解郁方对抑郁模型小鼠脑内单胺类神经递质及单胺氧化酶含量的影响

解郁方对抑郁模型小鼠脑内单胺类神经递质及单胺氧化酶含量的影响

韩珍1，贺弋2

(1.首都医科大学附属北京佑安医院生物医学信息中心，北京 100069;2.宁夏医科大学生理学教研室，宁夏 银川 750004)

摘要：目的研究解郁方抗抑郁作用的机理。方法采用酶联免疫检测试剂盒测定小鼠脑组织中单胺类神经递质含量；分光光度计法检测小鼠脑组织中单胺氧化酶(monoamine oxidase，MAO)活性，来研究解郁方抗抑郁作用的机制。结果解郁方Ⅰ和Ⅱ(12.00、6.00 g·kg-1)组均可显著升高小鼠脑内去甲肾上腺素、5-羟色胺、多巴胺(分别为P<0.01,P<0.05)，解郁方Ⅰ和Ⅱ组可显著降低MAO活性(分别为P<0.01,P<0.05)。结论解郁方可能是通过抑制MAO活性,使突触间隙的单胺类神经递质含量升高,而起到抗抑郁作用。

关键词：抑郁症；解郁方；利血平模型；单胺类神经递质；单胺氧化酶；作用机理

基金项目：宁夏自然科学

作者简介：韩珍，女，博士研究生，研究方向：细胞生物学、肝纤维化的逆转、睡眠生理和抗抑郁研究，E-mail:yanyiziloulan@sina.com

中图分类号：R285.5文献标识码：A

The effects of Jieyufang on the content of monoamine neurotransmitter and

monoamine oxidase in the brain of depressive model mouse

HANZhen1，HEYi2

(1.CenterofBiomedicalInformation,BeijingYouanHospital，CapitalMedicalUniversity,Beijing100069,China；

2.PhysiologyDepartmentofNingxiaMedicalUniversity,Yinchuan750004,China)

Abstract：ObjectiveTo study the mechanism of antidepressant effect of Jieyufang.MethodsTo study the possible mechanism,the following methods had been carried out:the content of monoamine neurotransmitter was determined by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA);The content of monoamine oxidase in the mouse brain was determined by spectrophotometry.ResultsIn the Jieyufang groupⅠ,Ⅱ the content of 5-HT,DA and NE in the brain increased significantly (P<0.01,P<0.05);The content of MAO in the brain decreased significantly(P<0.01,P<0.05).ConclusionThe mechanism of antidepressant may be associated with decrease the activity of MAO,increase the concentration of 5-HT,NE,DA in the brain.

Key words:Depression;Jieyufang；Reserpine model mouse；Monoamine neurotransmitter；Monoamine oxidase;Mechanism of action

抑郁症(depression)是临床最常见的精神疾患之一，随着人们生活工作节奏的加快,抑郁症的发病率日趋增加。国际卫生组织预测2020年抑郁症将成为全球第2位威胁人类健康、增加经济负担的疾患[1]。目前研究认为脑内单胺递质的功能紊乱与抑郁症的多种症状有关,增加单胺递质水平是减轻抑郁症的重要途径之一[2~4]。利血平模型作为一种有效的抑郁模型，已被广泛应用于抑郁症的基础研究和各种治疗方法的筛选[5]。本实验通过利血平模型，研究解郁方对小鼠单胺类神经递质及单胺氧化酶(monoamine oxidase，MAO)含量的影响。

1材料

1.1动物健康ICR小鼠，雌、雄各半(体重18~22 g)，宁夏医学院实验动物中心提供，动物合格证号：SCXK(宁)2005-0001，在实验室常规条件下饲养，自然昼夜，所有实验在白天进行。

1.2药物及试剂解郁方(由白芍、郁金、萱草花等药物组成 )，临床用量为0.6 g·(kg·d)-1(成人体重按60 kg计算)，由宁夏医学院中药教研室鉴定，化学教研室煎制，贮存于4 ℃冰箱中备用；吗氯贝胺(批号：071105，上海信谊百路达药业有限公司)；利血平(批号：x070302，上海复旦复华药业有限公司)；5-羟色胺酶联免疫检测试剂盒(批号：20071109)；去甲肾上腺素酶联免疫检测试剂盒(批号：20071109)；多巴胺酶联免疫检测试剂盒(批号：20071109)；均为ADL公司产品；单胺氧化酶检测试剂盒(批号：20071112)；蛋白定量测定试剂盒(批号：20071114)，均由南京建成生物工程研究所提供。

1.3仪器550型酶标仪(BIO公司)。1575型洗板机(BIO公司)；DMS200型紫外可见分光光度计(美国Varian公司)；VXH-3微型旋涡混合器(BIO公司生产)；XK24-1060007型电热恒温培养箱(上海跃进医疗器械厂)；MM-1型微型混合器(BIO公司生产)；TG328A型分析天平(上海天平仪器厂)；LXJ-IIB型离心机(上海安亭科学仪器厂)；5 mL玻璃匀浆器。

