IL-27基因多态性和血清IL-27p28水平与骨肉瘤风险相关性分析

喻紫晨

作者单位:430300 湖北省武汉市黄陂区人民医院



IL-27基因多态性和血清IL-27p28水平与骨肉瘤风险相关性分析

喻紫晨

作者单位:430300 湖北省武汉市黄陂区人民医院

【摘要】目的评估IL-27基因多态性和血清IL-27p28水平与骨肉瘤风险的相关性。方法对比研究160例骨肉瘤患者(研究组)和250例健康患者(对照组)。IL-27基因-964 A/G，2905 T/G，和4730 T/C多态性采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性测定。酶联免疫吸附试验检测血清中IL-27p28的水平。结果与对照组相比，骨肉瘤患者血清IL-27p28水平显著降低(P<0.01)。Ⅲ～Ⅳ期骨肉瘤患者血清IL-27p28水平低于Ⅰ～Ⅱ期患者(P<0.05)。同样，转移患者的血清IL-27p28水平低于非转移患者(P<0.05)。IL-27-964 A/G，2905 T/G，4730 T/C的基因型和等位基因频率与骨肉瘤风险无相关性(P>0.05)。分层分析也未能显示-964 A/G，2905 T/G，和4730 T/C多态性与临床分期和骨肉瘤的转移存在相关性(P>0.05)。结论血清IL-27p28低水平可能与骨肉瘤进展有关，但IL-27基因-964 A/G，2905 T/G，和4730 T/C多态性和它们的单倍型不与骨肉瘤的风险相关联。

【关键词】骨肉瘤；IL-27基因；IL-27p28；风险相关性

(ThePracticalJournalofCancer,2016,31:183～186)

骨肉瘤是间叶原始转化细胞所产生的侵袭性恶性肿瘤。它是原发性骨肿瘤中最常见的病理形态，多发生在青少年和50岁以上的人群[1]。骨肉瘤具有成骨细胞的恶性骨样的分化和功能。目前，有研究表明，针对癌症的免疫防御系统的主要机理是依赖于T细胞应答。白细胞介素(IL)-27，IL-12和IL-23是同一家族的成员[2]。IL-27参与的Th1淋巴细胞的分化，增强细胞类型的免疫应答，以及抑制Th2细胞体液免疫反应的过程。证据表明，IL-27可以通过多种机制抑制肿瘤的进展，不受肿瘤免疫原性的影响;这些特征可能对肿瘤的治疗具有很大的价值。本研究评估IL-27基因多态性和血清IL-27p28水平与骨肉瘤风险相关性。现报告如下。

1材料与方法

1.1　一般资料

对比研究160例骨肉瘤患者(研究组)和250例健康患者(对照组)。骨肉瘤的诊断是基于病理检查，患者均无家族癌症病史。研究组患者平均年龄(27.5±8.5)岁，男性105例(65.6%)，女性55例(34.4%)；长管状骨133例(83.1%)，轴向骨架27例(16.9%)；转移患者56例(35.0%)，无转移患者104 例(65.0%)。对照组患者平均年龄(27.9±7.8)岁，男性155 例(62.0%)，女性95例(38.0%)。2组年龄和性别无差异，具有可比性(P>0.05)。本研究获得患者知情同意书及医学伦理委员会批准。

1.2　血清IL-27p28和IL-12p40的测定

室温静脉血收集血清，-80 ℃存储直至使用。定量测定血清中IL-27p28是通过酶联免疫检测试剂盒进行(Fermentas公司中国有限公司，中国深圳)。OD 450单位下进行显色反应(酶联免疫吸附测定阅读器)(BIO-RAD680，东京，日本)。细胞因子的浓度，使用0～10 000 pg/mL范围试剂盒，根据标准曲线来确定。

1.3　DNA提取

根据盐析法从抗凝的外周血白细胞中，利用乙二胺四乙酸萃取DNA。简言之，将3 mL的血液用Triton缓冲液混合(0.32 M蔗糖，1%的Triton100，5 mM的氯化镁，H2O，10 mM Tris-HCl，调节pH为7.5)。H2O离心白细胞并洗涤。56 ℃下慢慢形成蛋白酶K共沉淀物，并随后在4 ℃下用饱和NaCl溶液进行盐析。通过离心除去沉淀的蛋白质。将上清液中的DNA溶解在300 μL水中。

1.4　IL-27变异基因型

聚合酶链反应(PCR)限制性片段长度多态性方法测定所述IL-27基因-964 A/G，2905 T/G，和4730 T/C基因型。根据GenBank参照序列设计PCR引物。确认基因分型结果，PCR扩增的DNA样品进行了DNA测序检查，结果为100%一致。

