肝细胞癌病变肝脏血管铸型标本的制作及意义

·论著·

肝细胞癌病变肝脏血管铸型标本的制作及意义

张文辉,莫木琼,聂钊铭,钟觉民,罗灿峤

(中山大学附属第一医院,广州510085)

摘要：目的制作有肝细胞癌病变的肝脏血管铸型标本，为科研和教学了解肝细胞癌的生长提供形态学依据。方法将肝细胞癌患者手术切除的新鲜成人肝组织用10%醋酸生理盐水插管冲洗，彻底去除肝脏血管内的血液，分别用混合红色、蓝色和黄色油画颜料的过氯乙烯-自凝牙托粉材料填充剂依次灌注肝固有动脉、肝门静脉和肝静脉，通过聚合反应塑化成型，经插管→灌注→腐蚀→冲洗→修整→装瓶密封,制成有肝细胞癌病变的肝脏血管铸型标本进行观察。结果肝细胞癌病变的肝脏血管铸型标本能清晰显示肝门静脉、肝动脉、肝静脉、肝肿瘤及其周围血管分布。显示的血管充盈饱满，粗细、疏密合理，色泽鲜艳，立体感强，精致美观。结论 肝细胞癌病变的肝脏可制成血管铸型标本，制成的标本能直观显示肝细胞癌病变的肝脏内血管、肿瘤区域及其周围血管分布。

关键词：肝肿瘤；血管；铸型；标本

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2015.45.001

中图分类号：R735.7文献标志码：A

基金项目：国家自然科学青年

作者简介：第一 张文辉(1980-)，男，技师，主要研究方向为病理解剖技术与组织模型制作。E-mail:448596761@qq.com

作者简介：通信罗灿峤(1971-)，男，副主任技师，主要研究方向为病理解剖技术与组织模型制作。E-mail:13650832351@163.com

收稿日期：(2015-07-11)

Preparation of vascular corrosion casting mould specimen of liver

with tumor and its clinical significance

ZHANGWen-hui,MOMu-qiong,NIEZhao-ming,ZHONGJue-min,LUOCan-qiao

(TheFirstAffiliatedHospitalofSunYat-SenUniversity,Guangzhou510085,China)

Abstract:ObjectiveTo prepare the vascular corrosion casting mould specimen of liver with hepatocellular carcinoma and to provide reliable morphological evidence for clinical activity, teaching and scientific research of liver tumor. MethodsA fresh hepatocellular carcinoma specimen obtained by surgical resection was injected with 10% acetic acid saline to thoroughly remove blood within the liver. Then the hepatic artery, hepatic portal vein and hepatic vein were perfused with mixtures of perchlorovinyl resin and polymethyl methacrylate resin with red, blue and yellow coloring agent, respectively. Vascular corrosion casting mould specimen of the liver with primary tumor was obtained by intubation, perfusion, corrosion, flushing, trimming and sealing to the container. ResultsThe method could clearly showed the hepatic artery, hepatic portal vein and hepatic venous system and the distribution of blood vessels in and around the tumor area. The vessels were full filling, in reasonable size and density. Meanwhile, they had bright color, a great three-dimensional sense with delicacy. ConclusionThe specimen of hepatocellular carcinoma can be made into vascular corrosion casting mould and this method can display its blood vessel, tumor and peripheral vascular distribution.

Key words: liver neoplasms; blood vessels; casting mould; specimen

血管铸型法是通过向器官的某些血管灌注可塑材料,使其在血管腔内塑化成型,然后用强酸、强碱或自然腐蚀等方法,将器官的其他组织除去,保留器官血管的形态和分布的器官模型制作方法。血管铸型标本在显示器官内部血管方面有独到之处。肝脏血管铸型标本能清晰地显示肝门静脉、肝动脉和肝静脉的形态、位置及之间的相互关系。但目前尚无相关文献报道肝细胞癌病变肝脏血管铸型标本的制作。2013年6月～2015年6月，我们采用有肝细胞癌病变的肝脏制成血管铸型标本，了解肝内血管和肿瘤区域及肿瘤周围血管的分布情况，为临床、科研和教学提供可靠的形态学依据。

