肝癌组织中NF-κBp65的表达变化及意义

肝癌组织中NF-κBp65的表达变化及意义

陈增银1,赵业民1,商和振1,史光军2

(1青岛市城阳区人民医院,山东青岛266300；2青岛市市立医院)

摘要：目的观察核转录因子(NF)-κBp65在肝癌患者癌组织中的表达变化，并探讨其意义。方法收集经手术切除的肝癌组织、癌旁组织及正常肝组织，采用免疫组化法检测三种组织中NF-κBp65蛋白表达情况。结果 NF-κBp65蛋白在肝癌组织、癌旁组织、正常组织中的阳性表达率分别为60.67%、22.67%、12.00%，三组间两两比较，P均<0.05。HBsAg阳性与阴性肝癌组织中NF-κBp65阳性表达率分别为64.44%、26.67%，二者比较，P<0.05。NF-κBp65蛋白阳性表达与肝癌患者病理分级、淋巴结转移有关(P均<0.05)。NF-κBp65阴性表达的肝癌患者生存时间分布好于NF-κBp65阳性表达者,但两者生存率的差异无统计学意义(P>0.05)。结论 NF-κBp65在肝癌患者癌组织中表达明显升高，且HBsAg阳性肝癌组织中的阳性表达率高于HBsAg阴性肝癌组织, NF-κBp65可能参与了肝癌的发生、发展

关键词：肝肿瘤；肝癌；核转录因子；核转录因子-κBp65

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2015.45.003

中图分类号：R735.7 文献标志码：A

基金项目：青岛市卫生局课题(2007Y004)。

作者简介：第一陈增银(1981-)，男，主治医师，硕士，主要研究方向为肝癌的临床诊治。E-mail：chzy8168@sina.com

作者简介：通信史光军(1966-)，男，主任医师，博士，主要研究方向为肝癌的临床诊治及细胞移植治疗肝癌。E-mail：sgjzp@hotmail.com

收稿日期：(2015-08-15)

Expression changes of NF-κBp65 in hepatocellular carcinoma tissues

and its clinical significance

CHENZeng-yin1, ZHAO Ye-min, SHANG He-zhen, SHI Guang-jun

(1QingdaoChengyangPeople'sHospital,Qingdao266300,China)

Abstract:ObjectiveTo detect the expression changes of nuclear transcription factor (NF)-κBp65 in the hepatocellular carcinoma (HCC) tissues and to explore its clinical significance. Methods The expression of NF-κBp65 protein was detected by immunohistochemistry in the resected HCC tissues, adjacent tissues and normal liver tissues through surgery. ResultsThe positive expression rates of NF-κBp65 protein in the HCC tissues, adjacent tissues and normal tissues were 60.67%, 22.67% and 12.00%, respectively. There were significant differences between each two groups (all P<0.05). The positive rates of NF-κBp65 in HCC tissues with positive or negative HBsAg were 64.44% and 26.67%, and the difference was statistically significant (P<0.05). The positive expression of NF-κBp65 protein was related with pathological grade and lymph node metastasis (all P<0.05). The survival time distribution of NF-κBp65 negative group was better than that of the NF-κBp65 positive group, but the difference was not significant (P>0.05). ConclusionsThe expression of NF-κBp65 was increased significantly in the carcinoma tissues of HCC patients, and the positive expression rate is high in HBV positive cancer tissues. NF-κBp65 may be involved in the occurrence and development of liver cancer.

Key words: liver neoplasms; liver carcinoma; nuclear transcription factor-κBp65

肝细胞性肝癌 (HCC)是一种病死率较高的恶性肿瘤，该病的发生、发展是多基因作用、多因素影响、多个阶段递进形成的一种生物学过程。我国乙型肝炎病毒 (HBV)感染是发生HCC的主要原因。核转录因子(NF)-κB是一种核蛋白因子，广泛存于身体的多种细胞中,其参与多个生理、病理的基因调控过程，如身体的炎症反应、免疫应答、细胞分裂、增殖及凋亡过程。该因子在肿瘤产生、增殖及转移过程中有重要作用，NF-κB活化状态可促进瘤细胞增殖、降低瘤细胞凋亡率、提升肿瘤组织毛细血管的生成并增强对瘤细胞的远处转移能力[1]。2010年1月～2013年12月，我们检测了肝癌患者癌组织中NF-κBp65表达情况,探讨其在HCC发生、增殖、转移和浸润过程中的作用。

1材料与方法

1.1材料收集2010～2013年青岛市市立医院与青岛市城阳区人民医院手术切除并经病理检查证实的肝癌组织标本150份(肝癌组)，患者男105例、女45例，年龄31～72岁、中位年龄52岁。其中血清HBsAg阳性135例，HBsAg阴性15例。包膜完整55例，无包膜95例；有淋巴结转移35例，无淋巴结转移115例；肿瘤长径<5 cm者59例，5～10 cm者61例，>10 cm者30例。分别取相应癌旁组织(距癌组织2 cm)150份(癌旁组)。取因非肿瘤因素行肝切除的肝组织25份为对照组，其中肝血管瘤旁肝组织20份，肝外伤肝组织5份。

