子宫内膜癌组织和血清中E盒结合锌指蛋白表达及临床意义

陈丽娟　石　琦　陈建琴　王秀秀　刘　畅　王渠源

(吉林大学第二医院妇产科，吉林　长春　130041)



子宫内膜癌组织和血清中E盒结合锌指蛋白表达及临床意义

陈丽娟石琦1陈建琴2王秀秀刘畅王渠源

(吉林大学第二医院妇产科，吉林长春130041)

摘要〔〕目的研究E盒结合锌指蛋白(ZEB)1在子宫内膜癌、子宫内膜不典型增生和正常子宫内膜组织中的阳性表达程度和血清蛋白浓度，探讨其与子宫内膜癌发生、发展的关系。方法随机选择116例子宫内膜组织，其中正常内膜组织20例，不典型增生内膜15例，内膜癌组织81例，应用免疫组织化学发进行标记染色，以检测在三种组织中ZEB1蛋白的表达情况。其次应用酶联免疫吸附试验法检测20例正常内膜、15例不典型增生、61例内膜腺癌、12例特殊类型癌(共108例)患者血清中ZEB1蛋白表达水平。结果ZEB1蛋白在子宫内膜癌、不典型增生及正常内膜中阳性率逐渐下降(P=0.000)。ZEB1蛋白在子宫内膜癌、不典型增生、正常内膜血清中表达水平逐渐下降，其表达水平与组织表达水平呈正相关。结论ZEB1蛋白与子宫内膜癌的发生、发展有关，有可能成为子宫内膜癌早期诊断及判断预后的一个客观依据。

关键词〔〕子宫内膜癌；E盒结合锌指蛋白(ZEB)1；浸润；转移

1长春市妇产医院2成都中医药大学附属医院

第一作者：陈丽娟(1989-)，女，硕士，主要从事妇科肿瘤研究。

子宫内膜癌是一组上皮性恶性肿瘤，近年来其发病率在世界范围内呈上升趋势且出现年轻化。子宫内膜腺癌约占子宫内膜癌的60%〔1〕。子宫内膜癌常见的症状为绝经后阴道不规则出血，易早期发现子宫内膜病变，但Ⅰ～Ⅱ期死亡率仍在 5%～15%〔2〕。但是现在对于子宫内膜癌的发病机制尚不十分明确。E盒结合锌指蛋白(ZEB)1是近年来发现与肿瘤侵袭、转移关系密切的蛋白，已在多种肿瘤中报道过，如：前列腺癌、肝癌、乳腺癌等，本研究探讨ZEB1蛋白在子宫内膜癌组织及血清中的表达及临床意义。

1资料与方法

1.1一般资料2013年10月至2014年10月我医院妇科行子宫切除、诊断性刮宫及宫腔镜检查获得的正常子宫内膜、不典型子宫内膜、子宫内膜癌组织的蜡块116例。其中正常子宫内膜组织20例(增生期8例，分泌期12例)，年龄32～63岁，平均49.62岁；子宫内膜不典型增生组织蜡块15例，年龄28～53岁，平均41.23岁，子宫内膜癌组织81例(其中特殊类型12例：癌肉瘤、浆液性癌、透明细胞癌各2例，鳞癌6例，由于特殊类型病例较少，故不做分期及分级统计)；年龄35～72岁，平均52.41岁。子宫内膜腺癌细胞分化程度是根据国际妇产科联盟(FIGO)在1988年提出高中低三级分化即：G1:23例，G2:27例，G3:19例，临床分期是根据FIGO在2009年制订的手术-病理分期标准规定进行的：Ⅰ期和Ⅱ期56例，Ⅲ期及Ⅳ期13例；子宫肌层浸润，超过1/2为21例，未超过1/2为48例；出现盆腔淋巴结转移9例，未出现淋巴结转移的60例。经术后石蜡切片确定标本的病理诊断。

1.2实验试剂一抗ZEB1抗体北京博奥森生物技术有限公司研发的，SP-9710试剂盒和DAB试剂盒是由福州迈新生物技术开发有限公司研发的。ELISA试剂盒购于南京建成生物有限公司(96T)，其他试剂为进口或活产分装试剂。

