高效液相色谱法测定氯前列醇钠含量

张航俊,林仙军,陈慧华,陆春波

(浙江省兽药饲料监察所,杭州 310020)

高效液相色谱法测定氯前列醇钠含量

张航俊,林仙军,陈慧华,陆春波*

(浙江省兽药饲料监察所,杭州 310020)

建立了氯前列醇钠含量测定的高效液相色谱法。采用Agilent ZORBAX RX-SIL(4.6 mm×250 mm, 5 μm)为色谱柱，冰乙酸-无水乙醇-正己烷(1∶100∶900)为流动相，流速1.5 mL/min，检测波长220 nm，柱温35 ℃，进样量10 μL。结果表明，在0.05～2.50 mg/mL浓度范围内线性关系良好(r=0.9999)。本方法结果准确可靠，可用于氯前列醇钠的质量控制。

氯前列醇钠;含量测定：高效液相色谱法

氯前列醇钠(Cloprostenol Sodium)为人工合成的前列腺素F2a同系物，具有强大的溶解黄体作用，能迅速引起黄体消退，并抑制其分泌；对子宫平滑肌也具有直接兴奋作用，可引起子宫平滑肌收缩，子宫颈松弛[1]。2003年10月批准该产品在国内上市，该产品的生产周期较长，约为半年，而市场需求量较少，每年的产量较低，约为1～2 kg，且价格昂贵。氯前列醇钠原料的质量标准在《中国兽药典》[2]、《美国药典》[3]和《英国药典》[4]均有收载，含量测定均采用正相高效液相色谱法，但进样浓度和进样体积差异较大。《中国兽药典》氯前列醇钠原料的含量测定采用正相色谱法，而注射用氯前列醇钠的含量测定采用反相色谱法。氯前列醇钠的合成工艺产生的杂质，主要为杂质A和杂质B，《英国药典》在有关物质项明确了杂质A和杂质B的结构式，本试验分别采用正相色谱法和反相色谱法对杂质A和杂质B是否对主峰产生干扰进行了研究，确立了HPLC法测定氯前列醇钠原料含量。

1 仪器与试剂

Waters 2695 高效液相色谱，配Waters 2487 紫外检测器，美国Waters公司；XS-205电子天平(感量0.01 mg)，瑞士METTLER TOLEDO公司。

氯前列醇钠对照品(含量为99.3%，批号FOH392，USP)；氯前列醇钠样品(批号130305)由宁波三生药业有限公司提供，该产品由我国台湾进口；氯前列醇钠样品(批号130413)；杂质A：(±) -(5Z)-7-〔(1R,3R,5S)-2-〔(1E,3S)-4-(3-氯苯氧基)-3-羟基-1-丁烯基〕-3,5-二羟基环戊烷基〕-5-庚烯酸钠 (差向异构体，epimer)；杂质B：(±)-(5E)-7-〔(1R,3R,5S)-2-〔 (1E,3R)-4-(3-氯苯氧基)-3-羟基-1-丁烯基〕-3,5-二羟基环戊烷基〕-5-庚烯酸钠 (反式异构体，trans-isomer)，均由宁波第二激素厂生产和制备。冰乙酸、无水乙醇、正己烷和乙腈均为色谱纯。

2 方法与结果

2.1 专属性考察

2.1.1 正相色谱条件 流动相为冰乙酸-无水乙醇-正己烷(1∶100∶900)；色谱柱：Agilent ZORBAX RX-SIL(4.6 mm×250 mm，5 μm)；检测波长220 nm；流速1.5 mL/min；进样量10 μL；柱温35 ℃。理论板数按氯前列醇峰计算大于7000，主峰的保留时间约为11 min。结果见图1。结果表明在上述色谱条件下，氯前列醇与杂质A 和杂质B的分离度分别为1.5和3.3，均达到基线分离(图1)。

2.1.2 反相色谱条件 流动相为0.24%磷酸二氢钠溶液(用磷酸调节pH值至2.5)-乙腈(65∶35)；色谱柱：Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；检测波长220 nm；流速1.5 mL/min；进样量10 μL；柱温35 ℃。理论板数按氯前列醇峰计算大于7000，主峰的保留时间约为8 min。结果见图1。结果表明在上述色谱条件下，氯前列醇与杂质A不能分离，氯前列醇与杂质B分离度为1.5(图2)。

