高效液相色谱法测定蜜饯中7种合成着色剂

◎ 王 蕾，任志彬，裴新华

（1.邯郸出入境检验检疫局，河北 邯郸 056017；2.河北工程大学生命科学与食品工程学院，河北 邯郸 056038）

高效液相色谱法测定蜜饯中7种合成着色剂

◎ 王 蕾1,2，任志彬1,2，裴新华1

（1.邯郸出入境检验检疫局，河北 邯郸 056017；2.河北工程大学生命科学与食品工程学院，河北 邯郸 056038）

本文建立了高效液相色谱法测定蜜饯中柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝和酸性红7种合成着色剂的检测方法。本实验方法无须单独对酸性红进行前处理，操作简单、灵敏度高、分离效果好、实验结果准确，可应用于基层实验室检测。

蜜饯；合成着色剂；高效液相色谱法

我国国家标准GB 2760-2014《食品添加剂使用卫生标准》中规定，蜜饯类重的合成着色剂类添加剂应为0.05～0.10 g/kg。食品添加剂在规定范围和规定用量内使用是安全的，但如果长期、集中、频繁地大量食用含有合成着色剂的食物，将对人体神经系统、消化系统造成损害。

对于合成着色剂的检测方法，国家标准推荐的主要集中在液相色谱法、薄层色谱法、示波极谱法3种，其中液相色谱法应用最广。用国家标准GB/T 5009.35-2003方法处理部分蜜饯样品时，样品中的果胶易堵住G3垂融漏斗，而且只规定了范围内6种着色剂的检测方法，缺少超范围使用酸性红的检测方法。本文采用聚酰胺粉吸附，高效液相色谱UV检测器同时测定7种着色剂，优化了前处理和色谱条件，峰形和分离度良好，结果准确。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

Waters e2695高效液相色谱仪，2489紫外可变波长检测器，离心机，旋转蒸发仪，超声波清洗器。柠檬黄、日落黄、胭脂红、苋菜红、诱惑红、亮蓝、酸性红标准物质（北京海岸鸿蒙标准物质技术有限责任公司），聚酰胺粉（200目），甲醇-甲酸混合溶液（6∶4，v∶v），无水乙醇-氨水-水混合溶液（7∶2∶1，v∶v∶v），实验室用水为超纯水。

1.2 样品处理

称取粉碎后的蜜饯样品5.00 g放入离心管中，加入超纯水20 mL，60 ℃温热超声10 min，若溶液pH值过高，用柠檬酸溶液调pH至6。5 000 r/min离心后，将上清液经带有玻璃纤维的G3垂融漏斗抽滤，重复提取一次，合并提取液。加入聚酰胺粉，搅拌均匀，充分吸取色素后至提取液无色，用G3垂融漏斗抽滤。用60 ℃ pH 4的水洗涤3～5次，用甲醇-甲酸混合溶液洗涤除去天然色素，用纯水冲洗至中性，再用无水乙醇-氨水-水混合溶液进行解析，收集解析液。80 ℃水浴蒸发至尽干，用纯水定容至5 mL，过0.45 μm滤膜，备用待测。

1.3 标准曲线配制

将柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、酸性红和亮蓝的标准品配制成50.0 μg/mL的混标，并稀释成1.00、5.00、10.00、20.00 μg/mL和50.00 μg/mL的标准系列溶液。

1.4 色谱条件

Waters XBridge C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），柱温35 ℃，波长254 nm，流速1.0 mL/min，进样量为10 μL，流动相：A为甲醇，B为乙酸铵溶液（0.02 mol/L），梯度洗脱程序见表1。

表1 流动相梯度洗脱程序表

2 结果与讨论

2.1 前处理方法的选择

（1）提取溶剂的选择。本实验分别选取了纯水和无水乙醇-氨水-水混合溶液两种提取液。实验中发现用无水乙醇-氨水-水混合溶液提取的过程中，色素逐渐消退，回收率不理想。实验结果表明，采用纯水提取效率和回收率更高。

