鱼血涂片制作与血细胞的观察在《水产动物组织胚胎学》实践教学中的应用

聂竹兰，廖秋萍，魏 杰，石长青，王艳萍

（塔里木大学高等教育研究室/动物科学学院，新疆 阿拉尔 843300）

鱼血涂片制作与血细胞的观察在《水产动物组织胚胎学》实践教学中的应用

聂竹兰，廖秋萍，魏 杰，石长青，王艳萍

（塔里木大学高等教育研究室/动物科学学院，新疆 阿拉尔 843300）

在《水产动物组织胚胎学》实践教学中增设了综合性实验项目——鱼血涂片的制作及血细胞的观察。学生参与血涂片的制作，激发了学生的学习兴趣，提高了学生的动手能力，在熟悉血涂片制作基本步骤和操作技术的同时，充分发挥了学生的主观能动性。综合性实验项目的开展，不仅突出了普通实验课所无法比拟的优越性，为学生后期专业课教育、研究生教育奠定了基础；同时也为相关的水产养殖行业，尤其是鱼类疾病防治方面，提供了高素质人才。

鱼；血涂片；血细胞；实践教学；水产动物组织胚胎学

鱼血细胞中白细胞直接参与了免疫应答及其相关的应答过程，是鱼类机体重要的免疫细胞，鱼血细胞也肩负着非特异性免疫和特异性免疫的主要机能，在鱼类疾病防治中发挥着重要作用［1-2］。另一方面，鱼类血细胞很敏感，能感知自身生理状态变化和外界环境因子的刺激，通过检查其血液学指标，不仅能初步了解鱼类的健康状况还能掌握其生活水域环境的质量［3-4］。因而有关血细胞的研究一直受到学者的重视。在水产养殖专业基础课《水产动物组织胚胎学》中，鱼血涂片的观察是其基础实验内容之一。实验教学过程中，教师借助鱼血涂片标本引导学生在显微镜下辨别红细胞、血小板及各类白细胞的形态。但因内容繁琐，抽象难懂，学生学习兴趣不高，也难以正确理解各类血细胞的功能。在我国有水产养殖学专业的农林院校中开设《水产动物组织胚胎学》实践教学的多见于石蜡切片的制作，而有关鱼血涂片的制作与血细胞观察的并不多见。塔里木大学水产教研室经讨论决定在《水产动物组织胚胎学》实践教学中增设综合性实验项目——鱼血涂片的制作及血细胞的观察，旨在提高学生的研究技能与水平，激发学生对抽象形态学知识点的学习兴趣，培养学生的独立思考与创新思维能力，以期为社会提供全面发展的综合型新世纪人才。

1 材料与方法

实验材料：购自阿拉尔市9团农贸市场5尾健康无病的草鱼。

实验分组：塔里木大学水产养殖专业17班，共25人，分为5组，每组5人，每组处理1尾草鱼。

载玻片的清洗：将新的载玻片放入洗衣粉或肥皂水中煮沸20 min；玻片上的污物用热水洗去；用自来水反复冲洗若干次，再用蒸馏水冲洗3遍［5］。最后浸泡在无水乙醇中保存；实验前每组领取100片，用眼镜布擦干无水乙醇备用。

血液采集：用5 mL无菌注射器经0.1%肝素钠润洗后，从草鱼的尾静脉缓慢抽血［6］3～5 mL，舍弃针头剔除第一滴血。

血涂片制作：用左手手指平握载玻片两条短边，用10 μL移液器取5 μL血样滴于处理好的载玻片右侧约5 cm处；另取一块边缘光滑的载玻片作推片，右手持推片，将推片一端置于血滴前方，向后移动到接触血滴，毛细作用使血液均匀分散在推片与载玻片的接触处，使载玻片与推片之间的角度约呈18°［7］，向左平稳推动制成厚薄适宜、分布均匀的粉红色血膜［8］。 血膜自然晾干后，用常规 Wright′s和 Giemsa 染液 3～5 滴双重染色［9-10］3～5 min 后，用等量蒸馏水借助洗耳球混匀进一步淡染3～5 min。淡染过程中，染色液干涸前用蒸馏水补充。染色完成后，用蒸馏水冲洗，再在Nikon显微镜下观察，选取血细胞分布均匀，染色适中的涂片留用，要求每位学生制作符合要求的血涂片10片，不符合要求的血涂片舍弃。

