消郁颗粒对抑郁大鼠的改善作用及机制

喻　斌　张臻年　杨　丽　梁　涛　周玲玲　程海波　沈祥春

(南京中医药大学，江苏　南京　210023)



消郁颗粒对抑郁大鼠的改善作用及机制

喻斌张臻年1杨丽梁涛周玲玲程海波沈祥春2

(南京中医药大学，江苏南京210023)

摘要〔〕目的观察消郁颗粒对慢性应激性刺激所致抑郁大鼠的改善作用，明确与皮层和海马神经生长因子(NGF)和脑源性神经营养因子(BDNF)表达的相关性。方法采用慢性应激性刺激制备抑郁大鼠模型，利用蔗糖水消耗、Open-field开场、Morris水迷宫实验观察消郁颗粒对各组大鼠行为学的影响，采用免疫组化法检测额叶皮层和海马区的NGF和BDNF表达。结果与模型组比较，消郁颗粒组体重和糖水消耗体积显著增加，游泳总路程、远站台区路程、近站台区路程、上台潜伏期、近站台区时间和远站台区时间显著缩短，显著增加近/远站台区时间比例(P<0.05，0.01)。此外，消郁颗粒可显著增加额叶皮层和海马NGF和BDNF的表达，并可呈剂量依赖性(P<0.05，0.01)。结论消郁颗粒对慢性应激刺激所致抑郁大鼠有一定改善作用，该作用与增加额叶皮层和海马NGF和BDNF的表达有关。

关键词〔〕消郁颗粒；抑郁；神经生长因子;脑源性神经营养因子

1南京市中医院脑病科2贵州医科大学药学院

沈祥春(1973-)，男，教授，博士，主要从事民族药物研究。

第一作者：喻斌(1978-)，男，副教授，博士，主要从事中药药理学研究。

抑郁症的发病机制复杂，与遗传、环境、社会等各种因素有关。一项流行病学研究显示，老年人抑郁情绪的发生率为 31.6%，已成为影响老年人生活质量的重要疾病〔1，2〕。治疗抑郁症的药物中化学药物疗效明显，但由于化学合成抗抑郁药长期服用后会出现严重的毒副作用，也存在着抗抑郁谱窄、易复发等缺点，所以作用温和、副作用少的传统中药及其方剂越来越受到人们的关注。本实验拟观察消郁颗粒对抑郁的改善作用，并初步探讨机制。

1材料与方法

1.1材料雄性清洁级SD大鼠，体重180～220 g，浙江大学实验动物中心提供，在实验环境中适应3 d后进行实验。消郁颗粒，本实验室制备，其中含柴胡、枳实、川芎、党参、白术、茯苓、厚朴、清半夏、珍珠母、八月札、冰片和甘草。阳性药帕罗西汀，葛兰素史克公司，批号1210023。YSD-4G型电子刺激器(蚌埠无线电二厂)，Morris水迷宫(安徽正华生物仪器设备有限公司)，Any-maze动物行为分析系统(美国Stoeling公司)。

1.2动物分组、造模和给药方法

1.2.1分组大鼠60只，随机分为空白组、模型组、阳性药组(帕罗西汀1.65 mg/kg)、低剂量组(10.5 g/kg)、中剂量组(21.0 g/kg)、高剂量组(42.0 g/kg)。每组10只。

1.2.2大鼠造模按前期报道方法复制抑郁大鼠模型〔3～5〕。用小鼠笼单独饲养以缩小活动空间，同时接受21 d的慢性中等强度应激：将动物每周随机给予夹尾3 min、禁水24 h、禁食24 h、昼夜颠倒24 h、160 Hz水平振荡5 min、电子刺激器电击(30 V，电击5 s，间隔5 s，共进行2 min)、4℃水游泳5 min。将上述方式各反复3次，共21种刺激方法纳入随机表格之中，21 d中每日随机施1种刺激，连续21 d。空白组大鼠不造模。

1.2.3给药方法大鼠造模成功后，根据分组情况开始进行给药处理，1次/d，共14 d。除空白组，其他动物于每日相同时间置入固定器中20 min，连续14 d。14 d后用于下列检测。

1.3指标检测

1.3.1蔗糖水消耗和体重测定实验前训练动物饮用糖水。禁水24 h后每只大鼠给予20 ml的1%蔗糖水，1 h后取走水瓶并量取剩余体积，获取糖水消耗体积(ml)，同时给大鼠称重。

1.3.2Open-field开场实验自制无盖敞箱，底面为64个等格(10 cm×10 cm)。将大鼠放入中心方格，计时3 min，以大鼠爬过时四肢均进入的格子数作为水平运动次数，以大鼠前肢离地腾空或攀附箱壁、后肢直立次数为垂直运动次数。