（2）提取方式的选择。本实验对加热、震荡、超声3种提取方法进行了比较，结果表明，加热和超声相结合效果最好。加热温度在60 ℃，超声时间为10 min时，提取效率最高，如图1所示。

图1 提取时间对提取效果的影响图

由于蜜饯类样品中的果胶易堵住G3垂融漏斗，造成提取物损失和实验耗材的浪费，而使用普通滤纸会吸附色素。本实验采用塞有玻璃纤维的漏斗抽滤，能较好解决问题。

2.2 色谱条件的选择

（1）流动相的选择。本实验分别选取甲醇-乙酸铵溶液和乙腈-乙酸铵溶液作为流动相，出峰效果基本无差别，因甲醇毒性小，故选用甲醇-乙酸铵溶液作为流动相。分别将0.02、0.04、0.06 mol/L的乙酸铵溶液作为流动相，实验结果证明，0.02 mol/L的乙酸铵-甲醇溶液作为流动相出峰效果最好。

（2）洗脱程序的选择。采用甲醇-乙酸铵（0.02 mol/L）溶液作为流动相，分别选取3种洗脱程序，比较各自的洗脱效果，洗脱程序见表1～3，对应标准图谱如图2～4所示。实验结果显示，利用表2的洗脱程序柠檬黄和苋菜红、酸性红和亮蓝无法很好分离；表3的洗脱程序中大多数峰均无法很好分离，且基线干扰较大；表1的洗脱程序可以使7个目标峰峰形较好，且完全分离。

表2 流动相梯度洗脱程序2表

表3 流动相梯度洗脱程序3表

图2 洗脱程序1标准色谱图

图3 洗脱程序2标准色谱图

图4 洗脱程序3标准色谱图

2.3 标准曲线与检出限

在优化条件下，得到峰面积y与标准溶液浓度x的标准曲线，线性关系良好，以3倍信噪比计算出检出限，见表4。国家标准中规定的检测方法的检出限在0.16～1.04 mg/kg，本方法的检出限在0.05～0.1 mg/kg，满足检测要求。

表4 7种着色剂的线性范围、线性方程、相关系数及检出限表

2.4 精密度与回收率

在优化条件下，选择苹果丁、草莓脯两种蜜饯样品进行回收率和精密度实验。每种样品7个平行，在0.1、10、50 mg/kg 3个水平加标（0.1 mg/kg为检出限，50 mg/kg为限量标准）。实验结果表明，3种浓度下，两种样品加标回收率在82.4%～105.7%，平均回收率为93.9%，相对标准偏差RSD均小于5%。

3 结语

本方法是基于国家标准GB/T 5009.35-2003的基础上优化而成的同时测定柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝和酸性红7种合成着色剂的改进方法。本方法采用纯水加热超声提取，离心后聚酰胺粉吸附净化，用甲醇-甲酸混合溶液洗涤，再用无水乙醇-氨水-水混合溶液进行解析，收集解析液定容后在254 nm上机测定。本实验方法不用单独对酸性红进行前处理，操作简单、灵敏度高、分离效果好，实验结果准确，可应用于基层实验室检测。

Determination of 7 Synthetic Colorants in Glazed Fruit by High Performance Liquid Chromatography

Wang Lei1,2, Ren Zhibin1,2, Pei Xinhua1
(1. Handan Entry Exit Inspection and Quarantine Bureau, Handan 056017, China; 2.College of Life Science and Food Engineering; Hebei University of Engineering, Handan 056038, China)

This paper established an HPLC method for the determination of candied lemon yellow, amaranth, carmine, sunset yellow, allura red, blue, acid red 7 synthetic colorants. This method does not need to treat acid red separately, it has the advantages of simple operation, high sensitivity, good separation efect and accurate experimental results.

Glazed fruit; Synthetic colorants; HPLC

R155.5

10.16736/j.cnki.cn41-1434/ts.2016.24.046