1.2NF-κBp65蛋白表达检测采用免疫组化染色，以PBS为空白对照。兔抗人NF-κBp65单克隆抗体购自上海沪震实业有限公司,免疫组化染色SP9000 通用型SP Kit 试剂盒、即用型快捷免疫组化Maxvision检测试剂盒均购自福州迈新生物技术开发有限公司。NF-κBp65免疫组化蛋白表达以细胞质和核膜中出现棕黄色细颗粒状反应为阳性。高倍镜下计数, 随机选择高倍视野3个，分别计数高倍视野中的100 个细胞,表达阳性产物的着色强度以Handel分级标准[2]判断:阴性表达<5%,阳性表达≥5%。

1.3生存分析所有患者进行严格门诊随访或电话随访，随访日期截至2015年6月。采用Kaplan-Meier 法计算生存时间。

1.4统计学方法采用SPSS12.0统计软件。率的比较采用χ2检验。患者生存时间的比较用Log-Rank时序检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

NF-κBp65蛋白表达定位于癌旁组织、肝癌组织中的胞质, 部分胞核表达阳性。在感染HBV、未感染HBV肝癌及癌旁组织中皆可见NF-κBp65蛋白阳性表达。在135例HBsAg阳性肝癌组织中，NF-κBp65阳性表达率为64.44%，在15例HBsAg阴性肝癌组织中，NF-κBp65阳性表达率为26.67%，二者比较，P<0.05(χ2=7.452)。肝癌组、癌旁组、对照组NF-κBp65的阳性表达率分别为60.67%、22.67%、12.00%，三组比较，P<0.05(χ2=6.851)。NF-κBp65阳性表达率与肝癌的病理分级、肿瘤转移相关，高分化、扩散能力差的瘤细胞该因子表达率低，低分化、扩散能力强的瘤细胞该因子表达率高(P<0.05),NF-κBp65蛋白阳性表达与肿瘤包膜大小不相关,见表1。

表1　 肝癌患者临床病理参数与NF-κBp65蛋白

全组无失访病例。NF-κBp65阳性表达和阴性表达HCC患者的Kaplan-Meier生存曲线见图1。NF-κBp65阳性表达患者的生存曲线位于阴性表达者的曲线下方, HCC患者中NF-κBp65阳性表达者生存时间分布差于NF-κBp65阴性表达者,但两者生存率比较差异无统计学意义(P=0.222)。

图1　 不同NF-κBp65表达肝癌患者Kaplan-Meier

3讨论

细胞的分化、增殖、生长受各种基因表达的调控，而核转录因子在基因表达过程中有开关的作用。癌基因的活化、抑癌基因的丢失、细胞凋亡的受抑对肿瘤发生、发展起关键作用。NF-κB自1986年被发现以来即引起重视[3]，该因子于B淋巴细胞中首先被发现，其与免疫蛋白中增强子的结合(轻链基因中增强子的B位点)能调控该免疫蛋白κ轻链基因转录，经过凝胶电泳迁移率实验分析，提取了B淋巴细胞细胞核中能与免疫蛋白增强子(κ轻链基因的增强子的κB序列：GGGACTTTCC)结合的一种因子，我们称之为NF-κB[4]。该因子是可被诱导的NF之一，在机体生理和病理活动中有重要作用，该因子与κB序列的特异性结合，促进κ轻链基因的表达，从而促进免疫蛋白的表达。在免疫应答、炎症反应、细胞发生、发展及凋亡过程中均有核转录因子NF-κB的参与[5]。最近有学者认为，该因子的非正常活化与肿瘤的发生、发展关系密切[6]。之所以NF-κB的非正常活化与恶性肿瘤的发生、发展关系密切，是因该因子的氨基末端(约300多个氨基酸)与病毒癌基因v-Rel同源，其可抑制细胞凋亡，从而促进细胞的存活[7]。当部分因素使NF-κB的非正常活化，正常细胞的凋亡受抑制，细胞出现异常的克隆性增殖。此因子可启动cyclinD1的转录，促进细胞由G1期向S期转化，从而导致细胞增殖过度，最终出现细胞的恶性分化及转变[8]。

NF-κB家族包括p65、p50、p52等，其中以p65最为常见。本实验结果显示，NF-κBp65在肝癌组织中阳性表达率高于癌旁组织, 该因子在HBV 阳性肝癌组织中的阳性表达率高于HBV阴性肝癌组织, 推测NF-κBp65可能参与了肝癌的发生,且在NF-κBp65致癌过程中HBV感染起了不可忽视的作用。HBV基因组含有四个开放读码框(ORF)，谓之S、C、P和X，最小的ORF即为HBX。HBX与很多肝脏疾患相关，包括慢性活动性肝炎、肝硬化和HCC。有研究显示，HBX是NF-κB的激活剂，HBX启动刺激NF-κB对抗Fas介导的细胞凋亡而使肝细胞存活，而NF-κB介导细胞凋亡的功能可被表达HBX细胞抑制[9]。在肝癌组中，不同大小肿瘤组织中NF-κB的表达并无明显差别，但病理分级恶性程度越高，NF-κB阳性率越高，提示NF-κB与肿瘤的发生发展及预后密切相关。另外，NF-κBp65阳性表达HCC者的生存率低于阴性表达者, 虽经Log-Rank 时序检验该差异无统计学意义, 但HCC患者的实际生存情况还与术者的技术水平、肿瘤的发展阶段、患者的一般状况存在相关性。

总之，NF-κBp65在HCC患者癌组织中表达明显升高，且该因子在HBV 阳性肝癌组织中的阳性表达率高于HBV阴性肝癌组织,NF-κBp65可能参与了肝癌的发生、发展。

参考文献：

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