1材料与方法

1.1材料手术切除的新鲜完整成人肝脏1个，CT定出肿瘤位置，细针穿刺活检，病理学检查证实为肝细胞癌。肝脏的使用经中山大学附属第一医院伦理委员会批准，患者签署知情同意书，对其手术切除的肝组织使用和用途无异议。乙酸乙酯、邻苯二甲酸二丁酯购自天津市富宇精细化工有限公司；过氯乙烯、盐酸购自广州化学试剂一厂；自凝牙托粉、自凝牙托水购自上海新世纪牙科材料有限公司；黄色、蓝色和红色油画颜料购自上海实业马利有限公司。特制玻璃插管3支，止血钳数把，手术剪刀数把，带盖塑料桶2个，搪瓷大托盘1个，特制密封有机玻璃容器1个。

参考文献1.2肝动脉、肝门静脉及肝静脉填充剂的调配[1]方法，将20 g过氯乙烯充分溶解于100 mL乙酸乙酯中，再加入3 mL增塑剂，充分混合，加入5 mL的红色油画颜料。将上述物质均匀调和，充分溶解后备用作肝动脉填充剂。将70 g自凝牙托粉溶于70 mL的自凝牙托水中，再加入25 mL邻苯二甲酸二丁酯和5 mL的黄色油画颜料，将上述物质均匀调和，充分溶解后备用作肝门静脉填充剂。将80 g自凝牙托粉溶于80 mL自凝牙托水中，再加入25 mL邻苯二甲酸二丁酯和5 mL的蓝色油画颜料，将上述物质均匀调和，充分溶解后备用做肝静脉填充剂。

1.3肝动脉、肝门静脉及肝静脉填充剂的灌注填充剂充分搅拌均匀后立即灌注。根据不同的脏器和灌注目的不同，选择不同的灌注颜色和灌注量；灌注量的多少会影响脏器血管枝干的疏密。本实验肝动脉填充红色填充剂60 mL，肝静脉填充蓝色填充剂100 mL，肝门静脉填充黄色填充剂90 mL。①插管：将肝脏的表面和大血管腔充分冲洗干净,灌注前，彻底去除血管内的血液和水分，保证铸型效果。分离出肝门静脉、肝动脉和肝静脉开口，插上大小相适应的与管腔相配的特制玻璃管，胆道不予插管。②灌注：插管固定后，将肝脏放入注满水的塑料桶中，用纱布将肝托起，并将纱布固定于塑料桶边缘，使肝脏漂浮于水中，借助水的浮力，防止肝脏受压变形。然后用50 mL的注射器将调配好的黏稠度适宜的混有红色油画颜料的过氯乙烯-自凝牙托粉材料填充剂灌注到肝动脉。灌注时，压力要适中，保证填充剂在管道内的移动和渗透速度，隔4 h补注1次，共2次。同时用10%的中性甲醛水溶液灌注门静脉、肝静脉，直至肝脏由软到硬、由红褐色变为灰白色为止。2 d后，再用混有蓝色油画颜料的过氯乙烯-自凝牙托粉材料的填充剂灌注肝静脉，用混有黄色油画颜料的过氯乙烯-自凝牙托粉材料的填充剂灌注门静脉，灌注压力足以让肝脏表面饱满即可。灌注完毕后，将肝脏放置清水中浸泡24 h以上，让填充剂充分吸水反应凝固。牙托粉凝固需1～2 h，过氯乙烯凝固则需24 h以上。

