p53蛋白在非小细胞肺癌中表达及与其临床特征、同步放化疗疗效的关系分析

刘东芳　王晓红　刘春秋　赵洪焕　张晓斌　杨俊泉　张成侠

王建功　汪宏斌　赵　凯

作者单位:063000 河北省唐山市人民医院

p53蛋白在非小细胞肺癌中表达及与其临床特征、同步放化疗疗效的关系分析

刘东芳王晓红刘春秋赵洪焕张晓斌杨俊泉张成侠

王建功汪宏斌赵凯

作者单位:063000 河北省唐山市人民医院

【摘要】目的检测p53蛋白在非小细胞肺癌患者中的表达水平，并探讨其表达与临床特征的相关性及同步放化疗疗效的关系。方法采用免疫组化方法，检测100例非小细胞肺癌组织中p53表达水平，结合显微图像分析仪测定p53免疫组化强度，以阳性单位为定量分析单位。分析p53表达水平与患者临床病理特征及同步放化疗疗效的关系。结果p53蛋白在非小细胞肺癌中阳性表达率为48%；p53表达与淋巴结转移、远端转移和TNM分期均无显著相关性；非小细胞肺癌p53蛋白表达者放化疗效果显著低于p53蛋白表达阴性患者，且p53蛋白表达与患者生存期呈负相关。结论p53表达与否影响非小细胞肺癌患者化疗效果，与生存期直接相关，临床治疗时可考虑将其作为治疗靶点。

【关键词】非小细胞肺癌；p53；同步化疗

(ThePracticalJournalofCancer,2016,31:026～028)

肺癌已成为世界范围内威胁人类生存的一大杀手，其中非小细胞肺癌所占比例为70%～80%[1-2]。本文对我院近几年收集的100例同步放化疗非小细胞肺癌患者p53表达情况进行检测，并分析其与患者临床参数和生存期的相关性，探讨p53蛋白表达与同步放化疗疗效的关系。

1材料与方法

1.1　一般资料

选取我院2009年9月-2014年9月收治的非小细胞肺癌患者石蜡标本100例，均有明确的病理学诊断，病理组织分型根据WHO/IASLC肺和胸膜肿瘤组织学分类(1999)标准，按2009年国际抗癌联盟(UICC)肺癌TNM分期第7版标准对临床分期进行分类，所有患者均采用手术和放疗联合治疗手段，所有患者均无化疗禁忌症。

1.2治疗方法

为便于医生制定后期治疗方案，治疗前所有患者均行常规临床分期检查，主要包括胸部、颅脑CT或MR，腹部CT或B超，对所有患者进行全身核素扫描；所有患者行常规心电图、血常规、尿常规、生化常规等检查。

放疗：所有患者均先行放射治疗，均采取平卧式，双手抱头，先用热缩体膜进行固定，然后对体表进行定点标记。采用6-MV直线加速器常规分割三维适形放疗，放射剂量为2 Gy/次，1周5次，达到总剂量为60~70 Gy/6~7周。

化疗：放疗的第1天即开始同步化疗，方案为第1~5天、第29~33天使用依托泊苷(剂量为50 mg/m2)，第1、8、29、36天使用顺铂(剂量为50 mg/m2)。为防止患者出现恶心、呕吐等副作用，常规使用5-羟色胺受体阻断剂等药物。

1.3　疗效评价

记录所有患者放疗结束1个月后临床恢复情况，并嘱咐患者每3个月进行1次复查。采用实体瘤客观评价标准(RECIST)对患者治疗效果进行评价，共分为4个等级：完全缓解(complete response，CR)指目标病灶全部消失达4周以上；部分缓解(partial response，PR)指基线病灶最大径之和至少减少30%达4周以上；疾病进展(progression disease，PD)指基线病灶最大径之和至少增加20%或出现新病灶；病变稳定(stable disease，SD)指基线病灶最大径之和减少但并未达到PR或有增加但未达PD。此外，治疗客观有效率(objective response rate，ORR)为CR+PR两种情况，疾病控制率(disease control rate，DCR)指CR+PR+SD。总生存期(overall survival，OS)指从治疗首日至死亡日或统计日，随访截止2014年9月，以月为单位计算。

