马齿苋水提取物对咳嗽小鼠模型的镇咳祛痰作用

马齿苋水提取物对咳嗽小鼠模型的镇咳祛痰作用

王国玉1王浩宇1孙嘉楠1佟继铭

(承德医学院附属医院，河北承德067000)

摘要〔〕目的观察马齿苋水提取物(WEPO)的镇咳祛痰作用。方法采用超声雾化氨水引咳法诱发小鼠咳嗽，将咳嗽次数合格的小鼠随机分为WEPO 小、中、大(1.25、2.5、5.0)g/kg剂量组、生理盐水对照组、咳必清阳性对照组。以引咳潜伏期及咳嗽次数/2 min为指标，评价WEPO的镇咳作用。采用小鼠气管酚红分泌量法，以气管分泌液中酚红分泌量为指标，观察WEPO祛痰作用。结果WEPO 大、中、小剂量组引咳潜伏期分别为(38.54±5.63)s、(30.97±4.78)s、(19.58±4.32)s，均明显长于生理盐水对照组〔(15.43±3.49)s，P<0.05或P<0.01〕；咳嗽次数分别为(10.40± 2.07)、(12.88± 3.37)次/2 min，显著低于生理盐水对照组〔(20.32±6.48)次/2 min，P<0.01〕。WEPO 大、中剂量组气管酚红分泌量为(1.45±0.41)μg/ml、(1.15±0.34)μg/ml，明显高于对照组〔(0.79±0.28)ug/ml，P<0.01〕，小剂量组为(0.96±0.31)μg/ml，与生理盐水对照组比较无显著差异无(P>0.05)。结论WEPO具有明显镇咳祛痰作用。

关键词〔〕马齿苋；水提取物；镇咳；祛痰

中图分类号〔〕R285.5〔文献标识码〕A〔

基金项目：承德市科技局资助项目(20122158)

通讯作者：佟继铭(1951-)，女，教授，硕士生导师，主要从事中药药理与毒理学研究。

1承德医学院中药研究所 河北省主要研究与开发重点实验室

第一作者：王国玉(1980-)，女，硕士，主要从事呼吸病学研究。

马齿苋(Portulaca oleracea L.) 又名马齿菜、 蚂蚁菜、 长寿菜、 五行草等， 属马齿苋科一年生肉质草本植物，在许多国家作为药食两用植物使用，其性寒味酸，归肝、大肠经，有清热解毒，凉血止血，止痢的功效〔1〕，用于热毒血痢、痈肿疔疮、湿疹、丹毒、蛇虫咬伤、便血、痔血和崩漏下血 。马齿苋资源丰富， 各地均有分布，马齿苋不仅药用广泛而且历来是人们的食用植物之一。它耐干旱、耐强光、抗病虫害、易繁殖、生命力强、生长迅速〔2]，据《本草纲目》记载,马齿苋临床可用于“散血消肿，利肠滑胎，解毒通淋，治产后虚汗”。现代药理学研究表明其具有抗菌抗病毒〔3〕，兴奋子宫平滑肌松弛骨骼肌，降血糖，降血脂，抗动脉粥样硬化〔4，5〕，抗氧化抗衰老，提高机体免疫力〔6〕以及促进伤口愈合〔7〕等多种作用。但国内对其镇咳作用的研究报道较少，本实验采用传统方法对其镇咳作用进行观察，为马齿苋药食作用的进一步研究开阔思路。

1材料与方法

1.1 药品、试剂及仪器马齿苋，采自河北省承德市。经承德医学院药用植物研究室赵春颖副研究员鉴定为马齿苋科植物Portulaca oleracea L.的干燥地上部分。药材标本保存于承德医学院中药研究所药理毒理研究室。氨水(28%)，北京化工厂生产，批号：20101180；咳必清，上海全宇生物科技乡内制药有限公司生产，批号：100401。JSC-OK型双头式多功能超声雾化喷雾器，辽宁鞍山市电子医疗仪厂。

1.2 实验动物昆明种小白鼠，体重22～24 g，雌雄各半，由天津山川红实验动物科技有限公司提供，合格证号：SCXK(津)2009-0001。

1.3 马齿苋水提取物(WEPO)的制备〔8〕取50 g干燥马齿苋干燥地上部分，加入8倍量的蒸馏水浸泡3 h，煎煮30 min，过滤。滤渣加适量蒸馏水再煎煮30 min，过滤，合并滤液，减压浓缩至200 ml，得马齿苋水提取液(含生药0.25 g/ml)，临用时用蒸馏水稀释为0.25、0.125、0.063 g/ml液备用。

1.4 镇咳实验〔9]昆明种小鼠，禁食12 h，自由饮水。置于500 ml玻璃钟罩内，用超声波雾化器喷雾28% 的氨水5 s，立即取出小鼠。记录2 min内咳嗽次数。选取2 min内咳嗽次数大于10次为合格，3 d后将合格小鼠50只，随机分为大、中、小(WEPO 5.0、2.5及1.25 g/kg)剂量组(以生药计)、咳必清20 mg/kg阳性对照组及生理盐水对照组，每组10只，雌雄各半，灌胃给药，给药容积为20 ml/kg。连续给药3 d，1次/d，末次给药45 min后，按用药前同样方法喷雾氨水，记录引咳潜伏期和2 min内咳嗽次数，并计算抑制率。

1.5 祛痰实验

1.5.1 酚红标准曲线的绘制精密称取酚红1.0 mg，置于10 ml棕色容量瓶内，加2.24 mmol/L NaHCO3溶液至刻度，充分混匀，酚红浓度为100 μg/ml。再用2.24 mmol/L NaHCO3溶液依次稀释成酚红含量为10.0、5.0、2.5、1.0、0.5、0.3、0.1 μg/ml溶液。用721分光光度计于546 nm处测定吸光度(A)。以酚红浓度为X轴，A值为Y轴，绘制标准曲线。

