姬松茸多糖对糖尿病大鼠血清炎症因子和免疫功能的影响

吕　娟　白　甫　曹兰秀

(陕西中医药大学中药教研室，陕西　咸阳　712046)



姬松茸多糖对糖尿病大鼠血清炎症因子和免疫功能的影响

吕娟白甫曹兰秀1

(陕西中医药大学中药教研室，陕西咸阳712046)

摘要〔〕目的探讨姬松茸多糖对糖尿病(DM)大鼠血清炎症因子和免疫功能的影响。方法成年大鼠48只，按DM大鼠模型建模，按质量分层随机分为对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组，每组12只，分别以生理盐水、240 mg/kg、300 mg/kg和375 mg/kg浓度姬松茸多糖灌胃给药，持续1 w，末次给药2 h后处死大鼠，对比观察四组一般情况、体重和血糖、脾脏指数、胸腺指数、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、肿瘤坏死因子(TNF)-α、C反应蛋白(CRP)和白细胞介素(IL)-6。结果中药各剂量组体重均较对照组显著增加，血糖显著降低(P<0.05)，且随着给药剂量的增加，体重增加和血糖降低的更显著(P<0.05)；中药各剂量组脾脏指数、胸腺指数均较对照组增加，其中中剂量组和高剂量组显著高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)； 中药各剂量组CD4+、CD8+均较对照显著增加(P<0.05)，且高剂量组CD4+、CD8+均显著高于低剂量组，中剂量组CD4+显著高于低剂量组，差异有统计学意义(P<0.05)；中药各剂量组炎症因子TNF-α、CRP和IL-6均较对照组显著降低(P<0.05)，且随着给药剂量的增加，炎症因子TNF-α、CRP和IL-6降低越明显(P<0.05)。结论姬松茸多糖能改善DM大鼠临床症状，降低血糖和炎症反应，增强免疫功能。

关键词〔〕姬松茸多糖；糖尿病；炎症因子；免疫功能

1方剂教研室

第一作者：吕娟(1977-)，女，在职硕士，讲师，主要从事中药学的教学工作，中西医结合临床治疗糖尿病研究。

姬松茸是一种食药兼用的珍稀蕈菌〔1〕，其所含的多糖在增强机体免疫功能、抗肿瘤、抗病毒、补肾护肝等方面均具有作用，具有广泛的药理活性〔1～4〕。多往对姬松茸多糖在糖尿病(DM)方面的研究较少，本研究通过建立DM大鼠模型，探讨了姬松茸多糖不同给药剂量对DM大鼠体重、血糖、炎症因子肿瘤坏死因子(TNF)-α、C反应蛋白(CRP)、白细胞介素(IL)-6及免疫功能的影响。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1实验动物8周龄成年大鼠48只，雌雄各半，体重220～240 g，由第四军医大学动物实验室提供。

1.1.2姬松茸多糖由陕西中医药大学中药教研室自制姬松茸多糖，制作工艺步骤为：姬松茸粗多糖溶液制备、截留率膜超滤、截留液过阴阳离子树脂交换柱、冻干后得姬松茸多糖蛋白多糖精粉、根据要求配置浓度。

1.1.3其他试剂和仪器链脲佐菌素购自Sigma公司，AUY120电子分析天平购自日本岛津公司，血糖试剂盒购自上海申索佑福医学诊断用品有限公司，流式细胞仪由美国Beckman Coulter公司提供，TNF-α、CRP和IL-6酶联免疫试剂盒购自上海宝曼生物科技有限公司。

1.2方法

1.2.1建模禁食12 h，一次性腹腔注射60 mg/kg灭菌链脲佐菌素。3 d后随机3次测量血糖，血糖≥16.7 mmol/L即为DM大鼠模型建模成功。

1.2.2分组和给药按质量分层随机分为对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组，每组12只，分别以生理盐水、240 mg/kg、300 mg/kg和375 mg/kg浓度姬松茸多糖灌胃给药，1次/d，持续1 w，末次给药2 h后处死大鼠。

1.3观察指标一般情况：包括大鼠症状、建模是否成功以及死亡情况。体重和血糖：末次给药前禁食12 h，末次给药2 h后处死前称体重，测量血糖水平。脾脏指数、胸腺指数:处死大鼠并解剖，摘取胸腺和脾脏，擦干表面残留血迹，用天平称其重量。脾脏指数和胸腺指数：脏器质量(mg)/体重量(g)的比值。免疫功能指标:处死前眼球后静脉丛毛细管取血，肝素抗凝，流式细胞仪测定CD4+、CD8+，计算CD4+/CD8+。炎症因子:取血方法同上，离心取上清液，炎症因子TNF-α、CRP和IL-6均采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定。

1.4统计学方法采用SPSS20.0软件进行t检验。

2结果

2.1一般情况四组均建模成功，大鼠均表现出“三多一少”、反应迟缓、精神萎磨、毛竖而晦暗、弓背蛇体等DM症状。对照组和高剂量组各死亡1只，中剂量组死亡2只。

2.2四组体重和血糖比较中药各剂量组体重均较对照组显著增加，血糖显著降低(P<0.05)，且随着给药剂量的增加，体重增加和血糖降低的更显著(P<0.05)。见表1。

2.3四组脾脏指数、胸腺指数比较中药各剂量组脾脏指数、胸腺指数均较对照组增加，其中中剂量组和高剂量组显著高于对照组(P<0.05)。见表2。

表1　四组体重和血糖比较±s)

