针刺对抑郁症睡眠障碍大鼠海马组织及血清中SOD·MDA的影响

针刺对抑郁症睡眠障碍大鼠海马组织及血清中SOD·MDA的影响

俞裕天1,袁青2,陈津岩3,谢津津1,郎建英4,麦嘉玲1,曾晓林1，汪满霞1，薛尔平1

(1.广州中医药大学，广州 510405；2.广州中医药大学针灸康复临床医学院，广州 510405；

3.广州中医药大学核医学教研室，广州 510405；4.广州中医药大学基础医学院，广州 510405)

摘要：目的观察针刺对抑郁症睡眠障碍(SDD)大鼠海马组织及血清中SOD活性和MDA含量的影响。方法正常组8只SD大鼠常规合笼饲养。32只SD大鼠接受为期21 d的孤养+CUMS法+REM睡眠剥夺法造模，其中28只完成造模,二次分组为模型组、针刺组、药物组、针药组,每组各7只。模型组仅造模不干预;针刺组取印堂、神庭、太冲(双)进行针刺;药物组给予舍曲林和阿普唑仑水溶液灌胃；针药组同时结合针刺组与药物组的两种干预方式;3组均连续干预7 d。结果SDD造模致大鼠海马组织〔(41.19±5.59)u/mL〕和血清〔(34.57±5.53)u/mL〕的SOD活性较正常组〔(60.19±8.85)、(56.20±13.68)u/mL〕明显下调(P<0.05),且致海马组织〔(5.12±1.22)nmol/mg〕和血清〔(6.22±0.96)nmol/mg〕的MDA含量较正常组〔(3.49±1.02)、(4.35±1.55)nmol/mg〕明显上调(P<0.05);针刺组海马组织〔(52.29±11.37)u/mL〕和血清〔(54.32±6.95)u/mL〕SOD活性均较模型组有明显的上调(P<0.05)，且仅针刺组的海马组织〔(3.86±0.80)nmol/mg〕MDA含量较模型组得到了明显的下调(P<0.05)；药物组仅上调了血清SOD活性〔(44.70±5.31)u/mL，P<0.05)〕；针药组上调了海马组织〔(51.95±7.58)u/mL〕和血清〔(48.23±6.70)u/mL〕的SOD活性(P<0.05)。结论SDD造模能明显加速衰老；3种干预手段均有一定的抗衰老作用，其中针刺组最优，针药组次之。

关键词：抑郁症;睡眠障碍；衰老；针刺；靳三针;大鼠

DOI:10.13463/j.cnki.jlzyy.2015.10.027

中图分类号：R246文献标志码： A

文章编号：1003-5699(2015)10-1060-04

基金项目:国家自然科学基金经费资助(81072878、81303041)。

作者简介:俞裕天(1987-)，男,博士，在站博士后，主要从事中医药及针灸防治脑病、神志病的临床与实验研究。

收稿日期:(责任编辑：赵玉芝2014-12-03)

*通信作者:袁青，电话-13902211008，电子信箱-yuanqing1005@126.com

Acupuncture on hippocampus and serum SOD activity and MDA content of SDD rats

YU Yutian1,YUAN Qing2,CHEN Jinyan3,XIE Jinjin1,LANG Jianying4,MAI Jialing1,ZENG Xiaolin1,WANG Manxia1,XUE Erping1

(1.Guangzhou University of Chinese Medicine,Guangzhou 510405,China;

2.Clinical Medical College of Acupuncture,Moxibustion and Rehabilitation,Guangzhou University of Chinese Medicine,

Guangzhou 510405,China;

3.Dept.of Nuclear Medicine,Guangzhou University of Chinese Medicine,Guangzhou 510405,China;

4.College of Basic Medicine,Guangzhou University of Chinese Medicine,Guangzhou 510405,China)

