糖尿病肾病患者外周血单个核细胞RIP140 mRNA表达变化及意义

朱双双，王娈，马瑞欣

(青岛大学附属医院，山东青岛266003)



糖尿病肾病患者外周血单个核细胞RIP140 mRNA表达变化及意义

朱双双，王娈，马瑞欣

(青岛大学附属医院，山东青岛266003)

摘要：目的观察糖尿病肾病(DN)患者外周血单个核细胞受体相互作用蛋白140(RIP140)mRNA的表达变化并探讨其意义。方法65例2型糖尿病患者分为单纯2型糖尿病30例(糖尿病组)和DN 35例(DN组)，另选28例健康体检者为对照组，采用RT-PCR法检测各组外周血单个核细胞的RIP140、TNF-α、IL-6 mRNA。采用ELISA法测定各组血清TNF-α、IL-6。结果外周血单个核细胞中RIP140、TNF-α 、IL-6 mRNA表达及血清IL-6水平均为DN组>糖尿病组>对照组,P均<0.05；DN组和糖尿病组血清TNF-α均高于对照组(P均<0.05)，但两组之间差异无统计学意义。相关性分析显示,RIP140 mRNA表达与IL-6 mRNA(r=0.374，P=0.046)、TNF-α mRNA(r=0.505，P=0.002)、血清TNF-α水平(r=0.593，P=0.001)呈正相关。结论DN患者外周血单个核细胞RIP140 mRNA表达升高，其可能通过调控微炎过程参与DN的发生、发展。

关键词：糖尿病肾病；受体相互作用蛋白140；肿瘤坏死因子α；白细胞介素6；外周血单个核细胞

糖尿病肾病(DN)是糖尿病的常见慢性并发症之一，研究证实DN的发病过程也是一种慢性微炎症过程[1]。这种微炎症状态是机体受到各种因素刺激后，激活单核巨噬细胞系统，导致TNF-α、IL-6等炎症因子升高[1]。受体相互作用蛋白140(RIP140)是核受体辅助转录因子，能与NF-κB途径共激活，调控炎症因子的表达[2，3]。目前，RIP140在DN发生、发展过程中作用的相关报道临床少见。2014年2月～2015年1月，我们检测了DN患者外周血单个核细胞RIP140 mRNA的表达，探讨其在DN发生、发展中的作用。现报告如下。

1资料与方法

1.1临床资料纳入标准：2型糖尿病患者均符合1999年WHO糖尿病诊断标准。排除标准：合并各种感染、严重的肝脏疾病、慢性疾病、自身免疫性疾病、酮症酸中毒及影响尿蛋白排泄的因素(如肿瘤、结核、肾脏疾病、泌尿系感染、手术、外伤等)、DN分期V期。研究对象为同期于青岛大学附属医院内分泌科住院治疗的2型糖尿病患者，其中男45例、女20例，年龄27～68岁，病程(8.82±7.61)年，根据Mogensen标准[4]分为单纯2型糖尿病30例(糖尿病组)和DN 35例(DN组)。对照组为同期健康查体者28例，其中男19例、女9例，年龄26～59岁，无糖尿病、肾脏疾病、各种感染、慢性疾病等。各组均签署知情同意书，一般资料具有可比性。

1.2外周血单个核细胞中RIP140 、TNF-α、IL-6 mRNA检测采用实时荧光定量PCR法。采用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞。采用TRIzol法提取外周血单个核细胞的总RNA，按反转录试剂说明书合成cDNA。采用PCR Designer 软件设计各基因引物，引物由上海瀚宇生物科技有限公司合成。引物序列：RIP140上游引物为5′-TTCTTCTCCTCCTCCTTGCGTAG-3′，下游引物为5′-GGTGCACATCAGAGCCAAGC-3′； TNF-α上游引物为5′-TCTGGGCAGGTCTACTTTGG-3′，下游引物为5′-GGTTGAGGGTGTCTGAAGGA-3′； IL-6上游引物为5′-CAATGAGGAGACTTGCCTGG-3′，下游引物为5′-GGCATTTGTGGTTGGGTCAG-3′；以GAPDH为内参照。反应体系20 μL。反应条件：95 ℃、1 min，95 ℃、10 s，58 ℃、20 s，72℃、30 s，循环45次。mRNA相对表达量采用2-ΔΔCT计算[5]。

