石菖蒲-远志药对配对前后水煎液中挥发性成分的含量变化分析

石菖蒲-远志药对配对前后水煎液中挥发性成分的含量变化分析

张慧，王颖，侯林

(山东中医药大学药学院，山东 济南 250014)

摘要：目的研究经典药对石菖蒲-远志配伍前后水煎液中挥发性成分的含量变化。方法煎煮法分别获得石菖蒲-远志药对和单味药材的水煎液，气相色谱法(GC)测定水煎液中α-细辛醚和β-细辛醚的含量。结果石菖蒲-远志药对中α-细辛醚的含量为0.048%，β-细辛醚的含量为0.812%；石菖蒲单煎中α-细辛醚的含量为0.049%，β-细辛醚的含量1.012%；结论石菖蒲、远志配伍后，α-细辛醚含量无明显变化，β细辛醚含量显著降低(P<0.05)。

关键词：石菖蒲；远志；配伍；α- 细辛醚；β-细辛醚

基金项目：山东中医药大学2013年SRT项目(No.2013277),本项目在山东中医药大学大学生创新创业训练平台完成

作者简介：张慧，女，研究方向：制药工程，E-mail:814793244@qq.com

通讯作者：侯林，男，研究方向：中药新药的研发研究，Tel:0531-89628597,E-mail:houlin3057@163.com

中图分类号：R284.2文献标识码：A

Analysis of volatilis components′ variation in decoction before and afterAcorusTatarinowii

Schott andPolygalatenuifoliaWilld matched-pairs

ZHANGHui，WANGYing，HOULin

(ShandongUniversityofTraditionalChineseMedicine，Jinan250014，China)

Abstract：ObjectiveTo research the volatilis components′ variation in decoction before and after Acorus Tatarinowii Schott and Polygala tenuifolia Willd matched-pairs.MethodsThe decoction of matched pair of Acorus Tatarinowii Schott and Polygala tenuifolia Willd and each herb were extracted by bulliens aqua，the contents of α-asaricin and β-asaricin in the decoction were determined by GC.ResultsThe contents of α-asaricin and β-asaricin in the decoction of matched pair of Acorus Tatarinowii Schott and Polygala tenuifolia Willd were 0.048% and 0.812%.The contents of α-asaricin and β-asaricin in the decoction of Acorus Tatarinowii Schott were 0.049% and 1.012%.ConclusionAfter the match of Acorus Tatarinowii Schott and Polygala tenuifolia Willd,the content of β-asaricin was decreased obviously(P<0.05)，but there was not obviously change of α-asaricin.

Key words:AcorusTatarinowiiSchott;PolygalatenuifoliaWilld;Matched-pairs;α-asaricin;β-asaricin

石菖蒲-远志药对出自《圣济总录》，名曰远志汤，远志通于肾交于心，石菖蒲开窍启闭宁神，二药伍用，通心窍、交心肾，益肾、健脑、聪智，开窍、启闭、宁神之力增强[1]。挥发油是石菖蒲的主要药效物质，α-细辛醚和β-细辛醚是石菖蒲挥发油的主要组成部分，分别占挥发油的6.35%和66.15%左右[2]，本研究拟采用水煎煮法分别对石菖蒲-远志药对和单味药材进行提取，GC法测定水煎液中α-细辛醚和β-细辛醚的含量，以期分析配伍对α-细辛醚和β-细辛醚含量的影响。

1试验仪器与试剂

安捷伦7890型气相色谱仪；色谱工作站GC-MS postrun Aralysisi；FA2004型电子天平(上海舜宇恒平科学仪器有限公司)；500 mL电热套(山东鄄城新华电热仪器厂)；α-细辛醚对照品(Chromadex，98.9%)；β-细辛醚对照品(Dr.Ehrenstorfer，70.9%)；远志为远志科植物远志PolygalatenuifoliaWilld的干燥根；石菖蒲为天南科植物石菖蒲AcorusTatarinowiiSchott的干燥根；乙腈为色谱纯；其他试剂均为分析纯。

2试验方法

2.1色谱条件[3,4]色谱柱：Agilent HP-5，进样口温度：250 ℃；溶剂延迟2 min；载气：氮气；流量：1 mL·min-1。程序升温条件：初始温度60 ℃，保持5 min，以15 ℃·min-1升至280 ℃，保持1 min，进样量0.5 μL，分流比5∶1。

2.2对照品溶液的制备精密称定98.9%的α-细辛醚对照品8.69 mg，置10 mL的容量瓶中得0.859 mg·mL-1的α-细辛醚对照品溶液，精密称定70.9%的β-细辛醚对照品9.73 mg，置10 mL的容量瓶中得0.690 mg·mL-1的β-细辛醚对照品溶液。

2.3供试品溶液的制备取石菖蒲和远志饮片各25 g，置于圆底烧瓶中，加10倍量的水浸泡30 min，煎煮20 min，滤过，滤渣加8倍量的水煎煮15 min，滤过，合并滤液定容至1 000 mL，既得石菖蒲远志合煎液。同法制备石菖蒲的单煎液。

