九头狮子草对小鼠的抑菌、止痒、抗炎作用

罗忠圣　周　镁　黄秀平　秦拴梅　范菊娣　覃容贵

(贵阳新天药业股份有限公司药物研究所，贵州　贵阳　550018)



九头狮子草对小鼠的抑菌、止痒、抗炎作用

罗忠圣周镁1黄秀平1秦拴梅1范菊娣1覃容贵1

(贵阳新天药业股份有限公司药物研究所，贵州贵阳550018)

〔摘要〕目的研究九头狮子草的抑菌、止痒、抗炎作用。方法采用平皿二倍稀释法，观察九头狮子草的体外抑菌作用；采用右旋糖酐致小鼠瘙痒模型、磷酸组织胺对豚鼠局部皮肤致痒耐受试验，观察九头狮子草的止痒作用；采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀模型，新鲜鸡蛋清致小鼠足跖肿胀模型，观察九头狮子草的抗炎作用。结果九头狮子草对金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌有不同程度的抑制作用。九头狮子草各剂量均可明显降低右旋糖酐所致小鼠的瘙痒次数及瘙痒持续总时间(P<0.05)，中、高剂量能显著提高磷酸组胺所致豚鼠的致痒阈(P<0.05)。各剂量均能显著降低二甲苯所致的小鼠耳廓肿胀度(P<0.05)，提高肿胀抑制率；各剂量均能显著降低新鲜鸡蛋清所致的小鼠足跖肿胀度(P<0.05)，提高肿胀抑制率；中、高剂量能显著降低炎性足前列腺素(PG)E2含量(P<0.05)，提高PGE2抑制率。结论九头狮子草具有良好的抑菌、止痒、抗炎作用。

〔关键词〕九头狮子草；抑菌；抗炎；止痒

1 贵阳医学院药学院中药学教研室

第一作者：罗忠圣(1971-)，男，副主任药师，主要从事中药制药及新药研究。

九头狮子草为爵床科植物九头狮子草全草，主产贵州，其性味辛、凉，功用主治为祛风、清热、化痰、解毒，用于治疗风热咳嗽、小儿惊风、喉痛、疔毒、乳痈。与其他药物配伍使用，治疗肺热咳嗽、虚热咳嗽、小儿吐奶并泄青、男子尿结、咽喉肿痛、痔疮、蛇咬伤、黑疱疔、妇女白带、经漏等〔1~3〕。在贵州黔东南地区，九头狮子草常被世居苗族妇女习用于治疗妇科泌尿系统感染，本文研究其抗菌、止痒、抗炎作用。

1材料与方法

1.1动物及药物昆明种小鼠，清洁级，雌雄各半，体质量20~25 g；健康豚鼠，清洁级，雌雄各半，体质量200~250 g。以上动物均由贵阳医学院实验动物中心提供，合格证号：SYXK(黔)2002—0001。九头狮子草干燥药材，购自贵阳市万东药材市场，经贵阳医学院药学院生药教研室龙庆德副教授鉴定为正品，药材标本保留于贵阳医学院药学院中药标本馆。九头狮子草用70%乙醇回流提取2次，每次2 h，减压浓缩，挥干乙醇，用蒸馏水配成1.5 g/ml (含生药量)的药液，按需稀释。右旋糖酐(批号：T11092204 四川科伦药业股份有限公司)；赛庚啶乳膏(批号：20120819常州四药制药有限公司)；新霉素氟轻松乳膏(批号：广东恒建制药有限公司)；氢化可的松注射液(批号：20110903 天津金耀氨基酸有限公司)；扑尔敏(批号：20110703 华中药业股份有限公司)；地塞米松(批号：111108 浙江仙琚制药有限公司)。

1.2实验菌株及培养基金黄色葡萄球菌(ATCC25923)、肺炎链球菌、绿脓杆菌(ATCC28753)、大肠杆菌(ATCC25922)，由贵阳医学院微生物学教研室提供。营养肉汤培养基，上海康瑞生物科技有限公司，批号120221；营养琼脂，上海盛思生化科技有限公司，批号121118。

1.3仪器数显电热培养箱，303A-型，武汉精华科教仪器有限公司；电热恒温箱WSZ-134-75，型号HH-BH，天津实验仪器厂；不锈钢手提式压力蒸汽灭菌器，YXQ-SG46-280SA，上海博迅实业有限公司医疗设备厂；超净工作台，型号SW-CJ-1F，苏净集团安泰公司；UV-2401紫外分光光度计，日本岛津。

1.4方法

1.4.1体外抑菌实验采用平皿二倍稀释法〔4〕。取金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌四株菌分别接种到普通营养肉汤中，在37℃恒温培养箱中培养24 h，使菌活化繁殖，测定菌液中活菌数并稀释成5×105CFU/ml供试菌悬液，备用。将已稀释好的实验药物分别加入冷却至55℃左右的灭菌培养基中，混匀，制成不同浓度的药物平板。取金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌等实验菌悬液，分别划种于不同浓度的含药平板，37℃培养18 h，观察记录最小抑菌浓度(MIC)。