1.3血清TNF-α、IL-6检测采用ELISA法。试剂盒由上海巧伊生物科技公司及美国R&D公司提供，操作严格按照说明书进行。通过酶标仪检测，读取各样本450 nm处的OD值，以标准品的OD值及对应的浓度为横纵坐标轴，绘制标准曲线，按曲线方程计算各样本检测指标水平。

2结果

2.1各组外周血单个核细胞RIP140 、TNF-α、IL-6 mRNA表达比较见表1。

表1　各组外周血单个核细胞RIP140 、TNF-α、

注：与对照组相比，*P<0.01；与糖尿病组相比，#P<0.01。

2.2各组血清TNF-α、IL-6比较见表2。

表2　各组血清TNF-α、IL-6水平比较

注：与对照组相比，*P<0.01；与糖尿病组相比，#P<0.01。

2.3RIP140 mRNA表达与炎症因子的关系外周血单个核细胞RIP140 mRNA表达与IL-6 mRNA(r=0.374，P=0.046)、TNF-α mRNA(r=0.505，P=0.002)、血清TNF-α(r=0.593，P=0.001)相关，与血清IL-6(r=0.121，P=0.531)无关。

3讨论

以往研究认为，DN的发生、发展与糖脂代谢紊乱、血流动力学改变、遗传等因素有关。近年来,炎症反应在DN中的作用逐渐受到人们的重视，特别是微炎症反应与慢性肾脏病变的关系。所谓的微炎症状态是一种由非微生物引起的、低强度、慢性进展性的非显性炎症状态[6]。它与微生物感染引起的炎症不同，表现为患者血液中IL-6、TNF-α等单核吞噬系统衍生的细胞因子轻度持续增高，导致各种并发症。有学者提出，慢性炎症状态在DN早期的发展中也起到了重要作用[7]，长期的微炎症状态与DN的发展密切相关。IL-6是单核细胞自分泌的一种具有多种生物学活性的细胞因子，它可通过损伤肾小管内皮细胞,促进肾小球系膜细胞的增殖和组织纤维化。TNF-α是一种细胞毒性细胞因子，能够对肾脏造成直接损伤[8～11]。

RIP140属于核受体超家族成员，其可参与能量代谢及炎症反应。与RIP140在脂肪组织和肌肉组织中起辅助抑制物作用不同，在巨噬细胞中，其功能是辅助激活物，可激活炎症反应的信号通路，促进炎症因子的分泌[12]。研究发现，干扰巨噬细胞中RIP140基因的表达能明显抑制炎症反应的发生；RIP140对核受体NF-κB的靶基因起转录辅助激活作用；通过被NF-κB依赖的启动子募集，作为桥梁蛋白，稳定RelA 亚基和carboyl结合蛋白共激活物，形成三聚体，激活TNF-α、IL-6等炎症因子的转录，促进炎症因子的分泌[13，14]。本研究中，DN组外周血单个核细胞RIP140、TNF-α、IL-6 mRNA表达水平均高于糖尿病组，且RIP140 mRNA表达量与IL-6 mRNA、TNF-α mRNA、血清TNF-α浓度呈正相关，提示DN的发生、发展与RIP140基因表达水平相关。但本研究尚存在研究对象入组时间不同、样本量偏小等缺点，有待进一步验证。

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收稿日期：(2015-08-18)

通信作者：马瑞欣

基金项目：山东省青岛市民生科技计划项目(14-2-3-10-nsh)。

中图分类号：R587.2

文献标志码：B

文章编号：1002-266X(2015)46-0044-02

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2015.46.018