1.3.3Morris水迷宫实验平时训练时间设定70 s作为逃避到平台上的最大潜伏期，超过70 s则直接将大鼠牵引至平台。实验时将大鼠随机放入任一位置，以寻找平台的时间作为潜伏期，以寻找平台游过的轨迹作为总路程，利用Any-maze动物行为分析系统观察大鼠潜伏期、总路程、游泳速度、近站台区轨迹路程、远站台区轨迹路程、近/远站台区路程比、近站台区时间、远站台区时间、近/远站台区时间比。

1.3.4神经生长因子(NGF)、脑源性神经营养因子(BDNF)表达的检测处死大鼠，取脑后分离额叶皮层和海马，10%甲醛固定，通过免疫组化法，观察这两个脑区NGF和BDNF的表达。应用美国Media Cybernetics 公司专业图片分析软件Image-Pro Plus 6.0进行图片分析。

1.4统计学方法采用SPSS12.0软件行单因素方差分析。

2结果

2.1消郁颗粒对抑郁大鼠体重和蔗糖水消耗的影响与空白组比较，模型组大鼠可见体重明显减轻，糖水消耗显著减少(P<0.05)。消郁颗粒3个剂量组可见体重和糖水消耗体积改善(与模型组比较，P<0.05)，并可呈剂量依赖性。见表1。

表1　消郁颗粒对抑郁大鼠体重、蔗糖水消耗及

与空白组比较：1)P<0.05；2)与模型组比较：2)P<0.05；下表同

2.2消郁颗粒对抑郁大鼠开场活动的影响与空白组比较，模型组大鼠可见开场活动中水平和垂直运动明显减少(P<0.05)。消郁颗粒3个剂量组可显著增加开场中的水平和垂直运动(与模型组比较，P<0.05)。见表1。

2.3消郁颗粒对抑郁大鼠Morris水迷宫行为学的影响与空白组比较，模型组大鼠游泳总路程、近站台区轨迹路程、远站台区轨迹路程、上台潜伏期、近站台区时间和远台区时间显著增加，近/远站台区时间比显著减少(P<0.05)。消郁颗粒可显著缩短抑郁大鼠游泳总路程、近站台区路程、远站台区路程、上台潜伏期、近站台区时间和远站台区时间(与模型组比较，P<0.05)；此外，高剂量组还可见近/远站台区时间比例显著增加(与模型组比较，P<0.05)。见表2。

表2　消郁颗粒对抑郁大鼠水迷宫实验结果影响±s,n=10)

2.4消郁颗粒对抑郁大鼠额叶皮层和海马区域NGF、BDNF表达的影响与空白组比较，模型组大鼠可见NGF和BDNF在额叶皮层和海马区域表达显著减少(P<0.01)；消郁颗粒3个剂量组可见这两个脑区NGF和BDNF的表达增加(与模型组比较，P<0.05)，见表3。

表3　消郁颗粒对抑郁大鼠NGF、BDNF表达的

3讨论

海马区神经元的失常与抑郁的发生关系密切。皮层也是大脑执行网络的重要组成部分，与多种认知控制过程有关，包括注意的分配和干扰的分辨。其可加固信息的呈现和维持，参与复杂加工，如语境加工和信息的重新评估。一项162 例影像研究的 Meta 分析显示，皮层对情感价的分配至关重要〔6〕。

研究发现，BDNF和NGF对神经元发育、分化、生长、再生和可塑性均有促进作用，并对损伤后的修复也同样具有重要作用，其中BDNF还能增强NGF的作用〔7〕。抑郁症中的不良情绪导致 NGF、BDNF 分泌减少，加速神经元的变性与凋亡，并且与自杀行为密切相关,长程抗抑郁治疗后,BDNF 含量显著升高,恢复至正常水平〔8〕。中医认为疏肝理气解郁为抑郁症的主要治则；此外，因为抑郁还常常伴有血瘀、痰结、湿滞等而分别采用活血、化痰、祛湿等法。消郁颗粒中柴胡疏肝利胆、疏气解郁、散火，配枳实泻脾气之壅滞，调中焦之运动与柴胡同用一升一降，加强疏肝理气之功，以达郁邪，共为君药。川芎行气开郁，活血止痛；党参可补脾肺之气，与白术、茯苓等同用，共起补气、健脾、除湿之效。厚朴、清半夏以宽胸畅通宣泄郁气，珍珠母镇心定惊，清肝除烦，清热解毒；八月札舒肝理气，活血止痛，除烦利尿。此八味药配伍使用，共起解郁祛瘀、化痰和除湿之效，共为臣药。冰片性善走窜开窍，无往不达，芳香之气，能辟一切邪恶，辛热之性，能散一切风湿。我们在前期研究中发现，冰片具有促进药物脑内分布的作用，尤其对海马区较为明显，这可能也是该复方能显著改善抑郁认知能力低下的机制之一〔9～13〕。甘草则疏理肝气，调和诸药，共为佐使。诸药合用，共起疏肝解郁，行气，活血止痛之效。本研究结果提示消郁颗粒对慢性应激刺激所致抑郁大鼠有一定改善作用，该作用与增加额叶皮层和海马NGF和BDNF的表达有关。但是该复方组方较多，具体配伍机制还需要进一步的研究。