1.4.2止痒实验

1.4.2.1对右旋糖酐致瘙痒小鼠的影响〔5〕取昆明种小鼠50只，雌雄各半，随机分成五组，每组10只。分别为空白对照组(蒸馏水)，九头狮子草低、中、高剂量组(15、22.5、30 g/kg)；赛庚啶乳膏阳性对照组。各组小鼠腹部剃毛2 cm×1 cm，分别将受试药液或对照液均匀涂于剃毛区，每天2次，连续3 d。末次给药30 min后，于各组小鼠尾静脉注射0.02%右旋糖酐5 ml/kg。以小鼠前爪搔抓头部，后爪搔抓躯干，嘴咬全身各部位作为搔痒反应指标。观察并记录每只小鼠30 min内各组小鼠瘙痒次数及瘙痒持续总时间。

1.4.2.2对磷酸组胺致痒豚鼠的影响〔6〕取健康豚鼠50只，雌雄各半，随机分成5组，每组10只。分别为空白对照组(蒸馏水)，九头狮子草低、中、高剂量组(10、15、20 g/kg)，新霉素氟轻松乳膏阳性对照组(0.1 g/足)。实验前1 d，将各组豚鼠左后足背部剃毛，将左后足浸泡在药液中10 min取出，模型对照组给予等量蒸馏水，阳性组涂新霉素氟轻松乳膏，每日2次，连续2 d。第3天用0号砂纸擦伤豚鼠右后足背部剃毛处，擦伤程度以损伤表皮，不伤真皮，皮肤轻度渗血为度，面积约1 cm2，局部再给药1次，末次给药后10 min，开始于创面处滴0.01%磷酸组织胺每只 0.05 ml，此后每隔3 min依次按0.01%，0.02%，0.03%，0.04%…磷酸组织胺浓度递增，每次均为50 μl/只，直至豚鼠出现回头舔右后足为止。以豚鼠出现回头舔右后足时所给予的磷酸组织胺总量为致痒阈，记录并比较各组的致痒阈。

1.4.3抗炎实验

1.4.3.1对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响〔7〕小鼠分组及给药同1.4.2.1，阳性对照组给予氢化可的松(0.006 g/kg)。于末次给药后40 min，每只小鼠右耳内外侧涂二甲苯0.03 ml致炎，左耳不涂为正常耳对照，1 h后脱颈椎处死，沿耳廓基线剪下双耳，用8 mm打孔器冲下左耳及右耳同一部位的圆片，分别称重，以两耳的质量之差作为肿胀度，计算肿胀抑制率：肿胀抑制率=(空白对照组平均肿胀度-给药组平均肿胀度)/空白对照组平均肿胀度×100%。

1.4.3.2对新鲜鸡蛋清所致的小鼠足跖肿胀的影响〔7，8〕小鼠分组及给药同1.4.2.1，阳性对照组给予地塞米松(0.01 g/kg)。于末次给药后40 min，每只小鼠右后足跖皮下注射10%新鲜鸡蛋清0.03 ml。致炎4 h后处死动物，在踝关节上剪下后足，精密称取左右两后足质量，以两足的质量之差作为炎症肿胀度。将炎性足充分剪碎后称重并置于生理盐水中浸泡2 h，3 000 r/min离心10 min，取上清液0.2 ml，加0.5 mol/L的氢氧化钾-甲醇溶液2 ml，50℃下异构化20 min，用甲醇稀释至4 ml，于波长278 nm处测定其OD值，以每克炎症组织相当的OD值表示PGE2的相对含量。计算肿胀抑制率及炎症组织PGE2抑制率，肿胀抑制率计算方法同1.4.3.1，前列腺素(PG)E2抑制率=(空白对照组炎性组织PGE2含量-给药组炎性组织PGE2含量)/空白对照组组织PGE2含量×100%。

1.5统计学方法采用SPSS17.0软件进行t检验及秩和检验。

2结果

2.1体外抑菌实验九头狮子草对四种病原菌的抑制作用强度依次为：大肠杆菌(MIC=7.8 mg/ml)、金黄色葡萄球菌(MIC=31.2 mg/ml)、绿脓杆菌(MIC=62.5 mg/ml)、肺炎链球菌(MIC=125 mg/ml)。