2 结果与分析

2.1 血涂片制作结果与分析 张绍林指出，一张好的血涂片应满足以下几点要求：厚薄适中；头体尾明显；血细胞均匀分布；载玻片的两边及两端空隙分别为0.3、1.5 cm；血膜边缘整齐，长度约为4 cm［11］。制片及染色结束后，指导教师在多媒体互动教室根据每个学生实际制片情况，先让学生在低倍镜下观察了解细胞分布情况及染色效果。再选取血细胞厚薄适宜，分布均匀的区域在高倍镜下观察各类血细胞具体的形态特征［12］。在5组学生制作的部分涂片中，平均每组有3张涂片非常好，绝大部分的涂片的问题为血膜头体尾不明显、血膜不连续、边缘不齐、涂片中有很多染色沉淀物、血细胞破裂。出现以上问题的原因主要在于制作涂片过程中学生手持推片时手发抖；推片时，用力不均；推片边缘不整齐推片过程中产生刮痕；染色沉淀物冲洗不彻底。虽然绝大部分涂片或多或少存在不足，但在显微镜视野中亦可找到厚薄适宜，分布均匀的区域，可以用于观察各类血细胞的形态结构。在本次实践教学中，因采用移液器固定了血样的大小和降低了推片的角度，整体效果较好。

2.2 血细胞形态观察与分析 经染色后，显微镜下可见鱼血红细胞胞质为浅紫红色，胞核为蓝紫色；血栓细胞比红细胞的细胞核稍大，呈蓝紫色。淋巴细胞、单核细胞及中性粒细胞核质颜色分明，核为蓝紫色，质为淡紫红色；中性粒细胞胞质中有淡红色细小颗粒分布；但在整个血涂片中，未发现嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞。据文献报道，只有少数鱼类外周血涂片中可观察到嗜碱性粒细胞与嗜酸性粒细胞［13］，而大部分鱼类外周血涂片中，较难观察到嗜酸性粒细胞，而嗜碱性粒细胞常观察不到［14］，这是由于嗜碱性粒细胞中的颗粒易溶于水所致［15］。

2.3 鱼血涂片实践教学效果与分析 先在多媒体互动教室让学生观看实践教学“鱼血涂片的制作及血细胞的观察”的PPT，结合教师的讲解；制片前，由教师示范制片操作过程，并强调实验过程中的注意事项，再由学生自己实践。在整个制片过程中，学生热情高涨，尤其是制片完成后，学生们都希望得到老师的肯定，都很关注自己的实验结果。在显微观察后，有些学生不满意自己制作的血涂片而要求重新制片。第二次制片过程中，学生充分结合理论知识，开动脑筋思考问题，很容易将各类血细胞的形态和功能深深刻在了脑海中［16］。

3 结论

在《水产动物组织胚胎学》课程实践教学增设实践项目“鱼血涂片的制作与血细胞观察”，激发了学生的学习热情；学生在动手操作过程中相互协作的同时，学会了独立思考问题；并能结合理论内容充分掌握了各相关的知识点；使实践教学的优越性远远超出普通的实验教学，达到了实践教学的目的。另一方面，该实践项目的开展，为学生后期专业课教育、研究生教育奠定了坚实基础；为水产养殖相关行业，尤其是鱼类疾病防治方面，提供了高素质人才，值得广为推广。

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Application of Fish Blood Smears Preparation and Blood Cells Observation in Practical Teaching of Histology and Embryology of Aquatic Animal

NIE Zhu-lan，LIAO Qiu-ping，WEI Jie，SHI Chang-qing，WANG Yan-ping
（Research Department of Higher Education/College of Animal Science，Tarim University，Alaer 843300，China）

In the practical teaching of Histology and Embryology of Aquatic Animal,a comprehensive experimental project"Fish Blood Smears Preparation and Blood Cells Observation"is newly set.In this project,the undergraduates participate in the process of blood smears preparation,which stimulates the undergraduates′interests in learning and improves their practical ability;the undergraduates understand the basic procedure of blood smear preparation,master the experimental technique,and exert their subjective initiative.The application of the comprehensive experimental project not only exhibits incomparable superiority to that of the common experiment but also lays a solid foundation for later professional class education and postgraduate education.Meanwhile,it also provides plenty of talents with high quality for the relevant aquaculture industry,especially in the field of fish diseases prevention and control.

fish；blood smear；blood cells；practical teaching；Histology and Embryology of Aquatic Animals

G642.0

A文章顺序编号1672-5190（2016）03-0069-02

2016－03－07

项目来源：塔里木大学高等教育研究项目（TDGJ1506，TDGJ1106，TDGJ0906）。

聂竹兰（1979—），女，副教授，博士，主要从事水产动物组织胚胎学、家畜组织学与胚胎学的教学与研究工作。

石长青（1971—），男，副教授，硕士，主要从事家畜组织学与胚胎学的教学与研究工作。

（责任编辑：贾淑萍）