补阳还五汤对L-蛋氨酸致高脂血症模型大鼠血脂水平作用的研究

黄月芳楼招欢邓梦娇王 川

补阳还五汤对L-蛋氨酸致高脂血症模型大鼠血脂水平作用的研究

黄月芳1楼招欢2邓梦娇3王 川2

目的观察补阳还五汤对L-蛋氨酸（L-met）致高脂血症大鼠模型血脂的调节作用。方法

大鼠；高脂血症；补阳还五汤：蛋氨酸

动脉粥样硬化（AS）是导致心脑血管疾病最严重的病理过程，由AS引发的多种心血管事件是导致死亡的主要原因之一[1]。研究[2]表明，血脂异常是形成AS导致系列心脑血管病的重要原因。高脂血症可使血液处于“高黏滞血”状态，损伤内皮细胞及功能，诱发AS，导致冠心病、脑中风等[3]。近年临床观察发现，蛋氨酸代谢产物-血清同型半胱氨酸（Hcy）[4]可通过促进AS形成[5]，诱导细胞凋亡而促进脑梗死的发生发展[6-7]。补阳还五汤（BYHWD）出自王清任的《医林改错》，具有益气活血作用，是治疗脑中风后遗症的经典名方，具有改善侧枝循环[8]、拮抗Hcy致动脉硬化[9]、调节异常血脂水平等作用[10]。本文观察BYHWD对L-蛋氨酸（L-met）致血脂异常模型大鼠[11]血脂水平的调节作用，为进一步探讨该方抗AS及脑中风作用机制提供基础。

1 实验材料

1.1 实验动物 SD大鼠，雄性，体质量180～200g，60只，由浙江省医学科学院实验动物中心提供，合格证号:0011214，许可证号:SCXK（浙）2014-0001。

1.2 实验药物及试剂 阿托伐他汀钙胶囊（批号140710089，河南天方药业股份有限公司），临用前用蒸馏水配成1mg/mL溶液；L-蛋氨酸（批号141103，河南天兴食品添加剂有限公司），临用前用1%羟甲基纤维素钠溶液配制成150mg/mL溶液；补阳还五汤组方药材均购自浙江中医药大学饮片有限公司，按组方比例（黄芪120g，当归尾6g，赤芍5g，川芎、红花、桃仁、地龙各3g）取各药材，加入药材重量10倍体积的蒸馏水，回流提取2次，滤取药液，减压回收并适当浓缩致2g（生药）/mL，备用。总胆固醇（TC）试剂盒（批号20140901）、甘油三酯（TG）试剂盒（批号20140929）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）试剂盒（批号20140825）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）试剂盒（批号20140815），均购自宁波美康生物科技股份有限公司。

1.3 实验仪器 TBA-40FR全自动生化分析仪（东芝医疗系统株式会社）；Heraeus Biofuge Stratos冷冻离心机（德国Heraeus公司）。

2 实验方法

2.1 分组及给药 大鼠适应性喂养5天后，按体质量随机分组分为正常组、模型组，阿托伐他汀（0.01g/ kg）、补阳还五汤5、10、20g/kg剂量组6组，每组10只。各组均给予基础饲料，实验期间自由采食饮水。每天上午除正常组外，其余各组大鼠按3mL/只灌胃L-蛋氨酸溶液；下午给予相应药物，正常组和模型对照组按1mL/100g体质量剂量给予蒸馏水，连续8周。2.2 血脂测定 于第0、2、4、8周眼眶采血2mL，室温静止2h后，3500r/min离心10min，取血清，全自动生化分析仪检测血清TC、TG、LDL-C、HDL-C水平，计算动脉硬化指数（AI）=（TC-HDL）/HDL。