1.4腐蚀、冲洗将灌注好的肝脏放入盛有足量25%盐酸的塑料桶中加盖腐蚀，1周后取出，自来水充分冲洗，彻底冲洗干净黏附于血管枝上的残余肝组织。冲洗时，按铸型标本血管支的粗细程度调节水压，将黏附于血管枝上的残余组织冲洗干净。如果未腐蚀彻底，可将其重新浸入或更换新的盐酸液再浸泡→腐蚀→冲洗，冲洗与腐蚀可交替进行，彻底将其他组织腐蚀冲洗干净。腐蚀和移动的过程动作要轻柔，以免将肝脏铸型标本的管腔枝扯断。腐蚀、冲洗完毕后，用肥皂水浸泡铸型标本48 h以上，然后再用自来水充分泡洗，防止铸型标本变脆和变色。

1.5修整铸型标本冲洗完毕后要修整，用酒精灯烧热镊子或用剪刀剔除从破漏部位漏出的填充剂凝块。铸型标本修整的好坏直接影响其外观和质量。

1.6封装 修整完毕后，根据铸型标本的外形和尺寸大小，制作合适的有机玻璃容器，待标本干燥固定成型后，移入有机玻璃容器中适当固定，用10%的甲醛水(蒸馏水配制)溶液注满容器，最后封口密封。

2结果

2.1肝细胞癌病变的肝脏血管铸型标本形态 制成的肝脏血管铸型标本血管充盈饱满，粗细、疏密合理，色泽鲜艳，立体感强，精致美观，可直观显示肿瘤病变的肝组织内血管分布和肝肿瘤区域及肿瘤周围血管的分布。制成的有肝细胞癌病变的肝脏血管铸型标本见图1，图中清晰可见肝静脉、门静脉、肝动脉。肝右叶下段可见2 cm×2 cm×1 cm,右叶上段2 cm×1 cm×1 cm、左叶内段1 cm×1 cm×1 cm大小红色结节，是肝肿瘤病变区域；肝右叶下段可见两粗大的肝静脉吻合支，肝静脉间在肝内存在部分细小的交通支实属正常，但本例如此粗大的交通支较罕见。

2.2肝肿瘤穿刺活检、HE染色结果 CT定位，细针穿刺活检，HE染色，400倍镜下见肝细胞弥漫水样变性，部分脂肪变性，部分肝细胞层次增多，细胞极具明显的异型性，细胞核增大、深染。病理学检查证实为肝细胞癌，见图2。

图1　有肝细胞癌病变的肝脏血管铸型标本

图2　肝肿瘤穿刺活检、HE染色结果(×400)

3讨论

近年来，由于科学技术的高速发展,出现了数字减影血管造影技术及精确的肿瘤定位技术， 组织器官血管的三维立体重建技术水平不断提高，人们对组织器官的血管分布及肿瘤的研究更加方便。但这些技术不可能完全取代组织及器官血管铸型技术，组织及器官血管铸型技术经40多年发展,已臻完善和成熟,其可更加直观地显示有肝细胞癌病变的肝脏血管和肿瘤区域及肿瘤周围的血管。为肝细胞癌病变的教学和科学研究提供可靠的、直观的形态学依据。血管铸型标本在显示器官内部血管方面有独到之处[2]。

本实验利用过氯乙烯-自凝牙托材料填充剂快速成型灌注术，经插管→灌注→腐蚀→冲洗→修整→装瓶密封制成的有肝细胞癌病变的肝脏血管铸型标本，能清晰显示肝静脉、门静脉、肝动脉、肝细胞癌病变区域。肝细胞癌病变肝脏血管铸型标本的质地、弹性、颜色、光泽度等均达到理想效果。过氯乙烯-自凝牙托材料填充剂为一次性快速成型铸型剂，配制和灌注要及时快速，保证铸型效果[3]。肝细胞癌血管分布稠密、管径细小，弯曲成团，灌注难度大，必须控制好填充剂的黏稠度和灌注量及填充时的灌注压力，保证灌注效果。铸型前，根据CT影像所示，用细针穿刺肝组织条进行病理检查，以明确肿瘤组织的性质，并测量肿瘤大小。制成有肝细胞癌病变的肝脏血管铸型标本的右叶下段可见2 cm×2 cm×1 cm,右叶上段2 cm×1 cm×1 cm、左叶内段1 cm×1 cm×1 cm大小的红色球状血管球，是肝肿瘤病变区域，与CT影像所示的结果相符。