2方法

2.1分组及给药小鼠按性别、体重随机分为正常对照组、模型组、阳性药物组和解郁方组。正常对照组：给予蒸馏水；模型组：利血平(0.004 g·kg-1)；阳性药物组：吗氯贝胺(0.04 g·kg-1)；解郁方组：分为Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组 (12.00、6.00、3.00 g·kg-1)。每组10只小鼠，灌胃给药，吗氯贝胺组每天2 次，其余组每天1次，连续21 d。

2.2造模参见拮抗利血平实验[6]，末次给药1 h后，腹腔注射利血平0.004 g·kg-1。

2.3标本采集实验结束后，实验动物断头处死，迅速在冰台上剥离全脑，去小脑后平均分为左右两份(左侧脑组织供测单胺递质用，右侧脑组织供测MAO用)，分别称重，按300~400 mg脑组织加入1 mL预冷的PBS溶液，玻璃匀浆器冰上匀浆，4 ℃离心3 000 rpm 15 min，取上清液，-20 ℃冷冻保存待测。

3结果

3.1小鼠脑内单胺类神经递质测定结果结果见表1。

表1　小鼠脑内单胺类神经递质测定结果 ± s)

注:与正常组比较，△△P<0.01；与模型组比较，*P<0.05,**P<0.01

3.2小鼠脑内MAO测定结果结果见表2。

珠江水运：新时代赋予新使命，新使命要求海事人有新担当。随着共建“平安西江”行动持续推进，无论是从社会治理方面，还是绿色环保、服务大湾区建设方面，都对“平安西江”行动提出了更高的要求。请问广东海事局将如何牵头，继续开展行动？

4讨论

抑郁症是一种以情感病态变化为主的精神障碍疾病，患者情绪紊乱，甚至具有自杀倾向，被中医列为“郁症”范畴，其病理机制为气机失调，内气及血，导致肝气郁结，心神失养。在治疗方面历代医家多主张治郁先治气，调气先治肝。解郁方是由白芍、郁金、萱草花等中药组成。该方具有疏肝解郁安寐的功效，白芍药直入肝经，柔肝疏肝以益其匮乏之气，自然血生而火熄；郁金行气化瘀、清心解郁、醒脑开窍；萱草花，又名金针菜，根据《本草纲目》记载，其具有“宽胸膈，安五脏，安寐解郁，清热养心”的作用。

表2　小鼠脑内MAO测定结果

注:与正常组比较，△△P<0.01；与模型组比较，*P<0.05,**P<0.01

虽然抑郁症的病理生理机制尚不清楚，但抑郁症的单胺递质学说已经得到了普遍的认同，查阅文献目前国内的中药开发的药效学实验多以该学说为理论指导。1965年， Schildkraut和Bunney提出抑郁症的中枢5-羟色胺(5-HT)和去甲肾上腺素能(NE)改变的假说，认为抑郁症发病机制可能与中枢神经突触所释放的神经递质5-HT或NE的减少有关。研究证明，5-HT耗竭剂能使抑郁症状加剧，且5-HT降低程度与症状严重程度呈正比[7]。NE参与学习、记忆、睡眠、焦虑以及奖赏系统的功能，在抑郁症病人中，以上功能均有不同程度的紊乱。躁狂症与NE的升高有关，抑郁症则与N的缺乏有关[8]。资料显示减少DA水平的药物，如利舍平可导致抑郁心境，而一些增加DA的药物如苯丙胺可产生兴奋。条件回避实验和强化训练实验表明，脑内DA含量的增加可使动物产生兴奋，增强行为动机[9]。增加大脑单胺类神经递质水平是减轻抑郁症的重要途径之一。目前研究较多的5-HT和NE重吸收抑制剂或者选择性5-HT或NE重吸收抑制剂阻断5-HT能神经末梢和NE能神经末梢对5-HT和NE的重摄取，使它们在突触间隙浓度升高,使病情得到改善[10,11]。本实验结果显示吗氯贝胺组及解郁方高、中剂量组脑组织中单胺类神经递质均显著高于模型组(分别为P<0.01,P<0.01,P<0.05)。

MAO是胺类代谢的主要酶类，一般认为MAO抑制剂具有抗抑郁、抗焦虑作用[12]。在前期的研究中已发现其具有一定的抗抑郁作用[13,14]。MAO活性升高，单胺类神经递质分解代谢加强，突触间隙单胺类神经递质的含量降低，这与人类抑郁症的“单胺递质假说”相符合。从早期的三环类抗抑郁药到近年选择性5-HT重吸收抑制剂等，都基于影响单胺类神经递质，提高突触间隙神经递质浓度[4，15]。作为传统的MAO抑制剂吗氯贝胺的抗抑郁作用主要通过抑制体内MAO，从而减少对5-HT、NE与DA的降解，提高其在突触间隙的浓度，达到治疗抑郁症的目的。本实验结果显示吗氯贝胺组及解郁方高、中剂量组脑组织MAO均显著低于模型组(分别为P<0.01、P<0.01、P<0.05)。

综上所述，解郁方高剂量组可以明显改善抑郁小鼠脑内单胺类递质含量、降低MAO活性，提示解郁方的抗抑郁作用可能与阻断单胺类递质的重摄取和降低MAO活性，增加突触间隙5-HT、DA、NE含量有关。对解郁方抗抑郁的作用机理,需要继续深入研究。

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