与对照组比较:1)P<0.05；与低剂量组比较，2)P<0.05；与中剂量组比较:3)P<0.05；表3，表4同

表2　四组脾脏指数、胸腺指数比较(mg/g)

与对照组比较:1)P<0.05

2.4四组免疫功能指标比较中药各剂量组CD4+、CD8+均较对照显著增加(P<0.05)，且高剂量组CD4+、CD8+均显著高于低剂量组，中剂量组CD4+显著高于低剂量组(P<0.05)，四组CD4+/CD8+比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表3。

表3　四组免疫功能指标比较±s)

2.5四组炎症因子比较中药各剂量组炎症因子TNF-α、CRP和IL-6均较对照组显著降低(P<0.05)，且随着给药剂量的增加，炎症因子TNF-α、CRP和IL-6降低越明显(P<0.05)。见表4。

表4　四组炎症因子比较±s)

3讨论

DM是临床最常见的内分泌疾病，主要以糖脂代谢紊乱为特征。DM临床主要表现为高血糖，出现多饮、多尿、多食以及消瘦“三多一少”症状。胰岛素分泌缺陷或(和)其生物作用受损是DM发病的主要原因，受环境和遗传共同作用〔5〕。DM患者长期处于高血糖状态，会引起各种组织出现慢性损害和功能障碍，严重威胁患者身体健康。DM的发病机制尚未完全阐明，近年来有研究认为炎症反应和免疫功能紊乱会加速DM发展，加重病情〔6〕。DM传统治疗方法以控制血糖为主，效果不尽如人意，抗感染和免疫调节可能成为DM治疗的新思路，是近年来研究的热点话题。

从姬松茸子实体中提取的姬松茸多糖，是一种具有芳香气味和多种药理功效的活性成分。姬松茸多糖药理活性广泛，在增强机体免疫功能、抗肿瘤、抗病毒、补肾护肝等方面均具有作用〔1～4〕，然而其在降血糖方面的作用一直未明确。本研究结果表明，姬松茸多糖具有降血糖的作用且给药剂量越大，降血糖效果越明显。胰岛素吸收缺失和胰岛素抵抗是DM损害的重要原因，保护胰岛β细胞、消除胰岛素抵抗是治疗DM的关键。姬松茸多糖降血糖的可能机制为〔7〕：松茸多糖能促进胰岛素的排泄，并增强胰岛素的愚钝性，从而遏制胰岛细胞对高血糖素的吸收，另外，姬松茸多糖还能加速葡萄糖肝内代谢，保护胰岛β细胞。

免疫功能紊乱在DM的发生和发展中起着重要作用，免疫器官重量能一定程度上反映机体非特异性免疫功能，脾脏中富含巨噬细胞和B淋巴细胞，能有效抵抗外来致病因素，参与了免疫反应中；胸腺能分泌胸腺素和产生T淋巴细胞，发挥细胞免疫调节功能。T细胞包括不同的亚群，CD4+、CD8+是T细胞中最主要的两类，正常情况下，CD8+、CD4+两类T细胞处于动态平衡状态，发挥特异性细胞免疫和免疫调节功能，DM发生时，平衡被打破，细胞免疫功能下降、免疫调节失衡，容易引起感染。本研究结果表明，姬松茸多糖还具有增强免疫功能的作用，且给药剂量越大，增强免疫功能效果越明显。

有学者发现〔8〕，高浓度炎症因子会加重DM病程和增加并发症发生的风险。TNF-α、CRP和IL-6是三种常见的炎症因子，本研究结果表明，姬松茸多糖还具有抗感染效果，且给药剂量越大，抗感染效果越明显。姬松茸多糖可能的抗感染机制为〔9〕：姬松茸多糖能抑制前列腺素E的生物合成和释放，且能抑制缓激肽、5-羟色胺和组胺等症介质的生成和释放。

参考文献4

1葛红霞,廖伟.姬松茸及其多糖的研究进展〔J〕.畜牧兽医科技信息,2012；5(1):4-5.

2王丽娟,张彦青,王勇，等.姬松茸多糖增强免疫作用及急性毒性研究〔J〕.食品科学,2014；35(13):258-61.

3崔立然,王桂梅,孙立冬，等.低分子量姬松茸多糖的免疫活性研究〔J〕.中医药信息,2013；30(2):10-3.

4周岚,黄云超,任宏轩，等.姬松茸多糖联合硒对肺癌恶病质小鼠营养和免疫的影响〔J〕.卫生研究,2013；42(6):1018-20.

5杨玮,张寅飞,汤明明，等.中老年糖尿病患者中筛查成年人迟发性自身免疫性糖尿病的临床线索〔J〕.中国老年学杂志,2014；34(23):6586-7.

6亓涛.中药干预糖尿病炎症因子保护胰岛β细胞功能的临床及实验研究〔D〕.济南：山东中医药大学硕士论文,2010.

7杨旭东,张杰,申梅淑.姬松茸多糖对2型糖尿病大鼠代谢及抵抗素基因表达的影响〔J〕.中国食物与营养,2010；16(1):74-6.

8盛志新,谢丹红.炎症与2型糖尿病的关系〔J〕.新医学,2008；39(5):345-7.

9门继光,金哲悟,齐鹏,等.姬松茸多糖对哮喘模型小鼠气道炎症和Th2类细胞因子水平的影响〔J〕.延边大学医学学报,2014；37(2):95-7.

〔2015-05-16修回〕

(编辑袁左鸣/滕欣航)

中图分类号〔〕R587.1〔

文献标识码〕A〔

文章编号〕1005-9202(2016)01-0044-03；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.01.020