脾酪氨酸激酶在非小细胞肺癌中的表达及对血管内皮生长因子-C的影响

脾酪氨酸激酶在非小细胞肺癌中的表达及对血管内皮生长因子-C的影响

赵云鹏赵小刚丛波孙启峰彭传亮郭嘉仲贠灿华郝迎涛

(山东大学第二医院胸外科，山东济南250033)

摘要〔〕目的研究非小细胞肺癌组织中脾酪氨酸激酶(Syk)的表达及其与血管内皮生长因子-C(VEGF-C)表达的相关性。方法应用免疫组织化学染色的方法，检测山东大学第二医院手术切除的70例非小细胞肺癌组织、癌旁组织和正常肺组织中Syk、VEGF-C的表达。结果非小细胞肺癌组织中Syk、VEGF-C的表达与正常肺组织中及癌旁组织Syk、VEGF-C的表达有显著差异(P<0.05)，分别为5.7%、95.7%、100%，57.1%、10.0%、7.1%，Syk与VEGF-C的表达呈现负相关(r=-1.000，P=0.000)。结论Syk的表达在非小细胞肺癌发生、发展过程中可能下调VEGF-C的表达从而发挥抑制作用。

关键词〔〕脾酪氨酸激酶；血管内皮生长因子-C；非小细胞肺癌

中图分类号〔〕R734.2〔文献标识码〕A〔

基金项目：山东省科技攻关计划资助项目(2009GG10002030)

通讯作者：赵小刚(1969-)，男，博士，教授，博士生导师，主要从事胸外科疾病的基础及临床研究。

第一作者：赵云鹏(1987-)，男，硕士，医师，主要从事胸外科疾病的基础及临床研究。

脾酪氨酸激酶(Syk)是一种非受体酪氨酸激酶，目前被认为是一种候选抑癌基因。Coopman等〔1〕首先发现并报道了Syk在不同乳腺组织中的表达差异，这其中包括正常乳腺细胞，乳腺癌细胞等。其后Syk在胃癌〔2〕、胰腺癌〔3〕、食管癌〔4〕等恶性肿瘤中的表达及意义均有研究。在Syk与肺癌方面的研究方面，Su等〔5〕的研究表明，COX-2可能通过EP1和HER-2/Neu受体途径上调血管内皮生长因子(VEGF)-C的表达，从而通过上述途径导致肺腺癌的淋巴转移。Jennifer等〔6〕认为，Syk与HER-2/neu是一对功能相反的基因，由此推测Syk相关信号通路可能通过影响淋巴管生成因子VEGF-C/VEGFR-3通路起作用，从而抑制肿瘤淋巴管生成。本文拟探讨Syk与非小细胞肺癌的关系及其与VEGF-C表达的相关性。

1资料与方法

1.1临床资料2009年1月至2011年12月于山东大学第二医院术中切除的70例原发性非小细胞肺癌标本，标本包括肺癌组织、癌旁组织和正常肺组织，常规石蜡包埋，切片。患者在术前均未接受过任何抗肿瘤治疗。病理结果(按1981WHO标准)分别为肺腺癌(28例)，肺鳞癌(36例)及肺大细胞癌(6例)。其中男54例，女16例，年龄40～75岁。其中高分化者20例，中分化26例，低分化18例，未分化6例，PTNM分期根据《原发性肺癌诊疗规范(2011年版)》，Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期分别为13例、33例、19例、5例。全部标本均在手术中收集，用于实验的癌组织均取自于癌肿，且其中不含坏死物质，癌旁组织取材据肿瘤边缘2 cm，正常肺组织取材严格距肿瘤边缘5 cm以上，且病理结果中均未显示有癌细胞。

1.2Syk、VEGF-C蛋白表达水平测定采用SP法。兔抗人Syk多克隆抗体购自美国Santa Cruz公司，兔抗人VEGF-C多克隆抗体购自美国ZYMED公司，HistoStain免疫组化试剂盒购自上海麦约尔生物技术有限公司。用已知阳性标本作为阳性对照，PBS代替一抗作为阴性对照。由两位病理科医师分别双盲阅片，Syk及VEGF-C阳性者胞质中可见棕黄色颗粒或棕褐色颗粒，每张切片随机选取10个等倍视野(×200)，计数整张切片中着色的癌细胞或者癌旁细胞的百分数，当阳性胞质染色的细胞<5%时，定为“-”，5%～25%为“+”，25%～50%为“”，>50%为“”。

1.3统计学方法采用SPSS16.0软件进行χ2检验或Fisher确切概率检验及Spearman等级相关检验。

2结果

2.1Syk、VEGF-C在肺癌组织、癌旁组织和正常肺组织中的表达及相关性见图1。肺癌组织中Syk蛋白阳性表达率〔4例(5.7%)〕明显低于癌旁组织〔68例(95.7%)〕和正常肺组织〔70例(100%)，P<0.05〕，癌旁组织和正常肺组织Syk阳性表达率无显著性差异(P=0.248)，肺癌组织中VEGF-C蛋白阳性表达率〔40例(57.1%)〕明显高于癌旁组织〔7例(10.0%)〕和正常肺组织〔5例(7.1%)，P<0.05〕，癌旁组织和正常肺组织VEGF-C阳性表达率无显著性差异(P=0.546)。Syk与VEGF-C的表达在肺组织从正常组织、癌旁组织到肺癌组织这一过程中呈负相关(r=-1.000，P=0.000)。

