脂褐素三种染色方法比较

董愉，张芬芬，吴惠群，梁英杰

（中山大学附属第一医院病理科，广州 510080）

技术方法

脂褐素三种染色方法比较

董愉，张芬芬，吴惠群，梁英杰*

（中山大学附属第一医院病理科，广州 510080）

目的比较显示脂褐素的3种特殊染色方法，探讨哪一种方法更适合应用于临床病理诊断。方法分别采用三氯化铁-铁氰化钾、醛品红和PAS 3种特殊染色方法，检测HE染色石蜡切片中呈浅棕色或金黄色的颗粒是否为脂褐素。三氯化铁-铁氰化钾染色的脂褐素呈蓝黑色颗粒，醛品红染色的脂褐素呈深紫色颗粒，PAS染色的脂褐素呈红色颗粒。结果通过3种染色结果的比较，发现三氯化铁-铁氰化钾染色对比清晰，定位准。结论三氯化铁-铁氰化钾、醛品红、PAS三种染色均可用于显示脂褐素，但三氯化铁铁氰化钾染色方法优于其他两种。

脂褐素；三氯化铁铁氰化钾染色；醛品红染色；PAS染色

脂褐素沉积在人体各组织器官细胞中，常见于肝脏、肾脏、心肌、肾上腺与神经细胞，主要分布在细胞核周围。在HE染色中，脂褐素和某些其他色素一样呈浅棕色或金黄色的颗粒，不容易区分。在临床病理诊断中，往往需要证实这些色素是否为脂褐素，以便辅助病理诊断。用特殊染色技术可以证实这些色素是否为脂褐素。常用的脂褐素特殊染色方法有多种，各有其优点和不足。本文对常用的三氯化铁-铁氰化钾、醛品红、PAS 3种脂褐素染色方法进行比较，探讨哪一种方法更适合应于临床病理诊断。

材料与方法

1 材料

收集中山大学附属第一医院2015-2016年上半年HE染色中含有黄棕色或棕褐色色素的病例8例，常规脱水石蜡包埋，行连续切片，切片厚度为4～5μm。将3张连续切片分别进行三氯化铁-铁氰化钾、醛品红和PAS染色，3种染色所用试剂均为本科室自行配制。

2 染色方法［1］

2.1 三氯化铁铁氰化钾染色

切片脱蜡至水，蒸馏水稍洗，浸入高铁化物液作用2～3min；流水冲洗后核固红复染胞核10min；稍水洗，常规脱水透明，中性树胶封片。

2.2 醛品红染色

切片脱蜡至水，酸化高锰酸钾氧化5min；稍水洗，2%草酸漂白1min；洗水冲洗，70%乙醇稍洗；醛品红液浸染（加盖）10min；70%乙醇洗2次，每次约30s，至切片没有染液脱出；稍水洗，常规脱水透明，中性树胶封片。

2.3 PAS染色

切片脱蜡至水，1%高碘酸氧化10min；稍水洗，蒸馏水洗3次，无色品红液室温暗处加盖作用20min；1%偏重亚硫酸钠洗1mim，流水冲洗；苏木素复染；流水冲洗，常规脱水透明，中性树胶封片。

结 果

HE染色，脂褐素呈浅棕色颗粒，细胞核蓝色，胞质红色（图1A）；三氯化铁-铁氰化钾法染色，脂褐素呈暗蓝黑色颗粒，细胞核红色（图1B）；醛品红法染色，脂褐素呈深紫色颗粒，黏液也染成深紫色（图1C）；PAS法染色，脂褐素呈红色颗粒，黏液也染成红色（图1D）。

图1 3种不同脂褐素染色方法效果比较。A，HE染色；B，三氯化铁-铁氰化钾染色；C，醛品红染色；D，PAS染色；箭，脂褐素；星号，黏液；比例尺，50μmFig.1 Comparison of the three staining methods for lipofuscin.A，HE stain；B，FCPF stain；C，AF stain；D，PAS stain；arrows，lipofuscin；asterisk，mucus；scale bar，50μm