1.4　p53表达检测

应用免疫组化技术检测p53在非小细胞肺癌组织中的表达水平，病理科负责切取石蜡标本组织，厚度为4 μm，严格按照试剂盒说明书进行操作，首先采用高温高压对抗原进行修复，然后自然冷却至室温，纱布将残留修复液小心擦去，然后滴加二抗，孵育过夜，严格按照说明书并根据预实验选择合适的一抗浓度，滴加一抗，对照组采用磷酸盐缓冲液(PBS)进行替代。采用莱卡显微镜对结果进行分析，随机选取5个高倍镜(×400)视野并计算平均数进行阴阳性结果判定，其中阳性表达细胞定义为细胞核染为棕黄色，且阳性细胞比例≥10%；而阴性表达细胞指细胞核内未见棕黄色染色颗粒或阳性细胞比例<10%。

1.5　统计学方法

所有数据均采用Ave±SED表达，均记录在Excel表格，应用SPSS 16.0统计软件进行分析。采用Spearman检验是否存在相关性，Log-rank分析Kaplan-Meier曲线，以P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1　p53蛋白表达阳性率及与临床参数相关性分析

p53为胞内蛋白，染色颗粒位于细胞核内，免疫组化结果显示，p53在部分非小细胞肺癌组织中呈阳性表达；统计结果显示，100例癌组织中48例p53表达阳性，其阳性率为48%(48/100)，p53阴性52例，阴性率为52%(52/100)。p53阳性表达与淋巴结转移、远端转移和TNM分期均无相关性(表1)，且差异均无统计学意义(P均>0.05)。

表1　p53蛋白表达与非小细胞肺癌临床病理参数的关系/例

2.2　放化疗短期疗效客观分析

放疗结束1个月之后，对患者进行客观疗效分析，结果显示，CR 34例，PR 32例，SD 30例，PD 4例，ORR为66%(66/100)，DCR为96%(96/100)；按照p53是否表达，将患者分为p53阳性组和p53阴性组，其中阳性组ORR为54.1%(26/48)，阴性组ORR为73.1%(38/52)，对两组ORR进行统计分析，结果显示，p53阴性组ORR显著高于阳性组，且差异有统计学意义(P=0.0215)。

2.3　p53蛋白表达对非小细胞肺癌患者总体生存率影响

将100例患者按照是否表达p53分为阳性组和阴性组，并对其生存期进行分析，结果显示，p53阳性表达组患者中位生存期为16个月，p53阴性表达组患者中位生存期为41个月；p53阳性表达组患者和阴性表达组患者平均生存期分别为20个月和42个月，对其进行统计分析结果显示，p53阴性表达组患者生存期明显长于阳性表达患者，差异有统计学意义(图1)。

图1　非小细胞肺癌患者生存曲线分析

3　讨论

非小细胞肺癌已逐渐成为威胁男性和女性健康生存的一大杀手，尽管随着医学技术的进步和对其致病机制的深入研究，其治疗已取得较大进展，但临床部分患者对放化疗不敏感，降低了患者治疗效果。作为最早发现的肿瘤抑制基因，p53编码的p53蛋白在调节细胞周期和抑制细胞癌变过程中发挥重要作用。然而，p53发生突变后不仅丧失了抑癌基因功能，反而还获得了促进细胞恶性转化的癌基因功能。Mayo 等研究结果显示，p53表达异常与癌症发生及进展密切相关，且对患者放化疗效果产生较大影响，可能作为预测患者预后的一个重要指标[3]。

本研究中，我们就p53在非小细胞肺癌组织中的表达进行蛋白水平的检测，结果显示，100例癌组织中p53蛋白在48例中均有不同程度的表达，其阳性表达率为48%，张洪兰等曾报道，p53蛋白在非小细胞肺癌组织中表达阳性率为44.3%[4]，这与我们的报道结果相类似。这一结果提示，p53蛋白在非小细胞肺癌组织中表达呈现群体性差异，该种差异可能直接影响患者临床疗效。我们对p53蛋白表达与非小细胞肺癌患者临床参数进行相关性分析，结果显示，p53蛋白患者淋巴结转移、TNM分析和远端转移均无显著相关，这与赵君等人研究报道结果相一致[5]。