图1 溶剂(1)、杂质A(2)、杂质B(3)、0.5 mg/mL供试品溶液(4)正相色谱图

图2 溶剂(1)、杂质A(2)、杂质B(3)、0.1 mg/mL供试品溶液(4)反相色谱图

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 取氯前列醇钠对照品25 mg，精密称定，置50 mL量瓶中，用无水乙醇溶解并稀释至刻度。

2.2.2 供试品溶液的制备 取氯前列醇钠供试品25 mg，精密称定，置50 mL量瓶中，用无水乙醇溶解并稀释至刻度。

2.3 线性关系考察 取氯前列醇钠对照品适量，精密称定，用无水乙醇稀释成0.05、0.1、0.2、0.5、1.0、2.5 mg/mL的对照品溶液，按2.1.1项的色谱条件，精密量取10 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，回归方程为Y=7.1×106X+62409，r=0.9999，表明在该浓度范围内线性良好。

2.4 精密度试验 精密量取氯前列醇钠对照品溶液，按2.1.1项的色谱条件，精密量取10 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，连续进样6次测定峰面积。结果表明相对偏差(RSD)为0.29%，表明系统精密度符合要求。

2.5 稳定性试验 精密量取供试品溶液(批号130305)，分别在样品处理后的0、1、2、4、8、12 h，按2.1.1项的色谱条件，精密量取10 μL，注入液相色谱仪，测定峰面积，考察样品稳定性。测定结果RSD为0.34%，表明样品溶液在12 h内稳定。

2.6 样品的测定 精密量取供试品溶液，按2.1.1项的色谱条件，精密量取10 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算氯前列醇钠含量，结果见表1。

表1 氯前列醇钠原料含量测定结果

3 讨论与小结

杂质A和杂质B的母体结构与氯前列醇钠相同，理化性质极为相似，采用2.1.2项的反相色谱条件，结果显示杂质A与主峰不能分离，杂质B与主峰完全分离。而采用本文2.1.1项的色谱条件，杂质A、杂质B与主峰均达到基线分离，故本试验后续的研究均采用2.1.1项的色谱条件。

试验表明，随着进样体积的增加，理论板数下降，浓度为0.5 mg/mL 的氯前列醇钠对照品溶液进样体积为5、10、20 μL时，理论板数分别为8499、7180和2405。不同浓度的氯前列醇钠对照品溶液，进样体积均为10 μL时，结果显示浓度为0.1 mg/mL的氯前列醇钠对照品溶液峰面积过小，且基线波动较大。综合考虑，选择进样浓度为0.5 mg/mL，进样量为10 μL。

由于氯前列醇钠的生产工艺不同，各企业在合成氯前列醇钠的过程中所产生的杂质A和杂质B的量不同，对氯前列醇钠的含量会产生影响。经试验，批号为130305、130413的供试品中杂质A和杂质B 的总量分别为0.3%、1.1%，对应的氯前列醇钠的含量分别为99.0%和98.3%。

氯前列醇钠的检测标准方法研究尚未见相关报道。本文建立了氯前列醇钠原料的含量测定方法，该方法准确、重现性好，以期为《中国兽药典》二○一五版氯前列醇钠原料质量标准的修订提供参考依据。

[1] 中国兽药典委员会. 中华人民共和国兽药典兽药使用指南化学药品卷二O一O年版[S].

[2] 中国兽药典委员会. 中华人民共和国兽药典二O一O年版一部[S].

[3] U.S. Pharmacopoeia. 35-NF27[S].

[4] British Pharmacopoeia Commission. British Pharmacopoeia 2013[S].

(编辑：侯向辉)

Determination of Cloprostenol Sodium by HPLC

ZHANG Hang-jun, LIN Xian-jun, CHEN Hui-hua, LU Chun-bo*

(ZhejiangProvinceInstituteofVeterinaryDrugandFeedstuff,Hangzhou310020,China)

The HPLC method was established for the determination of cloprostenol sodium. A chromatographic column of Agilent ZORBAX RX-SIL(4.6 mm×250 mm, 5 μm)was used , with the mobile phase of acetic acid-anhydrous ethanol-n-hexane ( 1∶100∶900) at the flow rate of 1.5 mL/min, the detective wavelength of 220 nm, the column temperature of 35 ℃ and the injected volumn was 10 μL. The linear concentration was within the range of 0.05～2.50 mg/mL(r=0.9999). The method is accurate and available for quality control of cloprostenol sodium.

cloprostenol sodium; determination；HPLC

张航俊，助理兽医师，从事兽药和畜产品检测和技术研究。

陆春波。E-mail：lucb02@163.com

2016-05-19

A

1002-1280 (2016) 09-0058-03

S859.2