Akt、TGF－β1、mTOR在结直肠癌中的表达及意义

孙 琦

（抚宁县人民医院 河北抚宁 066300）

结直肠癌为常见的一类恶性肿瘤疾病，随着经济的高速发展，较多的物理或化学致癌因子产生，外加人们饮食结构的改变，使结直肠癌的患病率逐年呈上升趋势。据相关数据统计：［1］结直肠癌的患病增长速度占据所有癌症的首位，且发病时期直接影响着治疗效果。对于常规切除手术来说，若于患者癌变组织分化严重或出现淋巴转移的发病晚期进行手术，则术后5年内的存活率只有50%左右，而于患者发病早期，癌变组织分化尚未严重及淋巴未发生转移时进行手术，则术后5年内的存活率可高达90%左右，因此尽早的对该病进行确诊并及时采取治疗措施，是有效防止其恶化的途径。所以，众多研究将结直肠癌的治疗关键放于病情判定指标上。有相关研究报道：Akt、TGF－β1、mTOR参与细胞增殖及分化的调控，于是本次研究分析了Akt、TGF－β1、mTOR在结直肠癌中的表达及意义，先将具体内容进行若下报道。

1 资料和方法

1．1 一般资料：选取2013年3月至2014年4月于我院手术后诊断为结直肠癌的标本40例为癌变组，其中男性23例，女性17例，年龄26～67岁，平均年龄（42．1±13．2）岁；依照 AJCC结直肠癌TNM分期，Ⅰ＋Ⅱ期14例，Ⅲ＋Ⅳ期26例；依照分化程度：高度12例，中度18例，低度10例；依照淋巴转移：淋巴有转移18例，淋巴无转移22例。另选取20例健康者的非结直肠癌变组织为非癌变组，男性11例，女性9例，年龄25～67岁，平均年龄（41．7±12．8）岁。

纳入标准：［2］临床资料完整，手术后经经验丰富的医师鉴定确诊为结肠癌变；术后癌变组织标本完好保存，患者及家属自愿参与研究，签署自愿协议书。

排除标准：［3］排除结直肠癌家族史，及使用化疗、放疗或非甾体抗炎药物史的患者；排除并发其它部位恶性肿瘤的患者，排除临床资料不完整者及未签署自愿协议书者。

1．2 研究所用试剂与仪器：购自美国Epitomics公司Akt、TGF－β1、mTOR三者各自的兔抗人多克隆抗体；购自美国cell signaling technology公司的DAB试剂盒、S－P试剂盒、链亲和素一过氧化物酶；仪器主要为购自美国cell signaling technology公司的切片机、烘干机、电子显微镜及国产的37℃恒温孵育箱等。

1．3 免疫组化染色法操作步骤：石蜡包埋、切片、洗液清洗脱蜡；酒精浸泡、抗原还原、洗液清洗；滴加氧化酶阻断剂，洗液冲洗；滴加山羊血清工作液；滴加45μl一抗，低温放置后洗液冲洗；滴加45μl二抗，静置后洗液冲洗；滴加链亲和素一过氧化物酶，放置，洗液冲洗；滴加现配显色剂（DAB）；苏木素染色，水洗；酒精脱水封片待用；于显微镜下观察Akt、TGF－β1、mTOR三者的表达阳性率。

1．4 Akt、TGF－β1、mTOR阳性诊断方法：依照文献诊断方法：Akt、TGF－β1、mTOR三者表达蛋白染色成功的标志均为［4］：细胞液被染成颗粒状棕黄色物质。于光镜下取1000个肿瘤细胞观察，最终结果以染色面积与染色程度的乘积得分进行综合评定［5］，其中染色面积得分规定为若染色成功细胞率为0%则计分为0分；若＜25% 则计分为1分；25%～40%计分为2分；41%～80%为3分；超过80%为4分。染色程度则按照棕褐色、棕黄色、黄色、无显色分别为3分、2分、1分、0分。最终染色面积得分与染色程度得分若为0分则为阴性，以“－”表示，若为1～2分则为若阳性，以“＋”表示，若为3分则为阳性，以“＋＋”表示，若≥4分则为强阳性，以“＋＋＋”表示［6］。