正常肺组织

肺鳞癌组织

肺腺癌组织

肺大细胞癌组织

2.2 Syk阳性表达与性别、年龄、组织类型、分化程度及分期的关系不同性别、年龄的肺癌患者Syk表达无明显差异(P>0.05)。Syk在不同非小细胞肺癌组织类型、分化程度、分期的患者中的表达无差异(P>0.05)。见表1。

表1　Syk的阳性表达与不同临床病理特征的相关性〔 n(%)〕

3讨论

蛋白酪氨酸激酶是一个重要的靶分子〔7〕，能够促进一些重要蛋白质的磷酸化，在调节细胞生长，分化，和死亡等过程中有着重要作用。现已发现〔8〕，原癌基因和癌基因产物半数以上的都具有酪氨酸激酶的活性。

目前国内外关于Syk在肺癌中的研究报道较少。兰芬等〔9〕的研究结果表明：Syk在非小细胞肺癌中的表达显著低于正常肺组织，且其表达与淋巴结转移、分化程度、肿瘤大小、分期无关。段林灿等〔10〕研究结果显示肺腺癌患者血清Syk水平与淋巴结受累程度成负相关。由于有不少研究表明，在胰腺癌〔3〕、食管鳞癌〔4〕、子宫内膜癌〔11〕、宫颈鳞癌〔12〕等恶性肿瘤中不同分期的病人其Syk的表达有显著性差异，为进一步判断Syk在不同分期非小细胞肺癌中的表达是否有显著性差异，我们又将Ⅰ、Ⅱ期合并，Ⅲ、Ⅳ期合并，分析后发现其仍无统计学差异，究其原因可能是由于非小细胞肺癌中Syk表达很低，70例研究对象相对偏少，因此，我们认为其差异是否具备实际意义还需更大的样本量验证或采用其他实验手段进一步研究确认。

根据Su〔5〕等的研究、Jennifer等〔6〕的研究以及Abtahian等〔13〕关于Syk/SLP-76缺陷的胚胎鼠淋巴管可出芽形成大量的新生淋巴管道的报道，可推测Syk相关信号通路可能通过影响淋巴管生成因子VEGF-C/VEGFR-3通路起作用，在从而抑制肿瘤淋巴管生成。国内方芳等〔14〕提示乳腺癌中Syk的下调可能使VEGF-C、VEGF-D的表达增高。本实验结果显示：Syk与VEGF-C的表达在肺组织从正常到癌旁组织、肺癌组织这一过程中呈现负相关，Syk在非小细胞肺癌发生、发展过程中可能会下调VEGF-C的表达从而发挥抑制作用。

4参考文献

1Coopman PJ .Do MT,Barth M,etal.The Syk tyrosine kinase suppresses malignant growth of human breast cancer cells〔J〕.Nature,2000;406(8):742-7.

2Nakushima H,Natsugoe S,Ishigami S,etal.Clinical significance of nuclear expression of Spleen tyrosine kinase in gastric cancer〔J〕.Cancer Lett,2006;236(1):89-94.

3宋玉琴，周武元，赵文华，等.Syk蛋白在胰腺癌组织中的表达及临床意义〔J〕.中华肿瘤防治杂志，2007；14(15)：1149-51.

4臧真真，刘弘基.脾酪氨酸激酶蛋白在食管鳞癌组织中的表达及临床意义〔J〕.山东医药，2010；50(5)：59-60.

5Su JL,Shih JY,Yen NIL,etal.Gyclooxygenase-2 induces EP 1-and HER-2/Neu- dependent vascular endothelial growth factor-C up-regulation:a novel mechanism of lymphangiogenesis in lung adenocarcinoma〔J〕.Cancer Res,2004;64(2):554-64.

6Jenniferz.Syk:a new player in the field of breast cancer〔J〕.Breast Cancer Res,2001;3(1):5-7.

7单保恩，董青，王晓玲,等.兔抗体制备和在乳腺癌诊断中的应用〔J〕.细胞分子免疫学杂志，2003；19(5)：486-8.

8丁健.蛋白酪氨酸激酶——前景光明的抗肿瘤靶点〔C〕.第三届中国肿瘤学术大会教育集，2004，广州.

9兰芬，熊盛道，熊维宁，等.Sky在非小细胞肺癌中的表达及与临床病理特征的关系〔J〕.中国高等学校学术文摘-医学，2011；3(1)：17-9.

10段林灿，李高峰，黄云超，等.血清SYK水平和肺腺癌淋巴结受累的关系〔J〕.现代肿瘤医学，2009；17(8)：1465-7.

11王洪蕊，赵淑萍，苗小艳.脾酪氨酸激酶Syk在子宫内膜癌中的表达及临床意义〔J〕.中国误诊学杂志，2010；10(2)：259-61.

12薛洪燕，杜月光，施红旗，等.宫颈鳞癌中Syk、VEGF-C的表达及临床意义〔J〕.检验与临床，2011；49(14)：88-90.

13Abtahian F,Guerriero A,Scbzda E,etal.Regulation of blood and lymphatic vascular separation by signaling proteins SLF-76 and Syk〔J〕.Science,2003;299(5604):247-51.

14方芳，吴佩，洪书剑，等.乳腺癌中脾酪氨酸激酶蛋白表达对血管内皮生长因子-C、血管内皮生长因子-D及淋巴管生成的影响〔J〕.中华实验外科杂志，2010；27(8)：1088-90.

〔2013-07-04修回〕

(编辑赵慧玲/曹梦园)