本研究中，我们将患者分为p53阳性表达组和p53阴性表达组，并分析放化疗效果以研究其表达与非小细胞肺癌同步放化疗疗效关系，结果显示，放疗结束1个月之后，100例患者中，CR为34例，PR为32例，SD为30例，PD为4例，而ORR为66%(66/100)，DCR为96%(96/100)；其中p53阳性组ORR为54.1%(26/48)，p53阴性组ORR为73.1(38/52)，p53阴性组ORR显著高于阳性组，这与汪宏斌等人以局部晚期非小细胞肺癌患者为研究对象揭示的p53蛋白表达患者疗效较差结果相一致[6]。这提示着p53蛋白表达可能与非小细胞肺癌患者生存期相关，因此，接下来我们统计分析100例非小细胞肺癌患者生存期，结果显示，p53阳性表达组患者中位生存期为16个月，远远低于p53阴性表达组患者41个月中位生存期；p53阳性表达组患者和阴性表达组患者平均生存期分别为20个月和42个月，统计分析结果显示，p53阴性表达组患者生存期明显长于阳性表达患者，这与余辉等报道的结果相一致[7]。

综上所述，p53蛋白在非小细胞肺癌患者中的阳性表达率为48%，虽然p53蛋白表达与患者淋巴结转移、TNM分析和远端转移均无显著相关，但是p53蛋白表达直接影响患者放化疗疗效，且阳性表达患者生存期显著低于阴性表达患者，因此，临床治疗非小细胞肺癌患者时，应该探寻以p53为靶点的辅助治疗手段以提高临床疗效。

参考文献

[1]Sánchez de Cos Escuín J,Disdier Vicente C,Corral Penafiel J,et al.Overall Long-Term Survival in Lung Cancer Analyzed in 610 Unselected Patients〔J〕.Arch Bronconeumol,2004,40(6):268-274.

[2]Yano T,Okamoto T,Fukuyama S,et al.Therapeutic strategy for postoperative recurrence in patients with non-small cell lung cancer〔J〕.World J Clin Oncol,2014,5(5):1048-1054.

[3]Mayo LD,Dixon JE,Durden DL,et al.PTEN protects p53 from Mdm2 and sensitizes cancer cells to chemotherapy〔J〕.J Biol Chem,2002,277(7):5484-5489.

[4]张洪兰，舒红，姜卫国.PTEN、p53和P-gp在非小细胞肺癌中的表达及和预后的关系〔J〕.中国肺癌杂志,2009,12(11):1213-1216.

[5]赵君，丁卫忠，刘景义，等.SKP2、p53蛋白在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义〔J〕.现代肿瘤医学,2009,17(3):473-476.

[6]汪宏斌，杨俊泉.局部晚期非小细胞肺癌p53蛋白表达与同步放化疗疗效的关系研究〔J〕.中国全科医学,2014,17(3):282-285.

[7]余辉，吴一龙，戎铁华，等.非小细胞肺癌组织中p53蛋白的表达对预后及术后放疗疗效的影响〔J〕.肿瘤研究与临床,2006,18(1):16-18.

(编辑：吴小红)

The Correlations between p53 Expression and Clinical Characteristics and

Chemo-radiotherapy Efficacy in Non-small Cell Lung Cancer

LIUDongfang，WANGXiaohong，LIUChunqiu，etal.Tangshanpeople'shospital，Tanshan，063000

【Abstract】ObjectiveTo investigate p53 expression in non-small cell lung cancer,and its relationships with clinical characteristics and chemoradiotherapy efficacy.MethodsImmunohistochemistry was used to detect the expression of p53 in 100 cases of non-small cell lung cancer tissues,and the expression strength was detected using micro image analyzer.The relationships between p53 expression and clinical characteristics and chemo-radiotherapy efficacy were analyzed.ResultsThe positive rate of p53 in non-small cell lung cancer was 48%;there were no correlations among p53 expression and lymph node metastasis,distant metastasis or TNM stage;NSCLC patients with p53 expression had worse chemo-radiotherapy effect than those without p53 expression,and p53 expression was negatively associated with patients' survival time.ConclusionThe status of p53 expression have effect on synchronous chemotherapy in patients with non-small cell lung cancer,and is directly related with the survival time.p53 may be represented as a promising target for non-small cell lung cancer.

【Key words】Non-small cell lung cancer； p53；Synchronous chemotherapy

中图分类号：R734.2

文献标识码：A

文章编号：1001-5930(2016)01-0026-03

DOI：10.3969/j.issn.1001-5930.2016.01.008

收稿日期(2015-01-20修回日期 2015-06-11)