2.2止痒实验与空白对照组比较，九头狮子草各剂量均可明显降低右旋糖酐所致小鼠的瘙痒次数及瘙痒持续总时间(P<0.05)。见表1。与空白对照组致痒阈〔(17.5±4.95)μg〕比较，九头狮子草低、中、高剂量〔(33.5±9.98)、(143±34.21)、(232.5±30.79)μg〕均能显著提高磷酸组胺所致豚鼠的致痒阈(P<0.05)。阳性对照组亦能提高豚鼠的致痒阈〔(270±15.81)μg〕。

2.3抗炎实验与空白对照组比较，九头狮子草各剂量均能显著降低二甲苯所致的小鼠耳廓肿胀度(P<0.05)，提高肿胀抑制率。见表2。九头狮子草各剂量均能显著降低新鲜鸡蛋清所致小鼠足跖肿胀(P<0.05)，提高肿胀抑制率；中、高剂量能显著降低炎性足PGE2含量(P<0.05)，提高PGE2抑制率。见表3。

表1　对右旋糖酐致小鼠瘙痒的影响±s,n=10)

与空白对照组比较：1)P<0.05，下表同

表2　对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响(n=10)

表3　新鲜鸡蛋清所致的小鼠足跖肿胀的影响±s，n=10)

3讨论

阴道炎是阴道黏膜及黏膜下结缔组织的炎症，在各年龄层次的妇女均可发生。目前西医治疗阴道炎主要应用抗生素和化学药物，近期疗效较好，而长时间口服抗生素会产生毒副作用，若通过阴道给药又常引起菌群失调导致真菌性阴道炎等，因此临床应用受到一定的限制。而中药治疗阴道炎临床疗效良好，标本兼治，起效迅速，愈后无复发，经济方便，安全可靠。九头狮子草为贵州省少数民族地区民间治疗妇科泌尿系统感染的草药，疗效良好。本实验结果表明九头狮子草对金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌有不同程度的抑制作用；可降低右旋糖酐所致小鼠的瘙痒次数及瘙痒持续总时间，并提高磷酸组胺所致豚鼠的致痒阈，具有显著的止痒作用；能降低二甲苯所致的小鼠耳廓肿胀度，提高肿胀抑制率，能降低新鲜鸡蛋清所致的小鼠足跖肿胀度，提高肿胀抑制率，还能显著降低炎性足PGE2含量，提高PGE2抑制率，具有显著的抗炎作用。以上结果与其临床应用和功能主治相吻合，为九头狮子草治疗阴道炎提供了充分的实验依据。九头狮子草在抗菌的同时兼有抗炎、止痒作用，这对各种原因引起的阴道炎来说可以达到标本兼治疗的效果。

前期研究结果表明九头狮子草有良好的解热作用，其水提液，石油醚部位及水部位均具有解热作用，石油醚部位及水部位为解热有效部位，解热作用机制可能与降低血清中IL-6水平和下丘脑cAMP、PGE2含量有关〔9，10〕。因此，推测九头狮子草抗炎作用也与降低IL-6的水平有关。

4参考文献

1江苏新医学院编.中药大辞典〔M〕.上海：上海科学技术出版社，2010：48-9.

2蔡小玲，张可锋.九头狮子草显微结构鉴别研究〔J〕.中国民族民间医药杂志，2010；19(11)：31-3.

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4刘元，韦焕英，黄凤娇.净得康喷雾剂的抗菌、止痒、抗炎作用研究〔J〕.中国实验方剂学杂志，2011；17(10)：212-5.

5王建农，刘青云，姚春海，等.地肤子“杀虫止痒”外用功能规范研究〔J〕.中药材，2012；35(12)：1974-7.

6刘丽芳，周亮，吴爱萍，等.矾冰纳米乳抗炎、镇痛、止痒作用的实验研究〔J〕.中药药理与临床，2010；26(5)：123-5.

7吴文君，杜菲菲，刘全旭，等.复方儿茶止泻霜对大鼠足肿胀、小鼠耳肿胀及腹腔毛细血管通透性的影响〔J〕.山东医药，2013；53(25)：26-8.

8赵博，陈超，饶娅琦.复方麦冬丸的镇痛抗炎作用〔J〕.中国组织工程研究与临床康复，2007；11(21)：4186-90.

9覃容贵，范菊娣，龙庆德，等.民族药九头狮子草解热有效部位的筛选〔J〕.中国医院药学杂志，2012；32(22)：1797-800.

10覃容贵，范菊娣，龙庆德，等.九头狮子草有效部位解热作用及其作用机制研究〔J〕.中国实验方剂学杂志，2012；18(21)：211-4.

〔2014-08-11修回〕

(编辑安冉冉/曹梦园)

通讯作者：覃容贵(1970-)，女，教授，博士，硕士生导师，主要从事中药资源及药理研究。

基金项目：贵州省科技厅联合基金项目(黔科合LG〔2011〕030-K2009-29)

〔中图分类号〕R961

〔文献标识码〕A

〔文章编号〕1005-9202(2016)03-0555-03；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.03.017