乌头注射液对疼痛小鼠的镇痛作用

乌头注射液对疼痛小鼠的镇痛作用

付雯雯薛岩1刘军2江一川张虹于晓风曲绍春睢大筼

(吉林大学药学院药理教研室，吉林长春130021)

摘要〔〕目的观察乌头注射液在多种疼痛模型下的镇痛作用。方法ICR小鼠随机分为对照组，乌头注射液低、中、高剂量(0.5、1.0、2.0 mg/kg)组，阳性对照药益赛普组(14 mg/kg)；对照组和益赛普组于实验第1、4天皮下注射给药，乌头注射液各组肌肉注射给药，连续7 d。Wistar大鼠随机分为对照组，乌头注射液低、中、高剂量(0.4、0.8、1.6 mg/kg)组，阳性对照药益赛普(10 mg/kg)组；对照组和益赛普组于实验第1、4天皮下注射给药。乌头注射液各组肌肉注射给药，连续7 d。采用小鼠醋酸扭体实验、小鼠热板实验、大鼠光热致痛甩尾实验3个疼痛模型，研究乌头注射液的镇痛作用。结果乌头注射液能显著减少醋酸引起的小鼠扭体次数，提高小鼠热板法和大鼠光热致痛法痛阈。结论乌头注射液对多种疼痛模型均具有明显对抗作用。

关键词〔〕乌头注射液；镇痛

中图分类号〔〕R971.1〔文献标识码〕A〔

基金项目：吉林省科技发展计划项目(20115071)

通讯作者：睢大筼(1957-)，男，教授，博士生导师，主要从事心血管与肿瘤药理学研究。

1吉林大学第一医院烧伤外科2吉林大学第二医院骨科医院

第一作者：付雯雯(1986-)，女，在读博士生，主要从事心血管与肿瘤药理研究。

乌头注射液是从生川乌、生草乌中提取出的总生物碱制剂，临床主要用于治疗胃癌、肝癌等晚期癌症疼痛。本研究选用热板法〔1〕、甩尾法〔2〕和扭体法3种刺激的痛模型，观察乌头注射液的镇痛作用，为治疗类风湿关节炎提供实验依据。

1材料和方法

1.1动物ICR小鼠，雌雄兼用，体重18～22 g，合格证号：SCXK-(吉)2007-0003，由吉林大学基础医学院动物实验中心供给；Wistar雄性大鼠，体重180～200 g，合格证号：SCXK-(吉)2007-0003，由吉林大学基础医学院动物实验中心供供给。动物于专用实验室内分笼饲养，自由摄食饮水。

1.2实验药品及仪器乌头注射液，0.62 mg/ml，由上海北杰集团关东药业有限公司提供，批号：20110401，实验时以生理盐水配制成所需浓度；注射用重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白(益赛普)，由上海中信国健药业有限公司生产，批号：20110411，实验时以注射用水配制成所需浓度；乙酸，由北京化工厂生产，批号：20100804；YLS-6A智能热板仪，由成都泰盟科技有限公司生产；SW-200光热尾痛测试仪，由成都泰盟科技有限公司生产。

1.3实验方法

1.3.1小鼠热板实验ICR雌性小鼠，18～22 g(初筛，痛阈<30 s为合格小鼠)。筛出合格的小鼠60只，用智能热板仪测量各鼠药前痛阈值(测两次取其平均值，两次测量前后间隔>5 min)。对照组和乌头注射液各组小鼠肌肉注射给药，1次/d，连续7 d。益赛普组小鼠于实验第1、4天皮下注射给药。实验第7天于药后0.5、1、1.5、2、3、4、5、6 h时测定各鼠痛阈值〔3〕。若痛阈值超过60 s，停止测试按60 s计。并按照下式计算出痛阈提高百分率，比较组间差异。痛阈提高百分率(%)=(用药后平均痛阈值-用药前平均痛阈值)/用药前平均痛阈值×100%。

1.3.2大鼠光热致痛甩尾实验Wistar雄性大鼠，130～180 g(进行初筛，5 s<甩尾时间<30 s为合格大鼠)。取合格的大鼠60只，根据体重随机将其分为空白对照组(注射用水)，乌头注射液低、中、高剂量(0.4、0.8、1.6 mg/kg)组，益赛普(10 mg/kg)组，每组12只。用光热尾痛测试仪测量大鼠的甩尾时间，测两次取其平均值作为药前痛阈。空白对照组和乌头注射液各组大鼠肌肉注射给药，1次/d，连续7 d。益赛普组大鼠于实验第1、4天皮下注射给药。于末次药后1、2、3、4、5、6 h分别测定各大鼠的痛阈〔3〕，并按照下式计算反应抑制百分率，比较各组之间的差异。反应抑制百分率(%)=(药后痛阈-药前痛阈)/中断照射时间×100%。

