三硫化二砷对荷急性早幼粒细胞白血病腹水瘤小鼠生存的影响

陈胜梅，刘延方,，陆道培，江　滨

(1.郑州大学第一附属医院血液科，河南 郑州 450052；2.北京大学人民医院血液病研究所，北京 100044)

三硫化二砷对荷急性早幼粒细胞白血病腹水瘤小鼠生存的影响

陈胜梅1，刘延方1,2，陆道培2，江滨2

(1.郑州大学第一附属医院血液科，河南 郑州 450052；2.北京大学人民医院血液病研究所，北京 100044)

[摘要]目的观察三硫化二砷对荷急性早幼粒细胞白血病(APL)腹水瘤小鼠生存的影响。方法建立SCID小鼠NB4细胞腹水瘤模型。分组如下：治疗组给予三硫化二砷悬液腹腔内注射，隔天1次，共3次；对照组给予质量分数0.5%甲基纤维素溶液(阴性对照)或阿霉素(阳性对照)。结果SCID小鼠接种NB4细胞后能够形成腹水且死于APL腹水瘤。三硫化二砷100 μg·g-1组生存期为(24.05±3.54)d，比阴性对照组的(16.27±2.34) d显著延长(P<0.05)。结论三硫化二砷能够在SCID小鼠体内抑制NB4细胞增殖，延长荷APL腹水瘤小鼠的生存期。

[关键词]三硫化二砷；SCID小鼠；急性早幼粒细胞白血病

leukemia (APL) ascites.MethodsThe animal model of SCID mice with NB4 cell ascites was established.The mice were divided into groups: the mice in the therapeutic group were intraperitoneally administrated with arsenic trisulfide suspension every other day for 3 doses; the mice in the control group were intraperitoneally administrated with 0.5% methylcellulosis as negative control or adriamycine as positive control.ResultsThe SCID mice grew ascites after inoculated with NB4 cells and died of APL ascites.The survival times of treated mice in the 100 μg·g-1arsenic trisulfide group were(24.05±3.54)days and were(16.27±2.34)days in the negative control group (P<0.05).ConclusionArsenic trisulfide inhibite the proliferation of NB4 cells in vivo,and increase the survival of mice bearing APL ascites.

三硫化二砷是中药雌黄的主要成分，《神农本草经》(公元前l世纪)记载的46种矿物药中就有了雌黄的记载。三硫化二砷在治疗急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia，APL)中的临床应用，也越来越受到重视[1-2]。为了进一步提供三硫化二砷治疗APL的实验基础，本研究以SCID小鼠为工具，以APL腹水瘤为模型，观察三硫化二砷对荷APL腹水瘤的SCID小鼠生存的影响，报道如下。

1材料与方法

1.1实验试剂及器材三硫化二砷：美国Acros公司产品，纯度99.99%，溶于质量分数0.5%甲基纤维素溶液(美国Sigma公司)，-4 ℃保存，备用。腹水NB4(A-NB4)细胞由上海交通大学附属瑞金医院陈竺教授惠赠，于SCID小鼠腹腔内传代维持[3]。

1.2动物清洁级SCID小鼠65只，4周龄，雌、雄各半，体质量15～20 g，购自北京医科大学实验动物中心；饲养于该中心SPF实验室。

1.3荷APL腹水瘤模型的建立及药物处理取腹水NB4细胞，用RPMI-1640培养基稀释，调整细胞浓度至5×107mL-1，每只小鼠接种1×107个NB4细胞，24 h后进行实验治疗。65只SCID小鼠分为3组：治疗组32例给予三硫化二砷悬液(25 μg·g-18例，50 μg·g-18例，100 μg·g-116例)腹腔内注射，隔天1次，共3次；阴性对照组17例给予质量分数0.5%甲基纤维素溶液，阳性对照组16例给予0.05 mg·mL-1阿霉素(深圳万乐药业有限公司)腹腔内注射(0.2 mL/次)。试验重复2次。

1.4统计学处理采用SPSS 17.0进行数据处理，计量资料采用 表示，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验，检验水准α=0.05。

2结果

2.1荷APL腹水瘤模型的建立以不同数量的腹水NB4细胞接种于SCID小鼠腹腔内，观察动物的存活时间。当接种的腹水NB4细胞数为1×106/只小鼠时，生存期是25～26(25.8±0.5) d，逐渐增加接种的腹水NB4细胞数时，生存期逐渐缩短；细胞数达1×107/只小鼠时，生存期缩短到14～21 (17.7±2.1) d。

