪成活率，而且使大容量脂肪移植(200～300 mL)可以一次取得成功，使得自体脂肪移植受到越来越多的医生和患者的青眯。由于技术要求增加了抽取脂肪的量和时间，这无疑增加了颗粒脂肪体外停留的时间。如何让颗粒脂肪在体外能够得到很好的保存而不丧失其绝大部分活力。

成为移植成功的关键，笔者的研究结果提示，4 ℃低温保存对脂肪组织有重要意义，24 h内可以很好的保护其活性，脂肪组织离体后若无法在1 h内使用，应放入4 ℃冰箱中无菌低温保存,与文献[7-8]报道相似。因此，我们在临床操作中，为能获得无菌和较好细胞活性的脂肪组织，抽脂时，脂肪回收瓶应置于无菌手术操作台，并将其置于无菌冰块盐水混合液中；在等待对脂肪和液体部分进行分离提取脂肪源性干细胞期间，用于移植的脂肪颗粒放置于自制的密封储存桶内，存放于专用存放无菌颗粒脂肪的医用冰箱，4 ℃无菌低温保存；运输过程中脂肪颗粒放置于自制移送桶内，要用小冰箱或内装冰沙的泡沫箱运送达细胞处理室；注射移植时，已准备好的脂肪应存放在自制的、内装冰块的存放器盒内低温保存。采取上述无菌低温保存方法目的是为了保持脂肪细胞良好活性，提高移植组织成活率和预防细菌污染的发生。

本研究使用的储存桶、移送桶和存放器选用不锈钢材料，因为不锈钢的传温效果好,便于清洗灭菌。储存桶内的可活动掏空圆板，既可让注射器保持垂直状态利于脂肪静置，又方便清洗消毒；储存桶和移送桶的盖子内装密封胶板及4个密封扣设计，加强了桶内的密闭性，避免与空气接触而导致污染。存放器盒体和盖子的双层设计，是为了减少室温环境下的热传导，让盒内可以维持较长时间的低温环境。我们用红外线温度计对低温保存操作方法进行检测，结果显示低温效果比较理想。这一系列操作具有简便、经济、实用、易于操作使用的特点，解决了细胞产品和支架材料的短期低温保存问题，满足了自体细胞辅助脂肪移植技术的顺利完成，值得在实践中推广应用。

[1] Kotaro Yoshimura, Katsujiro Sato,Noriyuki Aoi. Cell-assisted lipotransfer for cosmetic breast augmentation:supportive use of adipose-derived stem/stromal cells[J]. Aesth Plast Surg， 2008, 32:48-55.

[2] 高景恒，袁继龙，王志军，等.CAL技术的研究与应用进展[J].中国美容整形外科杂志,2009,20(7):442-444.

[3] 黄海玲，何金爱，刘宏伟，等.自体细胞辅助脂肪注射隆乳的手术配合[J].护士进修杂志，2013，28(8)：742-744.

[4] 黄海玲，刘宏伟，佘文莉，等.介绍一种微创无菌快速获取可移植脂肪颗粒装置[J].中华整形外科杂志，2011，27(6)：467-468.

[5] 黄海玲，刘宏伟，欧伟光，等.密闭无菌保存可移植脂肪颗粒储存桶的研制与应用[J].护士进修杂志，2014，29(13)：80-81.

[6] 黄海玲，刘宏伟，佘文莉，等. 可移植脂肪颗粒存放器的研制与应用[J]. 护士进修杂志,2014，29(18)：1715-1716.

[7] Daisuke Matsumoto MD, Tomokuni Shigeura MS, Katsujiro Sato MD.Influences of preservation at various temperatures on liposuction aspirates [J]. Plastic and Reconstructive Surgery,2007,120 (6):1510-1517.

[8] 陈苑雯，钟鸿展，刘宏伟.颗粒脂肪体外处理方法对其存活质量影响的研究进展[J].中国美容医学，2013,22(1):204-207.

国家自然科学基金资助项目(编号：81272100)；广东省医学科研基金立项课题(编号：A2014391)；暨南大学第一临床医学院护理科研专项基金立项项目(编号：2013406)

黄海玲(1974-)，女，广东罗定，本科，副主任护师，从事临床护理工作

刘宏伟，E-mail：liuhongwei0521@hotmail.com

R472

B

10.16821/j.cnki.hsjx.2016.23.028

2016-05-12)

国家专利：国家实用新型专利(编号：ZL 201320451668.9)；国家实用新型专利(编号：ZL 201320452277.9)