西洛他唑片体内生物等效性研究

张惠海南医学院附属医院，海南　海口　570102

西洛他唑片体内生物等效性研究

张惠
海南医学院附属医院，海南海口570102

【摘要】目的:对两种国产西洛他唑片进行生物等效性研究.方法:用自身前后对照方法，20例健康男性受试者随机分组，单次口服参比制剂或受试制剂各100mg，60h内间断采血样;采用高效液相色谱法测定血浆中药物浓度，计算药动学参数.结果: 2种西洛他唑片在人体内药时曲线符合二室模型，主要动力学参数Tmax分别为3. 25±0. 85、3. 35±0. 81h; Cmax分别为876. 70±276. 48、823. 79± 242. 37ng/ml; AUC0～t分别为11137. 31±2847. 19、10981. 44±2475. 94(ng·h)/ml，AUC0～∞分别为11974. 78±3076. 05、11939. 44± 2998. 14(ng·h)/ml，T1/2分别为11. 07±5. 87、10. 23±8. 48h;两种制剂的主要药动学参数Cmax、AUC0～t经对数转换后进行方差分析及双单侧t检验，并计算90%置信区间，表明两种制剂生物等效，受试制剂西洛他唑片的人体相对生物利用度为(101. 3±24. 6)%.结论:试验和参比制剂具有生物等效.

【关键词】西洛他唑;生物等效性;高效液相色谱

Cilostazol tables in vivo bioequivalence Study

ZHANG Hui
Hainan Medical University Affiliated Hospital，Haikou 570102，China

Abstract:Objective To evaluate the bioequivalence of two formulations cilostazol tables in healthy volunteers. Methods 100mg Test preparation and reference preparation were given to 20 healthy male volunteers in randomized two－way crossover design for the pharmacokinetic and relative bioavailability study. Plasma concentration of cilostazol were determined by RP－HPLC. Results The concentration-curve in vivo oftwo formulations cilostazol tables in healthy volunteers. The main pharmacokinetic parameters of the two preparation were : Tmax 3. 25±0. 85 and 3. 35±0. 81h，Cmax 876. 70±276. 48 and 823. 79±242. 37ng/ml，AUC0～t11137. 31± 2847. 19 and 10981. 44±2475. 94ng·h/ml. AUC0～∞11974. 78±3076. 05 and 11939. 44±2998. 14ng·h/ml，T1/2(Ke)11. 07±5. 87 and 10. 23±8. 48h，respectively. The mean relative bioavailability of test preparation vs reference preparation were(101. 3±24. 6)% . Conclusion The results of statistical analysis shows that the reference and the test tablets were bioequivalent.

Key words:KEYWORDS: Cilostazol; Bioequivalence; HPLC

西洛他唑(Cilostazol)为抗血小板药，通过抑制血小板及血管平滑肌内磷酸二酯酶活性，从而增加血小板及平滑肌内cAMP浓度，发挥抗血小板作用及血管扩张作用.主要用于治疗由动脉粥样硬化、大动脉炎、血栓闭塞性脉管炎、糖尿病所致的慢性动脉闭塞症.西洛他唑能改善肢体缺血所引起的慢性溃疡、疼痛、发冷及间歇跛行，并可用作上述疾病外科治疗(如血管成形术、血管移植术、交感神经切除术)后的补充治疗以缓解症状.本试验以浙江大家制药有限公司的西洛他唑片作为参比剂，考察海南绿岛制药有限公司生产的西洛他唑片的药动学，作出生物等效性评价.

1　材料与方法

1. 1受试者资料受试者选择20名男性健康受试者，体重指数19. 2～24. 0kg/m2，年龄19～26岁.所有受试者均通过健康体格检查，实验室检查(血常规、肝功能、肾功能、心电图等)均属正常，精神状态良好.在试验期1个月内未服用过任何其他药物，且在试验期1个月内禁忌烟酒.所有受试者均签署知情同意书，并经本基地伦理委员会审批同意.

1. 2药品及试剂西洛他唑片(每片50mg，批号: 101201，海南绿岛制药有限公司);参比制剂(R):西洛他唑片(每片50mg，批号: 120403P，浙江大家制药有限公司);西洛他唑(批号: 100363－200301，中国药品生物制品检定所);地西泮(批号: 171225－

200903，中国药品生物制品检定所).乙腈(色谱纯，美国Fisher公司);甲醇(色谱纯，美国Fisher公司);其余试剂均为分析纯.

1. 3给药方案20例受试者随机分成2组，每组10例，按2×2交叉试验方案设计，两期研究间的清洗期为14d.参比制剂或受试制剂，经药物清除期(2周)后交换给药.在服药前禁食12h，次晨空腹口服100mg参比制剂(R)或受试制剂(T)，统一饮水250ml，服药后2h内不喝水，不吃食物，至给药后4h给予统一低脂标准餐.

1. 4血样采集分别于给药前(0h)及给药后0. 5、1、2、3、4、6、8、10、12、24、36、48、60h各取静脉血4ml，血样采集后，于3000r/min离心10min，分离出血浆约2. 5ml，立即分装置EP管中于－20℃低温保存待测.