2.2三硫化二砷对荷APL腹水瘤小鼠生存的影响3个治疗组小鼠体质量随剂量增加而略有下降，与阴性对照组和阳性对照组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。第1次动物实验中，当三硫化二砷用量在100 μg·g-1时，动物生存期明显延长(P<0.05)。鉴于小剂量三硫化二砷对SCID小鼠生存期的延长无显著影响(P>0.05)，第2次实验略之。综合2次动物实验结果：阴性对照组(n=17)生存期为(16.13±2.33)d，阳性对照组(n=16)生存期为(31.53±5.60)d；3个治疗组生存期分别是：25 μg·g-1组(n=8)(17.88±3.98)d；50 μg·g-1组(n=8)(18.82±3.79)d；100 μg·g-1组(n=16)(24.05±3.54)d。三硫化二砷100 μg·g-1组(μg/g)生存期比阴性对照组显著延长(P<0.05)。所有实验动物濒死前均表现为腹部膨隆、四肢消瘦、呼吸困难，最终死于APL细胞增殖产生的腹水所引起的呼吸循环衰竭。见表1、2。

3讨论

雌黄作为最古老的矿物中药，在祖国的传统医学中应用已有数千年的历史，其主要成分三硫化二砷在治疗恶性血液病中的作用日益受到重视[1-2,4-5]。为探讨三硫化二砷在治疗人类APL中的作用，本研究以荷APL腹水瘤SCID小鼠为模型，观察三硫化二砷对动物生存的影响，与阴性对照组比较，各治疗组小鼠的体质量增加相对缓慢，但差异无统计学意义(P均>0.05)，可能与实验动物数目较少有关。以上结果提示，各治疗组小鼠体内APL细胞株NB4细胞增殖被抑制，产生的腹水相应减少。本文结果还显示，一定剂量的三氧化二砷治疗的动物的生存期较阴性对照组显著延长(P<0.05)。这些结果表明，三硫化二砷治疗能够通过抑制APL细胞株NB4细胞增殖，进而延长动物生存期，为临床应用三硫化二砷治疗人类APL提供了重要的实验室依据。

表1　各组治疗前后小鼠体质量变化的比较　g

注：各组体质量变化差异无统计学意义,P均>0.05

表2　各组生存期比较

注：阴性对照组与三硫化二砷25 μg·g-1组、三硫化二砷50 μg·g-1组比较差异均无统计学意义,P均>0.05；与三硫化二砷100 μg·g-1组和阳性对照组比较有统计学意义,P均<0.05

荷APL腹水瘤SCID小鼠虽经治疗，包括三硫化二砷和阿霉素，都不能使小鼠完全根除APL腹水瘤，动物最终仍死于接种的APL腹水NB4细胞增殖；推测这可能与治疗时SCID小鼠肿瘤细胞负荷过高有关。

总之，三硫化二砷在SCID小鼠体内对移植性NB4细胞腹水瘤有治疗作用。这些结果为临床上应用含三硫化二砷制剂治疗APL患者提供了动物实验依据，为临床治疗APL提供了一种新的选择。

参考文献：

[1]陆道培,江滨,邱镜滢.三硫化二砷治疗急性早幼粒细胞白血病首例报告[J].北京医科大学学报,2000,32(03): 256-257.

[2]郝红缨,滕智平,陆道培.PML-RARα及RARα融合蛋白在三硫化二砷诱导的NB4细胞凋亡中的作用研究[J].中国实验血液学杂志,2002,10(02):108-111.

[3]Zhang SY,Zhu J,Chen GQ,et al.Establishment of a human acute promyelocytic leukemia-ascites model in SCID mice[J].Blood,1996,87(8):3404-3409.

[4]邵泽叶,唐萌,陈宝安,等. 纳米三硫化二砷对人骨髓增生异常综合征细胞株MUTZ-1作用的实验研究[J].中华血液学杂志,2009,30(01):29-32.

[5]何志洁,蔡伟波,朱杏民,等.三硫化二砷诱导HL-60细胞凋亡与坏死的实验研究[J].癌症,2001,20(08): 820-822.

DOI:10.3969/j.issn.1673-5412.2015.05.005

[中图分类号]R733.71;R730.23

[文献标识码]A

[文章编号]1673-5412(2015)05-0383-03

作者简介：陈胜梅(1978-),女,硕士,主治医师,主要从事血液病基础与临床研究。E-mail:15349860qq.com

通信作者：刘延方(1962-),男,博士,主任医师,硕士生导师,主要从事血液病基础与临床研究。E-mail:liuyf371@163.com

(收稿日期：2015-05-08)

Effect of Arsenic Trisulfide on Survival of
Mice Bearing Acute Promyelocytic Leukemia Ascites

Chen Shengmei1,Liu Yanfang1,2,Lu Daopei2,Jiang Bin2

(1.DepartmentofHematology,theFirstAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversity,Zhengzhou450052,China;

2.InstituteofHematology,thePeople’sHospitalofPekingUniversity,Beijing100044,China)

[Abstract]ObjectiveTo observe the effects of arsenic trisulfide on survival of mice bearing acute promyelocytic

[Key words]arsenic trisulfide; SCID mice; acute promyelocytic leukemia