Abstract:ObjectiveObservation on acupuncture on hippocampus and serum SOD Activity and MDA content of SDD Rats.MethodsThe 8 normal Sprague Dawley rats were caged together normally.The 32 Sprague Dawley rats were underwent a 21 d solitary raised+CUMS+REM sleep deprivation method modeling.The 28 rats successfully completed the modeling,and divided into model group,acupuncture group,medicine group,acupuncture with medicine group,each group with 7 rats.Model group rats,only modeling without intervention.Acupuncture group rats were acupuncture on acupoint Yintang,Shenting and Taichong (both) each day for 20 min with a 15 s stimulation every 10 min.Medicine group rats were gavaged administration with Zoloft and Alprazolam solution.Acupuncture with medicine group combined acupuncture and medicine intervention.Three intervention groups were given intervention for 7 days.ResultsSOD activity of hippocampal tissue (41.19±5.59) u/mL and serum (34.57±5.53) /mL of DD rats was significantly lower than the normal rats (P<0.05),and hippocampus tissue and serum MDA content significantly increased than the normal (60.19±8.85,56.20±13.68) u/mL rats (P<0.05);Acupuncture group’s SOD activity of hippocampal tissue (5.12±1.22) nmol/mg and serum (6.22±0.96) nmol/mg were up regulated than the model group (3.49±1.02),(4.35±1.55) nmol/mg (P<0.05),and only acupuncture group’s MDA content in hippocampus has been significantly down regulated (P<0.05);Medicine group’s SOD (52.29±11.37) u/ml activity of serum (54.32±6.95) u/ml were down regulated (P<0.05);Acupuncture combined with medicine group’s SOD activity (44.70±5.31)u/mL,P<0.05, of hippocampal tissue (51.95±7.58) u/ml and serum (48.23±6.70) u/ml were up regulated (P<0.05).ConclusionSleep deprivation depression modeling can significantly accelerate aging;3 ways of interventions on SDD rats have some anti-aging effects.And acupuncture group has the best effect with acupuncture combined with medicine group followed.

Keywords:depression;sleep deprivation;aging;acupuncture;Jin’s three technique;rat

抑郁障碍(Major Depressive Disorder,MDD)影响着全世界约16%的人口[1]。睡眠障碍是抑郁症状群的重要组成部分，是抑郁症最常见的症状之一，以入睡困难、睡眠不深及早醒为特征。睡眠障碍可加重抑郁症的病情，延缓抑郁症的康复进程。抑郁症睡眠障碍(sleep deprivation depression,SDD)的研究已成为人们关注的焦点[2]，对SDD的动物模型[2-3]也在逐渐增多。众所周知，失眠容易引起各种疾病，加速衰老[4]，然而对于该问题的实验室研究文献仍较少见。本研究复制SDD大鼠模型并探讨针刺、药物、针药结合对其大脑海马组织及血清SOD活性和MDA的影响，报道如下。

1材料与方法

1.1动物与分组SPF级SD大鼠40只，体质量220～250 g，雄性(广州中医药大学动物实验中心提供，实验动物许可证号:SCXK(粤)2013-0034)。实验于广州中医药大学第一附属医院SPF级动物实验室进行。先用Open-Field法[5]及蔗糖偏好实验[6]进行行为学评分，选得分相近的40只大鼠，适应性喂养3 d后，随机分成正常组8只、造模组32只。

1.2抑郁症睡眠障碍(SDD)造模正常组8只常规合笼饲养，不接受任何刺激。造模组32只大鼠接受不可预见中等应激(CUMS)，结合孤养18 d，再用小平台睡眠剥夺技术[7]行快速动眼相(REM)睡眠剥夺72 h。

1.2.1孤养造模组32只均单独分笼饲养。

1.2.2CUMS法由Willner P[6]和Katz[8]方法改进而来：1)禁水17 h；2)禁食、禁水20 h；3)持续光照17 h；4)倾斜鼠笼(45°)17 h；5)4 ℃冰水游泳5 min;6)潮湿垫料21 h；7)摇晃(1次/s，15 min)；8)夹尾1 min；9)行为限制2 h；共9种刺激，每天随机采取1种，共安排18 d。