讨 论

色素依据其来源分为3类：内源性色素、外源性色素和人为色素。脂褐素属于内源性色素，由机体自身所产生。其积累随年龄增长而增多，是衰老的重要指征之一。见于浅表皮肤者俗称“老年斑”。有研究指出，脂褐素沉积在人体各组织器官细胞中，导致细胞代谢减缓，活性下降，从而造成人体器官功能衰退产生衰老。在HE染色切片中，脂褐素在组织细胞内呈棕褐色颗粒，与其它一些不同性质和来源的色素相似而不易区别，必须借助于特殊染色才能将这些色素加以区分出来，因此，“色素染色”的意义就在于鉴别和证实它们，以便辅助病理诊断［2］。如结肠黑变病与慢性肠出血其肠黏膜内均见色素沉着，用特殊染色方法可进行鉴别，前者所含色素为脂褐素，后者含的色素为含铁血黄素［3］。

脂褐素特殊染色方法有多种，常用的有三氯化铁-铁氰化钾染色法、醛品红法和PAS法。3种染色法都可以很好地显示脂褐素，各有优点和不足（表1）。

表1 三种脂褐素特殊染色方法比较Tab.1 Com pairison of the three staining m ethods for lipofuscin

脂褐素的化学成分非常复杂，三氯化铁-铁氰化钾染色主要是因为脂褐素细胞含有高价铁，脂褐素内的还原物质与高铁化物溶液内的高铁离子作用被还原为亚铁盐，亚铁盐再与铁氰化钾反应而呈暗蓝色。进行三氯化铁-铁氰化钾染色时，要注意三氯化铁-铁氰化钾染色是进行性染色，切片在高铁化物内的时间不能太长，时间太长可显示任何能还原高铁化物的物质而造成背景染色，染色过程中应该不时在镜下观察以控制染色效果。

醛品红和PAS试剂较为常用，配好后可存放较长时间，一般实验室都有，需要染色时不用每次新鲜配制，但操作步骤比三氯化铁铁氰化钾法多，另外醛品红法和PAS法除了显示出脂褐素外，也能将黏液显示出来，二者均呈深紫色或红色。如果组织中也含有黏液，则着染同样颜色的黏液会影响脂褐素的观察。

综上所述，3种特殊染色方法均可用于检测组织中的脂褐素，但三氯化铁-铁氰化钾法具有更快捷、与组织其它成分对比好，更容易观察的优点，是首选的脂褐素染色方法，尤其是对一些含黏液的组织进行脂褐素染色时。

［1］梁英杰，凌启波，张威.临床病理学技术.广东：人民卫生出版社，2011，167-169.

［2］董妙珠，肖萍，洪新宇，等.不同染色法检测豚鼠皮肤黑色素的比较研究.环境与职业医学，2006，23（5）：423-425.

［3］张品南，夏作利，郭群.结肠黑变病的形态学与组化研究.现代中西医结合杂志，2008，17（35）：5421-5422.

［4］Timiras PS.Developmental Physiology and Aging.New York：The Macmillan Company，1972，502-506.

Comparison of three staining methods for lipofuscin

Dong Yu，Zhang Fenfen，Wu Huiqun，Liang Yingjie*
（Department of Pathology，the First Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University，Guangzhou 510080，China.）

ObjectiveTo compare three special stainingmethods for lipofuscin and find out which one is the best for clinical pathological diagnosis.M ethodsThree special stainingmethodswere used to stain and distinguish the lipofuscin in HE-stained paraffin sections，namely ferric chloride-potassium ferricyanide（FCPF）which stains lipofuscin blue-dark，aldehyde-fuchsin（AF）which stains lipofuscin deep-purple，and Periodic Acid Schiff（PAS）which stains lipofuscin red.ResultsIn the comparison of the staining results，FCPF staining was shown to be the best contrast and accurate loccanization.ConclusionAll threemethods are usable for lipofuscin staining，ofwhich FCPF is better than the other two.

Lipofuscin；ferric chloride-potassium ferricyanide stain；aldehyde-fuchsin stain；periodic acid Schiff（PAS）stain.

R331

A

10.16705／j.cnki.1004-1850.2016.06.016

2016-10-20

2016-12-14

董愉，女（1977年），汉族，主管技师

*通讯作者（Towhom correspondence should be addressed）：liangyjj＠163.com