高效液相色谱法测定异菌脲原药的含量

周洁

摘 要：建立了利用高效液相色谱法测定异菌脲含量的方法，采用ODS不锈钢柱，以乙腈+水=60+40（V/V）为流动相，在检测波长220nm下采用外标法对异菌脲原药进行了定量测定。相对标准偏差0.18%，回收率99.65%，线性相关系数0.9997。

关键词：高效液相色谱；异菌脲；外标法

1 概述

异菌脲是一种广谱杀菌剂，为了检测异菌脲含量，文章采用高效液相色谱外标法对其含量进行了测定，建立了简便、快速、准确的测定方法，方法的精密度和准确度试验结果令人满意，可以用于异菌脲原药的含量测定。

2 实验部分

2.1 仪器

LC-1260高效液相色谱仪；平头注射器（100μL）

超声波

Auw220D电子天平（日本岛津）。

2.2 试剂

乙腈：HPLC级；纯水：纯化水；磷酸：分析纯；

异菌脲标样（含量≥98%）：异菌脲样品

2.3 高效液相色谱操作条件

流动相：乙腈+水=60+40（V/V），水用磷酸调节pH至4.0。

色谱柱：C18 250mm×4.6mm×5.0μm；

流动相流速：1.0mL/min

检测波长 220nm。

2.4 测定步骤

2.4.1 标样溶液的制备。称取异菌脲标样约50mg（称准至±0.1mg）于50ml容量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀。移取5ml于50ml容量瓶中，加流动相定容，摇匀待用。

2.4.2 试样溶液的制备。称取异菌脲样品约50mg（称准至±0.1mg）于50ml容量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀。移取5ml于50ml容量瓶中，加流动相定容，摇匀待用。

2.4.3 实验方法。在2.3所述操作条件下，待仪器基线稳定后，按标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序依次进行测定，记录色谱图并计算异菌脲的峰面积。

2.4.4 结果计算。将测得的两针试样溶液以及试样前后两标准溶液中异菌脲峰面积，按下式计算异菌脲百分含量。

式中：R1-标样溶液中，异菌脲峰面积；R2-试样溶液中，异菌脲峰面积；M1-异菌脲标样的质量，g；M2-试样的质量，g；P-异菌脲标样的质量分数，%。

3 结果与讨论

3.1 测定结果及精密度

取同一样品，依据2.4.3所述方法重复测定6次，按2.4.4所述方法计算测定结果及精密度，见表1。

经测定样品中异菌脲的平均含量为97.02%，标准偏差为0.17，变异系数为0.18%，方法精密度良好。

3.2 准确度试验

在已知含量的样品中分别加入不同质量的异菌脲配成5个已知样，定量进样，在相同的色谱操作条件下定量分析，进行回收率试验。异菌脲的回收率试验结果见表2。

3.3 流动相配比及酸度的影响

流动相的选择对样品分离的好坏起到至关重要的作用，异菌脲在乙腈中有很好的溶解度，所以选用乙腈作溶剂，为了得到最佳的分离效果，对乙腈和水按不同比例，在色谱柱上进行比较，乙腈的量较大时，样品洗脱较快，色谱基线还未走平异菌脲峰即被洗脱出来，将导致积分面积误差较大，含量不准。经多次实验，最后确定流动相的配比为乙腈+水=60+40（V/V）。

3.4 波长的选择

在220nm波长处，异菌脲有较大的吸收，且峰型对称，无其它杂质干扰，因而选定220nm为检测波长。

3.5 流动相流速的选择

依次改变流速为0.6min/ml、0.8min/ml、1.0min/ml、1.2min/ml进行流速选择，发现当流速较小时，出峰速度太慢，流速大则样品中的杂质分不开，经过反复实验最后确定流动相流速为1.0min/ml，在此流速下测定得到良好的分离效果。

3.6 线性关系曲线

称取异菌脲标准品0.0500g于50ml容量瓶中，按乙腈溶解定容后，分别移取1ml，2ml，3ml，5ml，10ml于50ml容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀。在上述的色谱条件下分别进样测定，最后校正以异菌脲的浓度为横坐标，以峰面积响应值为纵坐标，绘制线性关系曲线。

方程：y=3.195×107x+93465

相关系数：R=0.9997

4 结束语

实验表明，利用高效液相色谱法测定异菌脲原药具有操作简便、快速，测定结果稳定，准确度、精密度高，重现性好，适合异菌脲产品的检验。

参考文献

[1]张晓彤，云自厚.液相色谱检测方法[M].北京：化学工业出版社，2000.

[2]隋鹏飞.农药科学与管理[M].中国农业出版社，2012，1（33）.

[3]张延秋.农药科学与管理[M].2011，12（32）.