1．5 统计学方法：研究中Akt、TGF－β1、mTOR阳性率及患者的年龄、性别、癌变组织病理分型等临床资料均应用SPSS21．0软件处理，其中计数数据Akt、TGF－β1、mTOR阳性率以百分号计数，组间进行卡方检验，计量数据患者年龄等以“平均数±标准差”表示，组间比较进行t检验，以p值＜0．05为差异有统计意义的判定标准。

2 结 果

2．1 两组研究对象结直肠组织中Akt、TGF－β1、mTOR表达阳性率比较：癌变组研究对象结直肠癌变组织中的Akt、TGF－β1、mTOR表达阳性率较非癌变组研究对象的健康结直肠组织明显提升，经卡方检验，p值均＜0．05，由此可见：结直肠组织癌变时Akt、TGF－β1、mTOR三者的表达阳性率明显上升，因此三者表达阳性率与结直肠癌变呈正相关，见表1。

2．2 不同病理分型间Akt、TGF－β1、mTOR表达阳性率差异比较：对于结直肠组织癌变患者，III＋IV期患者的癌变组织中Akt、TGF－β1、mTOR表达阳性率均明显高于I＋II期，经卡方检验，p值均＜0．05，由此可见癌变组织中 Akt、TGF－β1、mTOR表达阳性率与TNM分期具显著相关性；而随着癌变组织分化程度的升高，Akt、TGF－β1、mTOR表达阳性率均呈现显著上升趋势，经卡方检验，p值均＜0．05，由此可见癌变组织中Akt、TGF－β1、mTOR表达阳性率与癌变组织分化程度呈现显著正相关；有淋巴转移的结直肠癌患者的Akt、TGF－β1、mTOR表达阳性率均明显高于无淋巴转移的患者，经卡方检验，P＜0．05，由此可见：Akt、TGF－β1、mTOR表达阳性率与结直肠癌的淋巴转移呈现正相关，见表2。

表1 两组研究对象结直肠组织中Akt、TGF－β1、mTOR表达阳性率比较

表2 不同病理分型间Akt、TGF－β1、mTOR表达阳性率差异比较

2．3 Akt、TGF－β1、mTOR分别及联合用于结直肠癌诊断的性能比较：Akt、TGF－β1、mTOR三者联合诊断结直肠癌的准确度为91．7%，敏感性为90%，特异性为95%，显著高于三者单独用于诊断的准确度、敏感性及特异性，P＜0．05差异有统计意义。表明：Akt、TGF－β1、mTOR三者联合诊断结直肠癌具更高的准确度，值得临床推广应用，见表3。

表3 Akt、TGF－β1、mTOR分别及联合用于结直肠癌诊断的性能比较

3 讨 论

3．1 Akt与结直肠癌：Akt（也可缩写为PKB）为丝氨酸与苏氨酸类的蛋白激酶也叫B类蛋白类激酶［7］，包括480个左右的氨基酸残基，对机体细胞的繁殖及凋亡起着重要的调控作用。Akt主要通过磷酸活化一些细胞的关键调控因子（白介素家族、mTOR等因子）间接对细胞的生理代谢与凋亡起到调节作用，而pAkt则为Akt磷酸活化调控因子后的产物，当前众多研究将Akt及pAkt共同作为癌变组织诊断的评定指标［8］，且诊断的特异性、敏感性及准确度均较高。本次研究也证实了这一观点，研究中发现Akt在结直肠癌组织癌变组的表达阳性率明显高于非癌变组，且在各分期、分化程度、是否淋巴转移的病理分型中均表现出显著差异，由此可以得出结论：Akt与结直肠癌及病情发展有明显相关性。