2.4方法学考察线性关系考察：取α-细辛醚对照品溶液，按照“2.1”项下的色谱条件，进行测定，自动进样器分别进样0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 μL，分流比5∶1，以峰面积Y对质量X进行线性回归，得回归方程Y=5 037.9X+2.053 4，r=0.999 9(n=6)，α-细辛醚在0.001 7～0.017 μg范围内与峰面积呈良好的线性相关。取β-细辛醚对照品溶液，按照“2.1”项下的色谱条件，进行测定，自动进样器分别进样0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 μL，分流比5∶1，以峰面积Y对质量X进行线性回归，得回归方程Y=4 871.4X+1.553 4，r=0.999 5(n=6)，β-细辛醚在0.013 8～0.138 μg范围内与峰面积呈良好的线性相关。

精密度考察：分别取2种对照品溶液，按照“2.1”项下的色谱条件进行测定，平行操作5次，α-细辛醚的峰面积RSD为0.98%，β-细辛醚的峰面积RSD为1.26%，表明仪器的精密度良好。

稳定性考察：分别取两种供试品溶液，室温放置，分别在0、2、4、8、12、18、24 h时，取样，按照“2.1”项下的方法测定峰面积，α-细辛醚的峰面积RSD为1.64%，β-细辛醚的峰面积RSD为2.13%，表明供试品溶液在室温下24 h内稳定。

加样回收试验：精密量取石菖蒲供试液10 mL(5份)，分别加入α-细辛醚对照品0.2 mg，β-细辛醚对照品2.0 mg，按照“2.1”项下的色谱条件进行测定，α-细辛醚的回收率为95.22%，RSD=2.31%(n=5)，β-细辛醚的回收率为96.35%，RSD=2.07%(n=5)。

2.5样品含量测定分别取供试品溶液，按照按照“2.1”项下的色谱条件进行测定，计算石菖蒲-远志合煎和石菖蒲单煎液中的α-细辛醚和β-细辛醚含量，试验结果见图1、表1。

图1　含量测定色谱图

样品名α-细辛醚含量(%)β-细辛醚含量(%)石菖蒲单煎0.0491.012石菖蒲-远志合煎0.0480.812*

注：与石菖蒲单煎比较，*P<0.05

结果显示，石菖蒲与远志配伍后，水煎液中α-细辛醚的含量未发生显著变化，β-细辛醚含量显著下降(P<0.05)。

3讨论

石菖蒲-远志药对配伍前后的物质含量变化是研究其配伍机制的基础。目前在主要成分的变化方面进行了以下研究：房敏峰等[5]用石油醚提取药对远志-石菖蒲及其单味药材，采用GC-MS技术，在 NIST98标准质谱库中检索，确定主要成分及相对含量并进行比较；杨波等[6]分别用水蒸气蒸馏法和索氏提取法提取药对远志-石菖蒲及其单味药材中的挥发性和脂溶性成分，GC-MS分析其提取物所含成分；张文娟等[7]以远志皂苷元和α-细辛醚为指标，采用甲醇超声提取法分别对远志、石菖蒲和远志-石菖蒲药对进行提取，HPLC法测定经典药对前后的含量变化。以上研究从现代中药化学的方面考虑，采用了有机溶剂或水蒸气蒸馏的方法提取挥发油成分，而忽视了石菖蒲-远志药对是在传统的煎煮法的前提下使用的。本研究在研究其配伍机制的时候，考虑到用药传统，以水煎煮的方法分别获得单用和伍用的试验数据，可以为其配伍机制的阐述提供更合理的支撑。

研究结果显示，石菖蒲和远志配伍以后，α-细辛醚的含量未发生显著变化，β-细辛醚含量显著下降(P<0.05)。β-细辛醚是石菖蒲的主要药效成分，也是潜在毒性物质，欧盟对其使用有明确的上限规定[8]。本研究显示石菖蒲远志配伍后，其含量下降，可能与其配伍减毒相关。石菖蒲、远志的成分复杂，配伍对其他成分的影响还需要进一步研究。

参考文献：

[1]吕景山.施今墨对药[M].第3版.北京:人民军医出版社,2007:265-266.

[2]魏刚,方永奇,柯雪红,等.石菖蒲开窍醒神物质基础的药学系列研究[J].中国中医药信息杂志,2005,12(8):51-53.

[3]姬闯,王莹,侯林,等.不同提取方法制备石菖蒲挥发性成分的GC-MS比较研究[J].辽宁中医杂志,2014,41(1):136-138.

[4]崔清华,王莹,侯林,等.响应面分析法优选石菖蒲挥发油提取工艺[J].中国实验方剂学杂志,2012,18(15):62-65.

[5]房敏峰,张文娟,李云峰,等.GC-MS分析药对远志-石菖蒲中的脂溶性成分[J].中国药业,2009,18(23):3-5.

[6]杨波,刘娜,季新燕,等.药对远志-石菖蒲挥发性与脂溶性成分的GC-MS 初步研究[J].辽宁中医杂志,2012,39(8):1584-1586.

[7]张文娟,郑晓晖,房敏峰,等.经典药对远志-石菖蒲配伍前后指标成分的变化分析[J].中国药业,2009,18(15):6-7.

[8]王莹.石菖蒲抗老年痴呆药效物质提取纯化工艺及质量标准研究[D].济南:山东中医药大学,2012.