蜂胶总黄酮对异丙肾上腺素致病理性心肌肥厚小鼠心功能的影响

孙光伟　隋　欣　贾　琼　王伟楠　隋殿军

(吉林省中医药科学院，吉林　长春　130021)



蜂胶总黄酮对异丙肾上腺素致病理性心肌肥厚小鼠心功能的影响

孙光伟1，2隋欣1贾琼1王伟楠1隋殿军1

(吉林省中医药科学院，吉林长春130021)

〔摘要〕目的探讨蜂胶总黄酮(TFP)对异丙肾上腺素(ISO)诱导的病理性心肌肥厚(PCH)小鼠心功能的影响。方法8周龄雄性小鼠20只，适应性饲养1 w，随机分为对照组、ISO组、TFP组及ISO+TFP组。预先口服TFP (25 mg·kg-1·d-1)7 d之后持续给予ISO(25 mg·kg-1·d-1)7 d制备小鼠PCH模型。试验结束后24 h进行超声心动图检测，计算心脏重量/体重(HW/BW)比值，检测心房钠尿肽(ANP)的mRNA和蛋白表达水平。结果与对照组比较，ISO组小鼠收缩期左室内径(LVIDs)、舒张期左室内径(LVIDd)及左室收缩末期容积(LVVs)均明显升高，而射血分数(EF)、缩短分数(FS)明显降低，HW/BW及ANP蛋白、mRNA水平亦明显升高(P<0.05)；与ISO组比较，TFP+ISO组LVIDs、LVIDd及LVVs均明显降低，而EF、FS明显升高(P<0.05)，HW/BW及ANP蛋白、mRNA水平亦明显降低(P<0.05)。结论TFP可对抗ISO诱导的小鼠PCH，并对心功能损伤具有保护作用。

〔关键词〕蜂胶总黄酮；异丙肾上腺素；心肌肥厚；心功能

1长春中医药大学2吉林大学中日联谊医院

第一作者：孙光伟(1978-)，女，副主任医师，博士，主要从事心血管疾病的基础与临床研究。

病理性心肌肥厚(PCH)是心脏长期处于压力负荷过重的情况下产生的一种代偿功能。PCH会造成心肌需氧增加，此时冠状动脉的供血量不能满足相应的需求，就会造成心肌缺血，最后将导致心肌收缩力减退，最终发展为心力衰竭〔1〕。造成PCH的原因有多种，包括高血压，主动脉瓣狭窄等〔2〕。目前，治疗PCH主要应用增强心肌收缩力的药物(如洋地黄类、β受体兴奋药)以及减轻心脏负荷的药物(如硝酸甘油等)，但是其可使左心室流出道梗阻加重致使应用受限〔3〕。蜂胶总黄酮(TFP)是蜂胶中的有效成分，具有抗氧化的作用〔4〕，本课题组前期结果显示TFP具有心肌保护作用，但其对心肌肥厚是否也具有保护作用尚不清楚。本研究旨在探讨其对异丙肾上腺素(ISO)诱导的PCH小鼠心功能的影响及其机制。

1材料和方法

1.1动物8周龄雄性C57BL/6小鼠20只，体重22~24 g，由吉林大学基础医学院动物实验中心供给，合格证号：SCXK-(吉)2007-0003。动物饲养于通风动物房内，室温(20±2)℃，自由进食与饮水。

1.2实验药品和试剂TFP由长春中医药大学合成，批号：1019907，使用时以0.5%羧甲基纤维素钠配制成混悬液；ISO缓释渗透微泵购自Sigma公司，心房钠尿肽(ANP)抗体购自Santa Cruz公司；TRIzol、RNA提取试剂盒，ANP引物均购自Invitrogen公司。

1.3实验方法〔4〕20只小鼠适应性饲养1 w，随机分为对照组、ISO组、TFP组及ISO+TFP组。各组小鼠1.5%异氟醚麻醉，小鼠的肩胛间区域皮下植入含有PBS或ISO的缓释渗透微泵，释放速度是25 mg·kg-1·d-1，持续7 d。预先口服给予TFP (25 mg·kg-1·d-1)7 d之后持续给予ISO(25 mg·kg-1·d-1)7 d制备小鼠PCH模型。

1.4检测指标(1)试验结束后24 h进行超声心动图检测，包括收缩期左室内径(LVIDs)、舒张期左室内径(LVIDd)、左室收缩末期容积(LVVs)、左室舒张末期容积(LVVd)、射血分数(EF)、缩短分数(FS)、每搏输出量(SV)；(2)对各组小鼠直接测量体重(BW)和心脏重量(HW)，并计算HW/BW比值；(3)通过Q-RT-PCR和Western印迹法检测ANP mRNA和蛋白表达水平。

1.5统计学分析采用SPSS11.0软件行t检验。

2结果

2.1TPF对ISO致PCH小鼠心脏功能的影响与对照组比较，ISO组小鼠LVIDs、LVIDd及LVVs均明显升高，而EF、FS明显降低(P<0.05)；与ISO组比较，TFP+ISO组LVIDs、LVIDd及LVVs均明显降低，而EF、FS明显升高(P<0.05)，见表1。