1.3免疫组化学法检测ZEB1蛋白表达子宫内膜组织标本常规石蜡包埋切片，先用10%甲醛固定，再连续将每个蜡块切除三张平均4 μm厚的片子，行HE染色后，在涂有多聚赖氨酸的玻片上将切片贴附以备用下一步的免疫组化染色，采用免疫组化SP法检测ZEB1抗体(链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶)，检测步骤按试剂盒说明书进行。石蜡切片HE染色法：细胞核呈蓝色，胞质呈红色，红细胞呈橘红色，其他成分呈深浅不同红色。免疫组化法：阳性表发为棕黄色，细胞和用苏木精复染为蓝色。严格按照实验流程操作免疫组化步骤。以淡黄色、中度黄色、棕黄色颗粒出现在细胞核中为阳性表达。结果判定实在200倍镜下观察全片的阳性细胞百分比和着色度。判定按阳性细胞百分比：<10%为1分，10%～50%为2分，>50%为3分。判定按染色程度：阴性为0分，淡黄色为1分，中度黄色2分，棕黄色3分。总分计分=阳性细胞得分×染色程度，总分<3分为阴性，≥3分为阳性。

1.4ELISA方法检测血清中ZEB1蛋白浓度所有入选对象均于入院后空腹抽取肘静脉4 ml，置入不含热源和内毒素的试管中，操作过程中避免任何细胞刺激，3 500 r/5 min后将血清和红细胞迅速分离，去上清液分装入EP管中，置于-80℃冰箱保存，ELISA方法测定ZEB1蛋白浓度，试剂盒为南京建成生物有限公司，严格按照说明书操作。采用图像分析系统测定图片吸光度值。

1.5统计学方法使用SPSS19.0统计软件进行χ2检验、t检验和Pearson相关分析。

2结果

2.1ZEB1表达在正常子宫内膜、子宫内膜不典型增生和子宫内腺癌组织的情况分析ZEB1蛋白在三种组织中的阳性率逐渐下降(P=0.000)。ZEB1蛋白在腺癌组中的阳性率高于不典型增生组(P=0.003)；ZEB1蛋白在腺癌组阳性率明显高于正常组(P=0.000)。见表1。

表1　ZEB1 在各组组织中的表达(n)

与不典型增生组比较：1)P<0.01；与正常组比较：2)P<0.001

2.2ZEB1蛋白表达与子宫内膜腺癌临床病理参数的关系ZEB1蛋白的阳性表达率在手术病理分期、淋巴结转移、肌层浸润程度有明显差异(P<0.05)，高分化与中分化差异不显著(P>0.05)，中分化组与低分化组差异显著(P<0.05)；ZEB1表达与年龄(P>0.05)及病理类型〔腺癌组43例(62.32%)vs特殊类型组7例(58.33%)，P=0.793〕无关。见表2。

表2　ZEB1阳性表达与子宫内膜癌临床病理

2.3ZEB1在血清及子宫组织中的表达的相关性ZEB1蛋白在正常子宫内膜、子宫内膜不典型增生和子宫内膜腺癌的细胞核中均有表达，根据回归曲线方程得出：正常组〔n=20,(0.07±0.03)pg/ml〕，不典型增生组〔n=15,(0.62±0.07)pg/ml〕，腺癌组〔n=61,(4.52±0.16)pg/ml〕。与腺癌组比较，正常组ZEB1浓度低(P<0.05)；不典型增生组与腺癌组比较，前者浓度低(P<0.05)。血清中ZEB1蛋白浓度与组织总吸光度呈线性相关，即表达量有差异(P<0.05)。见图2。

图1　ELISA检测标准曲线

2.4血清 ZEB1 在子宫内膜癌不同组织学分级中比较高分化(n=26)血清ZEB1表达水平(3.41±0.18 )pg/ml，中分化(n=23)(4.31±0.22)pg/ml，低分化(n=12)(5.84±0.42)pg/ml。ZEB1在子宫内膜癌血清中随着病理分级级别升高表达水平升高(P<0.05)。

2.5血清 ZEB1 在子宫内膜癌病理分期中比较Ⅰ～Ⅱ期(n=52)血清 ZEB1 表达水平(4.13±0.37)pg/ml，Ⅲ～Ⅳ期(n=9)(5.49±0.46)pg/ml。ZEB1在子宫内膜癌血清中随着临床分期级别升高表达水平升高(P<0.05)。