3．2 TGF－β1与结直肠癌：TGF－β1为一种对癌细胞生长增殖分化周期等具有调控作用的多肽链，其主要通过与受体结合后发挥作用。研究证实：TGF－β1与相应受体结合后主要通过介导smads的信号通路以间接对细胞起到调控作用［9］，但研究尚未得出其明确的作用机制。研究报道：TGF－β1对癌变细胞具有双重调控作用，一方面在恶性肿瘤早期，：TGF－β1会对肿瘤细胞的分裂、扩散、生长等起的抑制作用，另一方面当肿瘤细胞累积到一定的范围与数量时，TGF－β1对肿瘤细胞失去调控能力，肿瘤细胞开始无限制的生长及分裂，与此同时，TGF－β1能够刺激肿瘤血管的生长，为肿瘤细胞的繁殖提供足够的养料和血液，由此我们可以推测，TGF－β1可能与癌变组织的病情发展程度相关。大量研究证实：TGF－β1蛋白的表达与结直肠癌变、前列腺癌变、膀胱癌变、乳腺癌变、宫颈癌变等多种恶性肿瘤疾病有关，癌变组织中TGF－β1的蛋白表达阳性率明显高于非癌变相应组织。本次研究证实：结直肠癌变组的TGF－β1蛋白表达阳性率明显高于对照组，且随着分期不同，分化程度不同，以及是否发生淋巴转移，TGF－β1的表达阳性率均呈现显著差异，由此可见：TGF－β1与结直肠癌及病情发展有明显相关性。

3．3 mTOR与结直肠癌：mTOR为一类蛋白质物质，对人体蛋白质的合成及细胞的生长分裂起着重要的调节作用。研究证实：mTOR通过介导细胞生长分裂时所需的养料及氧气对其发挥调控作用，除此，mTOR信号通路在mTOR调控细胞中也起着关键性的作用，mTOR信号通路通过控制mTOR的表达量间接调控细胞，这便与TGF－β1（可通过介导smads的信号通路以间接对细胞起到调控作用）调控癌变细胞生长分裂作用有了交集。另外mTOR对癌变细胞的凋亡起着显著的调控作用：mTOR能够明显降低细胞抗凋亡因子的活性，并促进促凋亡因子的表达，从而促进癌变细胞的死亡。相关研究证实：mTOR的表达与多种组织癌变具有正相关性作用，而在本次研究中证实了此结论的正确性，研究中显示：癌变组织中mTOR的蛋白表达阳性率明显高于非癌变相应组织。本次研究证实：结直肠癌变组的mTOR蛋白表达阳性率明显高于对照组，且随着分期不同，分化程度不同，以及是否发生淋巴转移，mTOR的表达阳性率均呈现显著差异，由此可见：mTOR与结直肠癌及病情发展有明显相关性。

本次研究还对Akt、TGF－β1、mTOR三者联合及单独用于结直肠癌诊断的准确度、敏感性、特异性进行了比较，证实三者联合诊断的准确度、敏感性、特异性明显高于单独检测。由此，综上所有分析：Akt、TGF－β1、mTOR三者的表达与结直肠癌发病具显著相关性，且随着TNM分期、分化程度、淋巴转移情况不同而表现显著差异，且三者联合用于结直肠癌病情程度的诊断具有较高的敏感性、特异性及准确度，因此Akt、TGF－β1、mTOR三者表达的联合检测可能对结直肠癌变的病理程度及治疗有一定的指导意义。

［1］ 李正贤，任伟耀，陈德明．85例结肠癌临床外科治疗近期疗效分析［J］．现代中西医结合杂志，2013，22（18）：2000－2002．

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［4］ 李娟，涂媛，蒋莉莉，等．Snail和Claudin－3在非小细胞肺妮中的表达及意义［J］．中国肺癌杂志．2012．15（10）：583－590．

［5］ 赵辉平，田卫斌，刘明义，等．肝卵圆细胞对肝纤维化大鼠肝组织TGF－β／Smad信号通路的影响 ［J］．中国病理生理杂志，2010，26（7）：1335－1340．

［6］ 陈文海，田逸，师彦敏，等．中西医结合治疗晚期结肠癌疗效观察［J］．现代中西医结合杂志，2014，23（11）：1172－1174．

［7］ Wang B T，Ducker G S，Barczak A J，et al．The mammalian target of rapamycin regulates cholesterol biosynthetic gene expression and exhibits a rapamycin－resistant transcriptional profile．Proc Natl Acad Sci USA，2011，108（37）：15201－15206．

［8］ 姜汉国．P13K／AKT信号传导通路与鼻咽癌侵袭转移关系的研究［D］．山东：山东大学，2010．

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