参考文献4

1邵通,王红英,陈长香,等.养老机构老年人抑郁情绪影响因素〔J〕.中国老年学杂志,2015;35(10):2798-800.

2Nestler EJ，Barrot M，Dileone RJ，etal.Neurobiology of depression〔J〕.Neuron，2003;34(1):13-25.

3喻斌,孙永,吕高红,等.电针配合贯叶连翘提取物对抑郁大鼠行为学及脑微循环的影响〔J〕.针刺研究,2011;36(3):164-70.

4喻斌,阮鸣,孙永,等.电针对抑郁大鼠大脑皮层ATP结合盒式蛋白表达的影响〔J〕.针刺研究,2013;38(4):286-90.

5Willner P.The validity of animal models of depression〔J〕.Psychopharmacology，1984;83(1):1-16.

6Williams NR，Taylor JJ，Lamb K，etal.Role of functional imaging in the development and refinement of invasive neuromodulation for psychiatric disorders〔J〕.World J Radiol,2014;6(10):756-78.

7侯金良,魏盛,杜希扬,等.抑郁情绪大鼠模型中糖水偏好实验数据的聚合分析〔J〕.实验动物与比较医学,2012;32(3):182-5,194.

8田中岭,张丽萍.电针对抑郁模型大鼠海马组织中NGF、BDNF的影响〔J〕.河南中医,2009;29(12):1171-3.

9Ide S,Kakeda S,Watanabe K,etal.Relationship between a BDNF gene polymorphism and the brain volume in treatment-naive patients with major depressive disorder:A VBM analysis of brain MRI〔J〕.Psychiatry Res,2015;233(2):120-4.

10Yu B,Ruan M,Sun Y,etal.Effect of borneol and electroacupuncture on the distribution of hyperforin in the rat brain〔J〕.Neural Regen Res,2011;6(24):1876-82.

11喻斌,阮鸣,董小平,等.不同间隔时间冰片处理对大鼠栀子苷脑靶效应的影响〔J〕.中国药理学通报,2012;28(6):862-6.

12Yu B,Ruan M,Cui XB,etal.Effects of borneol on the pharmacokinetics of geniposide in cortex,hippocampus,hypothalamus and striatum of conscious rat by simultaneous brain microdialysis coupled with UPLC-MS〔J〕.J Pharm Biomed Anal,2013;77:128-32.

13Yu B,Ruan M,Dong XP,etal.The mechanism of the opening of the blood-brain barrier by borneol:a pharmacodynamics and pharmacokinetics combination study〔J〕.J Ethnopharmacol,2013;150(3):1096-108.

〔2015-10-11修回〕

(编辑徐杰)

The improvement and mechanism of Xiaoyu granules on depressive rats

YU Bin,ZHANG Zhen-Nian,YANG Li,etal.

Pharmacy College,Nanjing University of Chinese Medicine,Nanjing 210023,Jiangsu,China

【Abstract】ObjectiveTo study the improvement and mechanism of Xiaoyu granules on depressive rats.MethodsThe behavior of depressive rats,which were formed by chronic stress,were detected by Morris Water Maze,syrup consuming and open-field experiments.Moreover,the expressions of NGF and BDNF in cortex and hippocampus were measured to explain its mechanism.ResultsComparing with model group,Xiaoyu granules increased the body weight and syrup consuming obviously,shortened the total swim route,latency,time consuming and route of swimming in distant and nearby area,enhanced time consuming ratio of swimming in nearby and distant area (P<0.05,P<0.01).Moreover,Xiaoyu granules increased the expressions of NGF and BDNF in cortex and hippocampus markedly (P<0.05,P<0.01).ConclusionsXiaoyu granules could improve the depressive rats and the mechanism involving with increasing the expressions of NGF and BDNF in cortex and hippocampus.

【Key words】Xiaoyu granules; Depression; NGF; BNDF

通讯作者：程海波(1975-)，男，副教授，博士，主要从事中医药方剂研究。

基金项目：国家自然科学基金(81001651，81573713)；江苏省自然科学基金(BK20151564)

中图分类号〔〕R749〔

文献标识码〕A〔

文章编号〕1005-9202(2016)01-0010-03；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.01.004