3 实验结果

3.1 各组大鼠血清TC比较 给药前，各组大鼠血清TC水平无明显差异（孕＜0.05）；L-蛋氨酸造模第2周开始，模型组大鼠血清TC水平较正常组显著升高（孕＜0.05，孕＜0.01）；给药第2、4、8周，与模型组相比，阿托伐他汀组、补阳还五汤10、20g/kg剂量组大鼠血清TC水平显著降低（孕＜0.05，孕＜0.01）；5g/kg补阳还五汤对TC有下降趋势，但差异无统计学意义（孕＞0.05），见表1。

3.2 各组大鼠血清TG比较 给药前，各组大鼠血清TG水平均无明显差异（孕＞0.05）；L-蛋氨酸造模第2周开始，与正常组相比，模型组大鼠血清TG水平显著升高（孕＜0.05，孕＜0.01）；与模型组相比，给药第2、4、8周，补阳还五汤10g/kg剂量组大鼠血清TG水平显著降低（孕＜0.01），5g/kg剂量组在第4周血清TG水平显著降低（孕＜0.05），见表2。

表1 各组大鼠血清TC水平比较（mmol/L，±s）

表1 各组大鼠血清TC水平比较（mmol/L，±s）

注:与正常组比较，△孕＜0.05，△△孕＜0.01；与模型组比较，*孕＜0.05，**孕＜0.01；TC:总胆固醇

组别正常组模型组阿托伐他汀组补阳还五汤组剂量（g/kg）--0.01 5 10 20只数10 10 10 10 10 10给药前1.58±0.14 1.61±0.10 1.59±0.22 1.63±0.17 1.55±0.14 1.55±0.18 2周1.59±0.21 1.78±0.27△1.57±0.18* 1.61±0.15 1.48±0.22** 1.53±0.18* 4周1.32±0.19 1.47±0.13△1.32±0.16* 1.44±0.18 1.21±0.14** 1.28±0.09** 8周1.41±0.07 1.59±0.12△△1.45±0.14* 1.51±0.17 1.35±0.08** 1.43±0.13**

表2 各组大鼠血清TG比较（mmol/L，±s）

表2 各组大鼠血清TG比较（mmol/L，±s）

注:与正常组比较，△孕＜0.05，△△孕＜0.01；与模型组比较，*孕＜0.05，**孕＜0.01；与阿托伐他汀组比较，#孕＜0.05；TG:甘油三酯

组别正常组模型组阿托伐他汀组补阳还五汤组剂量（g/kg）--0.01 5 10 20只数10 10 10 10 10 10给药前0.67±0.06 0.70±0.06 0.76±0.16 0.71±0.11 0.69±0.09 0.72±0.17 2周0.66±0.05 0.76±0.10△0.75±0.14 0.73±0.17 0.63±0.07*#0.74±0.12 4周0.56±0.12 0.78±0.15△△0.64±0.16* 0.68±0.09* 0.60±0.09** 0.63±0.15* 8周0.66±0.12 0.75±0.05△0.73±0.15 0.70±0.08 0.69±0.08*#0.74±0.10

表3 各组大鼠血清LDL-C比较（mmol/L，±s）

表3 各组大鼠血清LDL-C比较（mmol/L，±s）

注:与正常组比较，△孕＜0.05，△△孕＜0.01；与模型组比较，*孕＜0.05，**孕＜0.01；与阿托伐他汀组比较，#孕＜0.05；LDL-C:低密度脂蛋白胆固醇

组别正常组模型组阿托伐他汀组补阳还五汤组剂量（g/kg）--0.01 5 10 20只数10 10 10 10 10 10给药前0.26±0.08 0.26±0.06 0.26±0.08 0.28±0.09 0.31±0.10 0.28±0.09 2周0.20±0.04 0.29±0.06△△0.24±0.07* 0.28±0.06 0.18±0.05*#0.23±0.09 4周0.21±0.04 0.25±0.03△△0.22±0.03* 0.25±0.03 0.20±0.03** 0.19±0.04** 8周0.18±0.02 0.22±0.04△0.19±0.03* 0.21±0.05 0.16±0.03**#0.17±0.03**