1. 5样品测定

1. 5. 1色谱条件色谱系统Agilent 1200型系列高效液相色谱仪(包括四元梯度泵、在线脱气机、自动进样器、柱温箱、化学工作站);色谱柱: Agilent Eclipse XDB－C18(4. 6×150mm，5μm);柱温: 35℃;流动相:乙腈－30mM乙酸铵水溶液(45∶55);流速: 0. 5ml/min;检测波长: 254nm.在此色谱条件下，西洛他唑的出峰时间约为9min，内标物地西泮的出峰时间约为16min，两个峰之间分离良好，血浆中无内源性物质干扰分离，见图1.

1. 5. 2血样预处理冷冻血浆在室温下融化，在涡旋器上涡旋约20s.吸取0. 6ml血浆，置10ml离心管中，加入内标液(22. 2μg/ml)15μl，漩涡混匀，加乙酸乙酯4ml，涡旋混合2min，3500r/min离心5min.精密吸取上层有机相于40℃水浴氮气吹干，残渣用甲醇100μl溶解，取15μl进样.记录色谱图，内标法以峰面积定量.

图1　高效液相色谱图

1. 5. 3标准曲线制备精密称取西洛他唑对照品10. 3mg置于100ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度得103μg/ml标准储备液，精密称取内标物地西泮11. 09mg置于100mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度得110. 9 μg·ml－1储备液，再用甲醇稀释得22. 2μg/ml的内标液.取健康人空白血浆10ml若干份，分别加入西洛他唑标准储备液使其浓度分别为25. 75、51. 5、103. 0、206. 0、515. 0、1030. 0、2060. 0ng/ml的标准含药血浆.按“1. 5. 2”项下操作，同时制备空白样品，进行HPLC分析，记录色谱图，计算西洛他唑峰面积As和内标峰面积Ai的比值.以比值(= As/Ai)对血药浓度C作权重回归计算，权重系数w = 1/C2，线性范围为25. 75～2060. 0 ng/ml(r = 0. 9995)，最小可定量浓度为25. 75ng/ml(S/N＞10).

1. 5. 4方法学评价配制低、中、高3种浓度(51. 5、206、1030ng/ml)的标准血样，按“1. 5. 2”项处理后进样，同时以相应浓度对照品溶液直接进样，将两组峰面积进行比较计算萃取回收率.另配制低、中、高3种浓度(51. 5、206、1030ng/ml)的标准血样，相应方法处理后进样，由标准曲线计算出浓度，将所得的浓度与已知加人浓度相比，计算相对回收率及日内、日间精密度.结果见表1.

表1　西洛他唑血浆回收率及精密度测定结果

1. 6数据处理以实测值计算Cmax、Tmax;以末端相血药浓度的对数值对时间进行回归，求得斜率Ke及T1/2，运用梯形法计算曲线下面积AUC0～t、AUC0～∞= AUC0～t+ ct/Ke.两种制剂的主要药动学参数Cmax，AUC0～t经对数转换后进行方差分析，在α=0. 05水平进行双单侧t检验，按受试制剂AUC0～t在参比制剂80%～125%，Cmax在75%～133%内判定标准，考察两制剂是否具有生物等效性.

2　结果

2. 1药动学参数20例健康志愿者单剂量口服西洛他唑参比与受试制剂100mg平均药－时曲线见图2，主要药动学参数见表2.

图2　健康受试者口服100mg西洛他唑片后平均血药浓度—时间曲线

表2　20例志愿者口服两种西洛他唑片后的药动学参数

2. 2生物等效性两种制剂间和给药次序间无显著差别，AUC0→T、AUC0→∞在不同给药周期间有显著差异，Cmax在不同给药周期间无显著差异，双单侧t检验的统计参数th 和tl两药均大于单侧t(0. 05，18)(1. 75).试验制剂和参比制剂中西洛他唑的Tmax值经Wilcoxon检验，不同制剂间无显著差异(Z =－0. 587，P = 0. 557).按照生物等效性判定标准，认为两种制剂生物等效.分析结果见表3.

表3　生物等效性分析结果

2. 3临床观察受试者空腹单剂量口服100mg西洛他唑片后，一般情况良好，整个试验过程中，无明显不良反应发生.

3　讨论

本试验建立高效液相色谱法测定人血浆中西洛他唑的浓度，并使用液–液萃取法处理血浆样品，使内源性杂质与西洛他唑很好地分离.该方法操作简便、灵敏度佳、特异性高、重现性好，适于西洛他唑药动学及生物等效性研究.

20名受试者口服西洛他唑受试制剂与参比制剂后，主要药动学参数经统计学检验无显著性差异，说明两种制剂的吸收、分布过程基本相似.经计算受试制剂的平均相对生物利用度为(101. 3±24. 6)%;经生物等效性统计分析，均表明两种不同厂家生产的西洛他唑片具有生物等效性.

参考文献

[1]吴友良．市售不同批次西洛他唑片人体药动学参数比较[J]．中国药房，2011，38(22): 3590－3592．

[2]乔海灵，胡玉容，贾琳静，等．西洛他唑片在健康人体的药代动力学和生物等效性[J]．中国临床药理学杂志，200，20(6): 426－429．

[3]史美甫，郭涛，李明，等．精编临床用药必备[M]．北京:中国科学技术出版社，2003: 772．

[4]Woo SK，Kang WK，Kwon KI．Pharmacokinetic and pharmacodyamic modeling of the antiplatelet and cardiovascular effects of cilostazol in healthy humans [J]．Clin Pharmacol Ther，2002，71(4): 246－252．

收稿日期:( 2014. 10. 20)

【文章编号】1007－8517(2015)02－0006－03

【文献标志码】A

【中图分类号】R969. 1