1.3.3小鼠醋酸扭体实验ICR雄性小鼠60只，18～22 g，根据体重将其随机分为对照组(注射用水)，乌头注射液低、中、高剂量(0.5、1.0、2.0 mg/kg)组，阳性对照药益赛普组(14 mg/kg)，每组12只。对照组和乌头注射液各组小鼠肌肉注射给药，1次/d，连续7 d。阳性药对照组小鼠于实验第1、4天皮下注射给药。实验第7天，每只小鼠腹腔注射1%冰醋酸0.1 ml/10 g致痛，记录开始出现扭体的时间及15 min内扭体次数〔3〕，比较组间差异。整个实验温度应控于(20±1)℃。

1.4统计学方法采用SPSS12.0软件进行t检验。

2结果

2.1乌头注射液对小鼠热板致痛的影响与对照组相比，乌头注射液1.0 mg/kg可显著提高药后4 h小鼠热板法痛阈(P<0.05)；乌头注射液2.0 mg/kg可显著提高药后1、1.5、2、3、4、5 h小鼠热板法痛阈(P<0.05或P<0.01)；乌头注射液0.5 mg/kg对小鼠热板法痛阈无明显影响(P>0.05)。见表1。

2.2乌头注射液对大鼠光热致痛的影响与空白对照组相比，乌头注射液0.8 mg/kg可显著提高药后1、2、3 h大鼠光热致痛法痛阈(P<0.05)；乌头注射液1.6 mg/kg可显著提高药后1、2、3、4 h大鼠光热致痛法痛阈(P<0.05)；乌头注射液0.4 mg/kg对光热致痛法痛阈无明显影响(P>0.05)。见表2。

2.3乌头注射液对醋酸致小鼠扭体的影响与对照组相比，乌头注射液1.0、2.0 mg/kg均可显著抑制小鼠扭体次数(P<0.05)；乌头注射液0.5 mg/kg对小鼠扭体次数无明显的影响(P>0.05)。见表3。

表1　乌头注射液对小鼠热板致痛的影响 ± s， n=12，%)

与对照组比较：1)P<0.05；2)P<0.01；下表同

表2　乌头注射液对大鼠光热致痛的影响 ± s， n=12，%)

表3　乌头注射液对醋酸致小鼠扭体的影响 ± s， n=12)

3讨论

疼痛是由实质性或潜在性组织损伤所引起的不愉快感觉〔4〕，同时也是一种预警机制，防止机体遭压迫或进一步损伤，是当今困扰人类健康的严重问题之一〔5〕。疼痛研究已经成为当前研究的热点问题。常见的动物疼痛模型包括物理刺激致痛模型和化学刺激致痛模型。

类风湿关节炎患者多表现为明显的关节肿痛。一般认为在伤害性刺激作用下，组织释放各种致痛因子，如氢离子、钾离子、组胺等，刺激痛受体，在游离神经末梢产生痛觉传入冲动，冲动传至高级中枢引起疼痛。实验中采用的热板法引起的舔足反应和醋酸致小鼠扭体反应在较高级中枢完成，而甩尾法引起的甩尾反应主要由脊髓参与完成。利用不同模型可以了解乌头注射液作用部位，所选用的动物模型操作简便，便于观察，效果比较稳定。结果表明乌头注射液能显著减少醋酸引起的小鼠扭体次数，提高小鼠热板法和大鼠光热致痛法痛阈，提示乌头注射液有较好的镇痛作用。

4参考文献

1Bomholt SF,Mikkelsen JD,Blackburn-Munro G.Antinociceptive effects of the antidepressants amitriptyline,duloxetine,mirtazapine and citalopram in animal models of acute,persistent and neuropathic pain〔J〕.Neuropharmacology,2005；48(2): 252-63.

2辛晓明,王大伟,王远丽,等.杜仲多糖镇痛作用研究〔J〕.现代中西医结合杂志,2009；18(5): 487-8.

3李仪奎.中药药理实验方法学〔M〕.上海:上海科学技术出版社,2006：241-7.

4周秋雯,徐建国.慢性疼痛动物模型的研究进展〔J〕.医学研究生学报,2008；21(6): 638-42.

5王晓玲,乐健,洪战英,等.中药镇痛实验的研究进展〔J〕.药学服务与研究,2011；11(3): 213-7.

〔2015-06-20修回〕

(编辑曲莉)