1.2.3小平台睡眠剥夺技术(platform technique)[7]于造模的第19 d开始，连续72 h快速动眼相睡眠(REM)剥夺：剥夺箱为30×30×36 cm的玻璃水箱，正中立一个直径6 cm圆形平台(高18 cm)，箱中注水，水面距平台面约1 cm。大鼠在平台上可抬头自由进食进水;如果大鼠进入REM睡眠期，大鼠会因为肌张力松弛而落入水中或节律性低头、触水，以此来达到剥夺快速动眼相(REM)睡眠的目的。造模期间持续高光通量LED灯光照射，室内温度控制在18.0～22.0 ℃，水温保持在20.0 ℃左右。

1.3二次分组与干预正常组不造模不干预。造模组再次随机分成模型组、针刺组、药物组、针药组,预计每组8只。模型组仅造模不干预(第21天后继续行CUMS法)。针刺组造模后进行针刺干预：用佳健牌针灸针(规格：0.25 mm×13 mm)针刺，根据《实验针灸学》[9]大鼠穴位定位方法取:1)印堂穴，2)神庭穴，3)配太冲穴(双)，各穴均行导气通经的手法15 s，隔10 min运针1次，每次留针20 min。 药物组给予两种药物的水溶液灌胃：按成人剂量折算出大鼠给药剂量舍曲林0.83 mg/(kg·d)+阿普唑仑0.067 mg/(kg·d)。针药组同时结合针刺组与药物组的两种干预方式。针刺组、药物组、针药组均连续干预7 d。

1.4样本处理与指标检测于28 d进行完其他测试后，对各组大鼠取样：1)血样：大鼠眼眶取血，12 000 g，离心5 min，取上清液待测；2)海马组织:取100 mg海马组织，加1 mL预冷的生理盐水研磨匀浆，成10%的匀浆液，1 2000 g，离心5 min，取上清液待测；选用凯基微量丙二醛(MDA)测定试剂盒与凯基微量丙二醛(MDA)测定试剂盒进行测定，测定方法严格按照试剂盒所附方法步骤进行。

2结果

2.1SDD造模致死CUMS法造模期间，4只造模大鼠出现较重的抑郁症状，分别于CUMS法造模的第15天和第17天死亡。完成21 d孤养+CUMS+REM睡眠剥夺造模的大鼠共28只,分为模型组、针刺组、药物组、针药组，每组各7只。

2.2各组大鼠大脑海马组织SOD活性和MDA含量如表1所示：模型组大鼠海马组织SOD活性较正常组显著下调(P<0.05)，提示SDD造模能显著降低海马组织SOD活性;针刺组和针药组海马组织SOD活性则较模型组显著上调(P<0.05)。如表1所示：模型组大鼠海马组织MDA含量较正常组明显上调(P<0.05)，提示SDD造模能显著增加海马组织MDA含量;仅针刺组大鼠MDA含量较模型组得到了明显下调(P<0.05)。

表1　海马组织SOD活性和MDA含量

注:模型组与正常组比较,#P<0.05;干预组与模型组比较,△P<0.05

2.3各组大鼠大脑血清SOD活性和MDA含量如表2所示：模型组大鼠血清SOD活性较正常组显著下调(P<0.05)，提示SDD造模能显著降低血清SOD活性；3个干预组血清SOD活性则较模型组显著上调(P<0.05)。如表2所示:模型组大鼠血清MDA含量较正常组明显上调(P<0.05)，提示SDD造模能显著增加血清MDA含量；3个干预组都未能显著下调血清MDA含量(P<0.05)。

表2　血清SOD活性和MDA含量

注：模型组与正常组比较,#P<0.05；干预组与模型组比较,△P<0.05

3讨论

3.1SDD造模加速衰老长期以来，人们都认为失眠会加速衰老,然而这方面的实验室研究仍较少见于报道。通过本次研究，我们发现，SDD造模会致大鼠海马组织和血清的SOD活性显著降低(P<0.05)，并且导致海马组织和血清的MDA含量显著上调(P<0.05);这个结果提示：抑郁症睡眠障碍降低了机体清除自由基的能力，加重了机体受自由基攻击的严重程度。因此，我们可以认为抑郁症睡眠障碍造模加速了大鼠衰老。