表4 各组大鼠血清HDL-C比较（mmol/L±s）

表4 各组大鼠血清HDL-C比较（mmol/L±s）

注:与正常组比较，△孕＜0.05，△△孕＜0.01；与模型组比较，*孕＜0.05；HDL-C:高密度脂蛋白胆固醇

剂量（g/kg）组别正常组模型组阿托伐他汀组补阳还五汤组--0.01 5 10 20只数10 10 10 10 10 10给药前0.74±0.06 0.73±0.07 0.74±0.08 0.77±0.11 0.68±0.07 0.74±0.06 2周0.84±0.17 0.74±0.05 0.73±0.10 0.80±0.16 0.76±0.18 0.76±0.17 4周0.72±0.07 0.67±0.11 0.65±0.09 0.70±0.10 0.63±0.10 0.68±0.07 8周0.81±0.09 0.67±0.05△△0.74±0.08* 0.70±0.09 0.73±0.10* 0.72±0.10

3.3 各组大鼠血清LDL-C比较 给药前，各组血清LDL-C水平均差异无统计学意义（孕＞0.05）；造模第2、4、8周，与正常组相比，模型组血清LDL-C水平显著升高（孕＜0.05，孕＜0.01）；与模型组相比，给药第2、4、8周阿托伐他汀组、补阳还五汤10g/kg剂量组大鼠血清LDL-C水平均显著降低（孕＜0.05，孕＜0.01），补阳还五汤20g/kg剂量组在4、8周能显著降低血清LDL-C水平（孕＜0.01），见表3。

3.4 各组大鼠血清HDL-C比较 给药前，各组血清HDL-C水平差异无统计学意义（孕＞0.05）；L-蛋氨酸灌胃2周后，与正常组相比，模型组HDL-C有降低趋势，至第8周HDL-C水平显著降低（孕＜0.05）；与模型组相比，给药第8周，10g/kg补阳还五汤能显著升高血清HDL-C水平（孕＜0.05），见表4。

3.5 各组大鼠动脉硬化指数（AI）比较 给药前，各组大鼠AI无明显差异（孕＞0.05）；与正常组相比，造模第2、4、8周，模型组大鼠AI显著增大（孕＜0.01）；与模型组相比，阿托伐他汀组AI有所降低，第2、8周差异有统计学意义（孕＜0.05，孕＜0.01）；补阳还五汤各剂量组在各给药周期均能有效降低AI（孕＜0.05，孕＜0.01），见表5。

表5 各组大鼠AI比较（±s）

表5 各组大鼠AI比较（±s）

注:与正常组比较，△孕＜0.05，△△孕＜0.01；与模型组比较，*孕＜0.05，**孕＜0.01；与阿托伐他汀组比，#孕＜0.05；AI:动脉硬化指数

组别正常组模型组阿托伐他汀组补阳还五汤组剂量（g/kg）--0.01 5 10 20只数10 10 10 10 10 10给药前1.13±0.18 1.21±0.26 1.14±0.34 1.21±0.35 1.28±0.32 1.11±0.20 2周0.93±0.16** 1.42±0.32△△1.16±0.18* 1.05±0.28** 0.97±0.19**#1.06±0.27** 4周0.84±0.18 1.23±0.37△△1.04±0.14 1.06±0.18 0.94±0.12* 0.89±0.13**#8周0.77±0.24 1.37±0.12△△0.97±0.25** 1.16±0.26* 0.88±0.29** 1.00±0.25**

4 讨论

高脂饲料及高脂乳剂诱导的高脂血症大、小鼠模型是目前常见的用于研究高脂血症及AS的动物模型[12]，此外，L-met也能导致高脂血症[10]。本研究结果表明，灌胃L-met 2周后，大鼠血清TC、TG、LDLC含量明显升高（孕＜0.05，孕＜0.01），动脉粥样硬化指数（AI）显著增大（孕＜0.01），该作用可持续到第8周，提示灌胃L-met可成功复制高脂血症大鼠模型，且可能诱发AS。