1.5　统计学分析

所有数据采用SPSS 16.0统计软件进行统计学分析。组间比较采用t检验或χ2检验。相关性是由Pearson相关检验确定。IL-27组之间的基因型和等位基因频率比较使用χ2检验和Fisher精确检验。适合测试Hardy-Weinberg平衡(HWE)，计算各基因型的期望频率，并与观测值比较，采用χ2检验。P<0.05认为差异具有统计学意义。

2结果

2.1　IL-27p28和IL-12p40的血清水平

健康对照组血清IL-27p28水平为(243.7±108.5)pg/mL,显著高于研究组的(158.6±97.3)pg/mL，P<0.01。我们还发现，健康对照组血清IL-12p40的水平为(268.2±107.4)pg/mL，明显高于研究组的(201.2±90.3)pg/mL，P<0.01。相关分析显示，IL-27p28与IL-12p40相关(γ=0.567，P=0.004)。

2.2　血清IL-27p28和骨肉瘤临床特点的关系

结果表明，Ⅲ～Ⅳ期患者血清中IL-27p28水平低于Ⅰ～Ⅱ期骨肉瘤患者(P<0.05);转移患者血清中IL-27p28水平低于非转移患者(P<0.05)；然而，IL-27p28水平与患者的年龄，性别，肿瘤大小，组织学类型和肿瘤部位没有相关性(P>0.05)，见表1。

临床特点 例数IL-27p28P年龄/岁0.534 ≥2051162.4±94.8 <20109153.6±77.3性别0.725 男105160.2±90.5 女55155.4±61.7肿瘤尺寸/cm0.186 ≥788148.8±71.2 <772166.5±96.2组织学类型0.518 成骨细胞88152.3±72.1 毛细血管扩张20160.4±90.2 软骨细胞17157.9±71.7 成纤维细胞18159.3±78.5 未分化17157.8±91.9肿瘤位置0.778 长管状骨133158.4±96.5 轴向骨架27152.7±92.1临床分期0.003 Ⅰ~Ⅱ76169.2±92.8 Ⅲ~Ⅳ84132.7±55.6转移0.022 是56130.4±58.3 否104161.9±92.4

2.3　IL-27基因多态性与骨肉瘤血清IL-27p28水平

血清中检测到IL-27基因多态性没有显著差异(-964 A/G，2905 T/G和4730 T/C)，见表2。骨肉瘤患者和对照组之间的IL-27-964 A/G，2905 T/G以及4730 T/C多态性的基因型和等位基因频率，见表3。骨肉瘤患者和对照组之间的3种多态性的基因型分布均符合HWE协议。然而，骨肉瘤患者血清IL-27-964 A/G，2905 T/G，4730 T/C多态性的基因型和等位基因频率与骨肉瘤的风险无相关性(P>0.05)。

3讨论

IL-27是由多个抗原呈递细胞，诸如脂多糖刺激的单核细胞和单核细胞衍生的树突状细胞产生的[3]。

表2　相对于血清IL-27p28水平的IL-27基因多态性

表3　2组IL-27基因多态性的基因型和等位

IL-27的生物学功能由WSX-1介导，其高度表达在CD4+淋巴细胞和自然杀伤细胞中。IL-27在Th1细胞的上调以及在Th2细胞因子GATA的下调中扮演多种角色。白细胞介素-27的表达增加被认为与多个肉芽肿性疾病，如结核病，结节病，克罗恩病有关[4]。先前的研究已经表明，IL-27参与了多种肿瘤的发病机理。Feng等[5]表明，IL-27能够诱导表达的干扰素γ诱导蛋白(干扰素诱导蛋白-10/CXCL10)和单核因子诱导CXCL9(单核因子诱导干扰素γ/CXCL9)。这两种分子都能够通过它们的抗血管生成的效果，抑制肿瘤生长和转移。Yoshimoto等[6]发现IL-27能够在多个WSX-1阳性人黑色素瘤中直接发挥抗增殖作用。目前的证据表明，IL-27能抑制原发性和转移性肿瘤，这可能使得它成为弱免疫原性肿瘤的一种有价值的治疗剂。