表1　TPF对ISO致PCH小鼠心脏功能的影响

与对照组比较：1)P<0.05；与ISO组比较：2)P<0.05；下表同

2.2TFP对ISO致PCH小鼠HW/BW及ANP蛋白和mRNA水平的影响与对照组比较，ISO组小鼠HW/BW及ANP蛋白、mRNA水平明显升高(P<0.05)；与ISO组比较，TFP+ISO组小鼠HW/BW及ANP蛋白、mRNA水平明显降低(P<0.05)，见表2、表3。

表2　各组HW、HW/BW水平比较

表3　ANF蛋白及mRNA水平比较

3讨论

蜂胶作为传统中药，具有广泛的生物活性，如抗感染、抗氧化等。TFP是蜂胶的主要活性成分，具有很强的抗氧化活性。但是，蜂胶在心血管疾病中的作用尚不清楚。

ISO诱导可引起小鼠心肌缺血和心肌坏死，并逐步导致心脏舒张和收缩功能障碍，进一步发展为PCH〔5〕。采用皮下植入ISO的缓释渗透微泵释放药物后，ISO组小鼠出现严重的心功能异常，提示ISO组小鼠出现心脏收缩功能障碍。但是，TFP可逆转以上心功能参数，说明TFP可以减轻ISO诱导心肌肥厚小鼠的心功能损伤，从而发挥心肌保护作用。

HW/BW的比值可客观评价小鼠心肌肥厚的程度〔6〕。本实验结果表明TFP对ISO诱导的小鼠心肌肥厚具有抑制作用。PCH的特征在于细胞体积的增加以及代谢和生化指标的紊乱，并伴随着ANP的再活化，表现为ANP mRNA和蛋白表达显著升高〔7〕。而TFP可以抑制ANP mRNA和蛋白水平的升高，说明TFP对PCH具有一定的保护作用。

综上所述，TFP可对抗ISO诱导的小鼠PCH，并对心功能损伤具有保护作用，但其作用机制仍需进一步研究。

4参考文献

1Abel ED,Doenst T.Mitochondrial adaptations to physiological vs.pathological cardiac hypertrophy〔J〕.Cardiovasc Res,2011;90(2):234-42.

2Anderson M,Moore D,Larson D.Comparison of isoproterenol and dobutamine in the induction of cardiac hypertrophy and fibrosis〔J〕.Perfusion,2008;23(4):231-5.

3Bernardo BC,Weeks KL,Pretorius L,etal.Molecular distinction between physiological and pathological cardiac hypertrophy:experimental findings and therapeutic strategies〔J〕.Pharmacol Ther,2010;128(1):191-227.

4de Groot AC.Propolis:a review of properties,applications,chemical composition,contact allergy,and other adverse effects〔J〕.Dermatitis,2013;24(6):263-82.

5Bacharova L,Chen H,Estes EH,etal.Determinants of discrepancies in detection and comparison of the prognostic significance of left ventricular hypertrophy by electrocardiogram and cardiac magnetic resonance imaging〔J〕.Am J Cardiol,2015;115(4):515-22.

6Saba PS,Cameli M,Casalnuovo G,etal.Ventricular-vascular coupling in hypertension:methodological considerations and clinical implications〔J〕.J Cardiovasc Med(Hagerstown),2014;15(11):773-87.

7Swynghedauw B,Chevalier B.Biological characteristics of the myocardium during the regression of cardiac hypertrophy due to mechanical overload〔J〕.J Heart Valve Dis,1995;4(Suppl)2:S154-9.

〔2015-06-12修回〕

(编辑李相军)

The protective effect of total flavonoids of propolis on isoproterenol-induced pathological cardiac hypertrophy in mice

SUN Guang-Wei,SUI Xin,JIA Qiong,etal.

Jilin Research Institute of Traditional Chinese Medicine,Changchun 130021,Jilin,China

【Abstract】ObjectiveTo study the protective effect of total flavonoids of propolis(TFP)on isoproterenol(ISO)-induced pathological cardiac hypertrophy(PCH)and cardiac function mice.MethodsTwenty 8-week-old male mice were randomly divided into control,ISO,TFP and ISO+TFP groups.Echocardiography was used to test LVIDs, LVVs, EF, FS;and HW/BW ratio was calculated ,and mRNA and protein expression levels of ANF were detected.ResultsCompared with those of control group,LVIDs,LVIDd and LVVs in ISO group were increased significantly,but EF,FS were decreased,and HW/BW,mRNA and protein expression levels of ANF were increased(P<0.05).Compared with those of ISO group,LVIDs,LVIDd and LVVs in TFP 25 mg·kg-1·d-1+ISO group were decreased significantly,but EF,FS were increased,and HW/BW,mRNA and protein expression levels of ANF were decreased(P<0.05).ConclusionsTFP could be against ISO-induced PCH in mice,and has a protective effect on cardiac dysfunction.

【Key words】Total flavonoids of propolis;Isoproterenol;Cardiac hypertrophy;Cardiac function

通讯作者：隋殿军(1955-)，男，教授，博士生导师，主要从事中医药防治心血管疾病研究。

基金项目：国家自然科学基金面上项目(81173543)

〔中图分类号〕R-322

〔文献标识码〕A

〔文章编号〕1005-9202(2016)03-0519-02；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.03.003