2.6血清 ZEB1 与子宫内膜癌淋巴结转移的关系无淋巴结转移(n=54)(3.98±0.41)pg/ml，有淋巴结转移(n=7)(5.76±0.51)pg/ml。ZEB1在子宫内膜癌有淋巴结转移组的表达浓度高(P<0.05)。

2.7ZEB1在不同类型子宫内膜癌血清中的表达情况子宫内膜腺癌组(n=61)血清ZEB1表达水平(4.52±0.16)pg/ml，特殊类型组(n=12)(4.75±0.25)pg/ml。两者无统计学差异。

2.8ZEB1在血清中浓度与组织总表达情况的相关性所搜集的子宫内膜腺癌标本中有56例组织与血清是来自同一个人，是匹配进行的，分析ZEB1蛋白在组织与血清中的表达趋势大致相同，血清中ZEB1蛋白的浓度与组织中阳性表达呈正相关〔R=0.913，R=0.000(双侧)〕。

3讨论

恶性肿瘤预后较差就是因为肿瘤细胞的侵袭和转移，ZEB1是最近较受重视的癌基因之一，发现其对肿瘤细胞作用的各个阶段都有参与。近年来，在对于ZEB1中的研究中，发现下调ZEB1存在于骨肉瘤MG-63细胞中的表达水平，基因转染未转染组侵袭转移能力明显高于转染组〔3〕，下调ZEB1存在于胃癌AGS细胞中的表达水平，可以改善肿瘤细胞侵袭转移特性〔4〕。肿瘤的形成及发展可能与ZEB1的不平衡表达有一定的关系。ZEB1蛋白在宫颈癌组织中是高表达的，且其表达率与宫颈癌的临床分期，淋巴结转移、浸润宫旁组织及肿瘤分化程度有一定的联系〔5〕，研究发现，ZEB1的表达与宫颈癌瘤体的大小无关〔6〕。ZEB1蛋白在上皮性卵巢癌中的表达明显高于正常卵巢组织，且分化程度越高，ZEB1的表达越低，淋巴结转移者高于无转移者，晚期卵巢癌明显高于早期卵巢癌，而且，ZEB1蛋白的表达与卵巢癌患者年龄及病理分类无关〔7〕，证实了ZEB1蛋白与卵巢癌的发生、发展、转移及预后有一定的关系。本实验提示ZEB1可能促进正常细胞向恶性转化，因而促进子宫内膜病变。ZEB1蛋白与子宫内膜癌的发生发展有一定的相关性。血清中的ZEB1蛋白高表达与肿瘤的低分化、有淋巴结转移、晚期的患者中更有意义。通过检测血清中的ZEB1蛋白浓度有可能成为子宫内膜癌相关的肿瘤标记物之一。

参考文献4

1Brosens LA.The role of the uterine junctional zone in the pathogenesis of pre-eclampsia〔J〕.Eur J Obetet Gynecol Reprod Biol,1995;63(2)：199.

2蔡乐，杨清，毕芳芳.烟酰胺磷酸核糖转移酶在子宫内膜癌中的表达及临床意义〔J〕.现代肿瘤学,2015;23(8)：1108-12.

3Shen A,Zhang Y,Yang H,etal.Overexpression of ZEB1 relates to metastasis and invasion in osteosarcoma〔J〕.J Surg Oncol,2012;105(8):803-34.

4Jia B,Liu H,Kong Q,etal.Overexpression of zeb1 associated with metastasis and invasion in patients with gastric carcinoma〔J〕.Mol Cell Biochem,2012;366(1-2):223-9.

5夏玉红，张占莉，姚丽，等.宫颈癌组织中ZEB1表达及其临床意义〔J〕.中国实用妇科与产科杂志,2013;7(9):599-61.

6汤雅玲，冉静，赵岩.宫颈癌上皮间质转化相关因子ZEB1与micro-RNA200c的关系〔J〕.中国生化药学杂志,2015;6(35):95-7.

7陈枝岚，王晶，宋成文，等.卵巢上皮性癌中ZEB1的表达及其临床意义〔J〕.中国热带医学,2013;13(7):863-5.

〔2014-09-23修回〕

(编辑苑云杰)

通讯作者：王渠源(1965-)，男，硕士生导师，主任医师，教授，主要从事妇科肿瘤研究。

中图分类号〔〕R739〔

文献标识码〕A〔

文章编号〕1005-9202(2016)01-0117-03；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.01.053