高脂血症属中医“痰浊”、“眩晕”、“胸痹”等范畴，其发病与脏腑功能失调而产生的痰浊、瘀血等病理产物痹阻脉络有关[13]。五脏调和则气血生化有源，津液敷布顺畅，百病不生；若脏腑功能失调，气血运行不畅，津液敷布失常，则由浊生脂及痰，阻塞脉道以致瘀阻脉络形成高脂血症[14]。补阳还五汤中重用黄芪以大补脾胃之元气，从而令气旺则血行，瘀去则络通，补气而不伤正；当归长于活血，且有化瘀而不伤血之妙用，益血和营，使阴生阳长，气旺血生；桃仁、川芎、赤芍、红花用于助当归活血祛瘀，地龙以通经活络[15]，因虚致瘀之血得以行，共奏补气活血、化痰调脂之功效。本实验研究表明，实验周期内，10g/kg补阳还五汤能显著降低模型大鼠血清TC、TG、LDL-C水平及AI（孕＜0.05，孕＜0.01），对HDL-C有升高作用（第8周差异有统计学意义，孕＜0.05），提示补阳还五汤对L-蛋氨酸诱导的大鼠高脂血症具有良好的调节作用，对AS具有一定的防治作用。

阿托伐他汀是目前临床常用的降血脂药，主要适用于高胆固醇血症。本实验结果表明，在给药第2周阿托伐他汀即可显著降低模型大鼠血清TC、LDL-C水平（孕＜0.05，孕＜0.01），但对血清TG水平影响不大，仅在给药第4周显示出显著的降TG作用。相比阿托伐他汀组，补阳还五汤10g/kg在实验周期内，对模型大鼠血清TC、TG及LDL-C水平均有一定的降低作用。给药第2、8周补阳还五汤组大鼠血清TG、LDL-C水平与阿托伐他汀组比较，差异有统计学意义（孕＜0.05）。提示，在L-met诱导的实验性高脂血症中，补阳还五汤降血清TG的作用可能优于阿托伐他汀。

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（收稿:2016-03-03 修回:2016-05-27）

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Effects of Buyang Huangwu Decoction on Lipid Levels in Rats with Hyperlipidaemia Induced by L-me-

HUANG Yuefang1,LOU Zhaohuan2,DENG Mengjiao3,WANG Chuan2. 1 Department of Neurology,the First Affiliated Hospital of Zhejiang Chinese Medical University,Hangzhou(310006),China;2 Zhejiang Chinese Medical University,Hangzhou(310053),China;3 Wenzhou Medical University,Wenzhou(325035),China

ObjectiveTo investigate the effect of Buyang huangwu decoction（BYHWD）on blood lipids levels in rats with hyperlipidaemia induced by L-methionine.MethodsHyperlipidaemia model rats were made by ig.L-methionine for 8 weeks on end,atorvastatin（0.01 g/kg）and BYHWD（5,10,20 g/kg）was administrated at the same time.At 2,4,and 8 weeks,blood samples were collected from venous sinus of eye-orbit in rats,and total cholesterol（TC）,triglycerides（TG）,low-density lipoprotein-cholesterol（LDL-C）,high-density lipoprotein-cholesterol（HDL-C）levels in sera were measured by fully automatic biochemical analyzer according to the kits instruction and atherosclerosis index（AI）was calculated.ResultsCompared with control group,the serum levels of TC, TG and LDL-C and AI in model rats at 2,4,and 8 weeks were significantly increased（TC：1.78 0.27 mmol/L,1.47 0.13 mmol/L,1.59 0.12 mmol/L;TG：0.76 0.10 mmol/L,0.78 0.15 mmol/L,0.75 0.05 mmol/L;LDL-C：0.29±0.06 mmol/L,0.25±0.03 mmol/L,0.22±0.04 mmol/L;孕＜0.05 or孕＜0.01;AI：1.42±0.32,1.23±0.37,1.37±0.12,孕＜0.01）. Compared with model group,BYHWT with dosage of 10,20 g/kg significantly lowered blood lipid levels and AI at2,4,and 8 weeks（TC with dosage of 10 g/kg：1.48±0.22 mmol/L,1.21±0.14 mmol/L,1.35±0.08 mmol/L；TC with dosage of 20 g/kg：1.53±0.18 mmol/L,1.28±0.09 mmol/L,1.43±0.13 mmol/L;TG with dosage of 10 g/kg：0.63±0.07 mmol/L,0.60±0.09 mmol/L,0.69±0.08 mmol/L;TG with dosage of 20 g/kg：0.63±0.15 mmol/L;LDL-C with dosage of 10 g/kg：0.18±0.05 mmol/L,0.20±0.03 mmol/L,0.16±0.03 mmol/L;LDL-C with dosage of 20 g/kg：0.23±0.09 mmol/L,0.19±0.04 mmol/L,0.17±0.03 mmol/L;AI with dosage of 10 g/kg：0.97±0.19,0.94±0.12,0.88±0.29;AI with dosage of 20 g/kg：1.06±0.27,0.89±0.13,1.00±0.25;孕＜0.05 or孕＜0.01）.ConclusionBYHWD has good effect on regulating blood lipids in rats with hyperlipidaemia induced by L-methionine and has certain preventive and therapeutic effect on atherosclerosis.