3.2药物治疗SDD目前临床上30%～40%的抑郁症睡眠障碍患者联合使用选择性5-羟色胺再摄取抑制剂(SSRIs)+苯二氮卓类(BDZ)药物。选择性5-羟色胺再吸收抑制剂(SSRIs)的基本药理是通过抑制神经突触细胞对神经递质血清素的再吸收，以增加细胞外可以和突触后受体结合的血清素浓度。作为目前抗抑郁的一线用药,SSRIs被广泛用于临床治疗抑郁症、焦虑症、强迫症等。传统的镇静催眠药苯二氮卓类(BDZ)可以治疗抑郁相关性失眠[10],此类药物可缩短入睡时间、减少觉醒时间和次数、增加总睡眠时间，具有安全、起效快、耐受性良好等特点[11]。联用BDZ，主要在于加强SSRIs对中枢神经的作用，以尽快改善睡眠以及全身症状，稳定患者的情绪，特别是对抑郁症状和睡眠障碍改善尤为明显。本研究药物组和针药组联合使用舍曲林(Sertraline)和阿普唑仑(Alprazolam)是SSRIs+BDZ治疗抑郁症睡眠障碍的典型代表。

3.3靳三针调神针法多年以来，靳三针疗法在治疗脑病、神志病方面取得了巨大的成就。神志病，多源于大脑功能与结构的异常。我们的前期研究证实：靳三针能有效缓解HIBD大鼠的神经细胞凋亡，起到了保护大脑的作用[12]。对于抑郁症睡眠障碍治疗，靳三针疗法有着独特的优势[13-14]。中医自古对“不寐”就有因气郁而营卫失调的论述[15],临床80%以上的失眠与焦虑、抑郁等心理因素相关。抑郁症睡眠障碍则属于神志病中“失神”的范畴，因此临床治疗中调神的作用极为重要[16]。本研究针刺组和针药组所选用的靳三针刺神穴组，由靳三针中的智三针与定神针精炼而来[17]。印堂穴是定神针的要穴，在两眉之间、鼻根部，虽说是经外奇穴，但处于督脉之上，可振奋阳气；神庭穴是智三针的要穴，是头部仅有的以“神”命名的两个穴位之一，专用于调神的要穴；配穴方面，太冲穴是足厥阴肝经的输穴和原穴，位于足背第一、二跖骨之间，能镇肝熄风、醒脑开窍、镇心安神、解郁止痛、治疗失眠、调节神经系统等，是临床运用具有高效、精简、安全的典范对穴。

3.4针药结合的加速起效和增效作用我们的同期研究结果表明:1)为期7 d的针药结合干预对抑郁症睡眠障碍大鼠起效较快，能明显改善抗抑郁药物起效慢的问题(中缝背核5-羟色胺受体mRNA表达)[18]；2)为期7 d的针刺干预对抑郁症睡眠障碍大鼠有效,且与药物干预效果相当，为期7 d的针药结合干预则有明显的增效作用(外侧缰核βCaMKⅡ蛋白表达)[19]。

3.5单纯针刺较针药结合、药物的抗衰老效果更优从实验结果可以看出：针刺组的海马组织和血清SOD活性均较模型组有显著的提升(P<0.05),且仅针刺组的海马组织MDA含量得到了明显的下调(P<0.05);药物组仅上调了血清SOD活性(P<0.05)，海马组织SOD活性、血清与海马组织MDA含量均未得到显著的调整(P<0.05);针药组上调了海马组织和血清的SOD活性(P<0.05)，海马组织和血清的MDA含量也均未被显著下调(P<0.05)。因此，从3个干预组的抗衰老效果来看，针刺组最优，针药组次之。

4结论

抑郁症睡眠障碍(SDD)造模能显著加速大鼠衰老；为期7 d对SDD大鼠的3种干预手段，均有一定的抗衰老作用，其中针刺组最优，针药组次之。

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