1.5.2 祛痰实验昆明种小鼠50只，随机分为大、中、小WEPO(5.0、2.5和1.25 g/kg)剂量组(以生药计)、氯化铵15 mg/kg 阳性对照组及生理盐水对照组，连续灌胃3 d，末次给药后45 min，腹腔注射0.5% 酚红20 ml/kg，30 min处死动物，分离气管，在环状软骨下第3～4节处剪一小口，向心方向插入无尖7号针头插入气管1 mm，用棉线结扎固定于气管，用1 ml注射器吸取2.24 mmol/L NaHCO3溶液0.2 ml，缓慢注入气管内，然后轻轻吸出，反复3次。同样方法重复3次，合并冲洗液，1 500 r/min离心，紫外分光光度计于546 nm处，以5%NaHCO3溶液为空白对照，测定吸光度(A)。通过酚红标准曲线计算气管冲洗液中酚红含量〔10〕。

2结果

2.1 镇咳实验大、中剂量WEPO组小鼠咳嗽次数显著低于生理盐水对照组，与生理盐水对照组比较差异显著(P<0.05,P<0.01)，小剂量WEPO 组小鼠咳嗽次数低于生理盐水对照组，但差异无统计学意义(P>0.05)，各剂量WEPO组引咳潜伏期均明显长于生理盐水对照组(P<0.05,P<0.01)。见表 1。

2.2 祛痰实验大、中WEPO剂量组小鼠气管液中酚红分泌量显著高于生理盐水对照组〔(1.45±0.41)、(1.15±0.34)μg/ml vs (0.79±0.28)μg/ml，P<0.01〕，小剂量WEPO组酚红排泌量高于生理盐水对照组，但差异无统计学意义〔(0.96±0.31)μg/ml，P>0.05〕。

表1 　WEPO 对氨水诱发小鼠咳嗽

与生理盐水对照组比较：1)P<0.05，2)P<0.01

3讨论

咳嗽是由于呼吸道上的感受器受到炎症、异物、分泌物等刺激，由传入神经传入延髓或延髓临近的呼吸中枢的部位，中枢做出指令，传出神经作用于气管平滑肌、膈、呼吸肌等，产生咳嗽动作。咳嗽是一种保护性反射动作，但长期、剧烈咳嗽可引起多种并发症。

临床常用的镇咳药根据其作用机制可分为中枢性镇咳药和外周性镇咳药两大类，其中中枢性镇咳药，主要通过抑制延髓咳嗽中枢，同时抑制支气管腺体分泌，镇咳作用较强而且迅速。外周性镇咳药，通过抑制咳嗽反射弧中的某个环节，如感受器、传入神经或传出神经等而发挥镇咳作用。

目前现代医学治疗咳嗽，所应用镇咳药多通过抑制咳嗽反射弧中的某个环节，西药近期疗效显著，迅速缓解症状，多需与病因治疗联合应用。中医药治疗咳嗽，兼镇咳、平喘、抗菌、抗病毒等多方面作用，标本兼治，远期疗效可靠。

本研究采用雾化氨水引咳法评价其镇咳效果，其引咳机制是由于氨水刺激呼吸道上皮下能感受化学刺激的感受器诱导咳嗽反射。以咳嗽次数为指标，筛选药物的镇咳作用，具有镇咳作用的药物可明显减少动物的咳嗽次数。中枢和外周性镇咳药，对该咳嗽模型的咳嗽反射均有抑制作用。本研究结果显示，WEPO对氨水诱发的咳嗽有显著的抑制作用，减少咳嗽次数，提示其具有镇咳作用。

痰、咳、喘是呼吸系统疾病常见3种症状，痰刺激呼吸道，诱发咳嗽，久咳引起喘息。大多数祛痰药物通过增加呼吸道分泌液，覆盖于黏膜，保护黏膜免受有害刺激引起的咳嗽。分泌液增加亦可稀释痰液，促进痰排出，减轻其对呼吸道的刺激，缓解咳嗽。本研究结果显示，WEPO可促进酚红排泌量，提示WEPO有祛痰作用。

传统医学认为马齿苋具有清热解毒，利水消肿等作用。现代植物化学和药理学研究证明马齿苋含多种化学成分，如生物碱、黄酮苷、蒽醌苷等，它不但可以药用，还是难得的食用保健食品〔11，12〕。综上所述，WEPO具有较好的祛痰和镇咳作用，有效成分及机制有待进一步研究。

4参考文献

1高学敏. 中药学〔M〕.北京：中国中医药出版社，2002；150.

2胡宗进.马齿苋的开发利用〔J〕.中国野生植物资源，1996；2：278-90.

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9陆翠芳，郭美仙，柳斌，等.毛大丁草叶对小鼠镇咳祛痰作用的研究〔J〕.云南中医中药杂志，2012;33(10)：57-8.

10孙荏苒，张满云，陈勤.桔梗皂苷胶囊抗炎止咳平喘中药研究〔J〕.中药药理与临床，2010;26(4)：27-9.

11谭丽霞,周求良,尹建国,等.马齿苋的营养成分分析及其开发利用〔J〕.中国野生植物资源,2000;19(21):49-50.

12郑华艳,王戬.马齿苋的开发利用〔J〕.农产品开发,2000;5(7):22-3.

〔2013-11-07修回〕

(编辑赵慧玲/曹梦园)