近年来，铸型标本与教学、科研的结合越来越紧密，是分析和研究临床影像学的形态学基础，亦是介入和手术治疗的形态学依据。利用有肝细胞癌病变的肝脏制成血管铸型标本可直观显示肝肿瘤病变区域，了解肝脏肿瘤旁的血管形态、位置及其关系，为基础研究、模拟手术和手术创新提供直观的形态学依据。血管铸型标本更能显示器官内部动脉、静脉管道的走向。为介入治疗、手术切除肿瘤、血管疾病治疗奠定形态学基础和解剖学基础[4]。本实验突破制作血管铸型标本的器官必须是没有经过手术治疗、没有肿瘤包块和溃疡[5]的器官限制，填补了人体解剖学领域中经过手术治疗的、有肿瘤包块或有溃疡的病变器官血管铸型标本的空白。肝动脉和肿瘤血管非常丰富，其分支管壁厚，管腔小，不易变形，在灌注时，必须选择流动性较好、凝结较慢的挥发性过氯乙烯填充剂，减少补注的次数；肝静脉和门静脉管壁薄、管腔大，易变形，宜选用凝结快、收缩率低、一次化学反应成型的自凝牙托材料的填充剂,使肝细胞癌病变的肝脏血管铸型标本的制作取得良好效果[6]。在肝细胞癌病变的肝脏血管铸型标本的制作过程中，维持肝脏的自然形态和充分的硬固塑型和腐蚀,是制作优质肝细胞癌病变的肝脏血管铸型标本关键。

肝脏是实质性器官，血管丰富而纤细，硬固塑型慢，灌注后，应充分放置使填充剂硬固再腐蚀，避免肝脏血管铸型标本的血管由于纤细和硬固塑型不充分而柔软无力，同时,腐蚀的过程中产生的热量亦会将未反应硬化的血管枝软化或腐蚀。因此，选用氯乙烯作填充剂，使血管末梢更具柔韧性，血管末梢不易折断[7]。柔韧性差的自凝牙托材料，易造成细小血管枝折断[8]。但在自凝牙托材料中加人邻苯二甲酸二丁醋能增加其柔韧性, 使自凝牙托材料填充塑型效果更好,且一次灌注即可成型,成型后血管充盈饱满,精细美观[9]。肝细胞癌病变的肝脏血管铸型标本不仅提供三维立体构筑的血管模型，还为肝肿瘤血管分布研究、三维手术等提供技术支持，具有极高的临床应用价值[10]。本实验制成的肝细胞癌病变的肝脏血管铸型标本中有三处红色结节状小血管团，为肿瘤结节。肝细胞癌病变的肝脏血管铸型标本可全面显示肝脏肿瘤病变的位置和大小，标本颜色绚丽多彩，富立体感，血管枝干饱满，粗细、疏密合理，各血管的结构、层次，清晰可辨，能立体地、直观地观察到肝的肿瘤病变的部位和血管特征。肝细胞癌病变的肝脏血管铸型标本的血管枝是塑料材料构成，标本装瓶密封后，经多年10%甲醛水溶液浸泡保存亦能保持色彩鲜艳，不褪色，不变形。本实验制作的肝细胞癌病变的肝脏血管铸型标本制作技术适用于其他器官的血管铸型标本制作。肝细胞癌血管铸型标本为教学、科研和临床研究肝脏管道结构和肝脏解剖结构提供依据，为肝脏外科学的发展提供巨大帮助，许多复杂性肝肿瘤患者获得手术治疗的机会[11]。

综上所述，肝细胞癌病变的肝脏可制成血管铸型标本，制成的标本能直观显示肝细胞癌病变的肝脏内血管、肿瘤区域及其周围血管分布。

参考文献：

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