rats;hyperlipidaemia;buying huangwu decoction;methionine

浙江省自然科学基金项目（No.LY14H270008；No.LY15H280007）

1浙江中医药大学附属第一医院神经内科（杭州 310006）；2浙江中医药大学（杭州 310053）；3温州医科大学（温州 325035）

楼招欢，E-mail:lou_jasmine@163.com

采用SD大鼠灌胃L-蛋氨酸溶液复制高脂血症大鼠模型，造模同时给予阿托伐他汀（0.01g/kg）和补阳还五汤（5、10、20g/kg）干预，连续8周；在给药前及给药后2、4、8周采血，检测各组大鼠血清甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）及高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）水平并计算动脉粥样硬化指数（AI）。结果与正常组比较，L-蛋氨酸灌胃后，模型组大鼠血清TC[2周：（1.78± 0.27）mmol/L，4周：（1.47±0.13）mmol/L，8周：（1.59±0.12）mmol/L]、TG[2周：（0.76±0.10）mmol/L，4周：（0.78±0.15）mmol/L，8周：（0.75±0.05）mmol/L]、LDL-C[（2周：（0.29±0.06）mmol/L，4周：（0.25±0.03）mmol/L，8周：（0.22±0.04）mmol/L]水平明显增高（孕＜0.05，孕＜0.01），动脉粥样硬化指数（AI）（2周：1.42±0.32，4周：1.23±0.37，8周：1.37±0.12）显著增大（孕＜0.01）；与模型组比较，补阳还五汤10、20g剂量能显著降低模型组大鼠血清TC[10g：2周：（1.48±0.22）mmol/L，4周：（1.21±0.14）mmol/L，8周：（1.35±0.08）mmol/L；20g：2周：（1.53±0.18）mmol/L，4周：（1.28±0.09）mmol/L，8周：（1.43±0.13）mmol/ L]、TG[（10g：2周：（0.63±0.07）mmol/L，4周：（0.60±0.09）mmol/L，8周：（0.69±0.08）mmol/L；20g：4周：（0.63±0.15）mmol/L]、LDL-C[10g：2周：（0.18±0.05）mmol/L，4周：（0.20±0.03）mmol/L，8周：（0.16± 0.03）mmol/L；20g：2周：（0.23±0.09）mmol/L，4周：（0.19±0.04mmol/L，8周：（0.17±0.03）mmol/L]水平及AI（10g：2周：0.97±0.19，4周：0.94±0.12，8周：0.88±0.29；20g：2周：1.06±0.27，4周：0.89±0.13，8周：1.00±0.25；孕＜0.05，孕＜0.01）。结论补阳还五汤对L-met致异常的大鼠血脂水平具有良好的调节作用，对大鼠动脉粥样硬化具有一定的防治作用。