在本研究中，我们发现，骨肉瘤患者血清IL-27p28水平显著低于健康对照，这表明低血清水平IL-27p28可能通过降低Th1型细胞毒性应答而导致骨肉瘤的发展。值得注意的是，除IL-27外，还有其他异二聚体ILS，如IL-23，IL-12，IL-35，IL-27和IL-12通过树突细胞分泌[7]。因此，通过确定的IL-27和IL-12的血清水平，我们可以知道，IL-27低水平是否与骨肉瘤临床情况相关。我们发现，与IL-27的结果相近，骨肉瘤患者血清IL-12水平低于健康对照组，这两个细胞因子呈正相关，这表明低血清IL-27水平在骨肉瘤患者中是很普遍的现象。接下来，我们调查IL-27与骨肉瘤患者临床特征的关联;结果表明，IL-27与患者的年龄，性别，肿瘤大小，组织学类型和位置无相关性。临床分期Ⅲ～Ⅳ期骨肉瘤患者和肿瘤转移患者的血清IL-27水平明显降低，这表明低血清IL-27水平与骨肉瘤进展相关。我们注意到，先前不同种族人群的流行病学研究的数据与我们的结果一致[8]。在目前的研究中，健康对照组的IL-27-964 G，2905 G和4730 C的等位基因频率分别为0.352，0.090，和0.086。相对于所述的IL-27基因多态性与血清中IL-27p28的水平，尽管骨肉瘤患者血清IL-27p28水平较低，但我们没有发现血清IL-27p28水平和IL-27基因-964 A/G，2905 T/G和4730 T/C多态性之间的差异，这表明上述3个变体不影响IL-27p28水平。

关于IL-27多态性，以前的研究已经表明，IL-27基因的-964 A/G多态性与-964 A/G，2905 T/G和4730T/C中的单倍型与炎性肠病、哮喘、慢性阻塞性肺病的易感性相关联。然而，在设定的肿瘤中，未发现基因多态性和单倍型与食管癌、鼻咽癌、神经胶质瘤和肝细胞癌相关。我们的研究结果与肿瘤研究结果一致[9]。此外，我们还没有发现-964 A/G，2905 T/G，4730T/C和骨肉瘤临床参数之间有任何关系，这表明这些单核苷酸多态性3基因型和等位基因不是骨肉瘤的易患风险因素[10]。

据我们所知，这是第一次研究评估IL-27基因-964 A/G，2905 T/G和4730 T/C多态性与骨肉瘤的风险关系。我们并没有观察到IL-27的基因型，等位基因和单倍型与骨肉瘤风险存在任何关联。我们的研究结果表明，IL-27基因多态性可能不是骨肉瘤癌变的重要因素。总之，本研究表明，低血清IL-27p28水平可能与骨肉瘤的发生和发展相关;然而，IL-27基因多态性及其单倍型可能与骨肉瘤易患风险无关。

参考文献

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(编辑：甘艳)

Associations of IL-27 Polymorphisms and Serum IL-27p28 Levels with

Osteosarcoma Risk

YUZichen.HuangbeiPeople’sHospitalofWuhan,Wuhan,430300

【Abstract】ObjectiveTo evaluate the correlation of L-27 gene polymorphism and serum levels of IL-27p28 and osteosarcoma risk.MethodsA comparative study of 160 cases of osteosarcoma patients(study group) and 250 healthy patients(control group) were conducted.IL-27 gene-964 A/G,2905 T/G,and 4730 T/C polymorphism received polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism determination.ELISA serum levels of IL-27p28.ResultsCompared with the control group,the serum levels of IL-27p28 of patients with osteosarcoma were significantly lower(P<0.01).Serum levels of IL-27p28 of patients with osteosarcoma Ⅲ~Ⅳ were lower than below Ⅰ~Ⅱ patients(P<0.05).Serum levels of IL-27p28 of patients with metastasis were lowere than non-metastasis patients(P<0.05).IL-27-964 A/G,2905 T/G,4730 T/C genotype and allele frequencies and osteosarcoma risk had no correlation(P>0.05).Stratified analysis failed to show the correlation of-964 A/G,2905 T/G,and 4730 T/C polymorphism with clinical stage and metastasis of osteosarcoma(P>0.05).ConclusionLow serum levels of IL-27p28 maybe related with progression of osteosarcoma,but IL-27 gene-964 A/G,2905 T/G,and 4730 T/C polymorphism and their haplotypes are not associated risk of osteosarcoma.

【Key words】Osteosarcoma;IL-27 gene;IL-27p28;Risk Relevance

(收稿日期2015-03-24修回日期 2015-07-24)

中图分类号：R738.1

文献标识码：A

文章编号：1001-5930(2016)02-0183-04

DOI：10.3969/j.issn.1001-5930.2016.02.003