大肠杆菌检验方法的探究与分析

彭建琼629200四川省射洪县人民医院

大肠杆菌检验方法的探究与分析

彭建琼
629200四川省射洪县人民医院

目的：探讨不同检验方法对大肠杆菌检出率的影响。方法：分别采用一次离心法、二次离心法、离心-滤膜法、离心-双重滤膜法检测模型药物呋喃唑酮片的大肠杆菌，观察检出率。结果：一次离心法：胆盐乳糖增菌液略显浑浊，无气体产生，伊红美蓝琼脂培养基无菌落长出；二次离心法和离心-滤膜法：胆盐乳糖增菌液澄清且无气体产生，伊红美蓝琼脂培养基无菌落长出；离心-双重滤膜法：胆盐乳糖增菌液浑浊且有气体产生，伊红美蓝琼脂培养基可观察到明显的菌落。结论：与其他方法相比，离心-双重滤膜法对大肠杆菌的检出率较高，同时操作更加简便。

大肠杆菌；检验方法；呋喃唑酮片

大肠菌群是一种革兰阴性菌，属于兼具需氧和厌氧性的无芽孢杆菌，能够发酵乳糖并产酸产气。这种菌主要存在于人类及其他恒温动物的粪便中，因此需要通过检测大肠杆菌情况来判断食物、药品等是否受到粪便的污染，是口服药物的常规必须检测的项目之一。一次离心法、二次离心法、离心-滤膜法以及离心-双重滤膜法都是常用的大肠杆菌检验方法，检测灵敏度有所不同。呋喃唑酮片是一种常用于治疗由大肠杆菌、痢疾杆菌引发的肠炎及菌痢等疾病的抗菌药[1]。由于其的抗菌特性，常规检验方法难以检测出呋喃唑酮片中的大肠杆菌。因此本文以呋喃唑酮片为模型药物，考察一次离心法、二次离心法、离心-滤膜法以及离心-双重滤膜法四种不同的大肠杆菌检验方法检测大肠杆菌的情况，现报告如下。

资料与方法

选取规格100mg/片的呋喃唑酮片；采用两种不同规格的混合纤维素酯微孔滤膜，孔径分别为1.20μm和0.45μ m；选用中国药品生物制品检定所提供的含伊红美蓝（eosinmethyleneblue，EMB）琼脂的大肠杆菌生化反应培养基，以及胆盐乳糖增菌液；大肠杆菌使用CMCC（B）44102。

方法：①供试液的制备：取呋喃唑酮片与大肠杆菌CMCC（B）适量，制成含大肠杆菌的具有呋喃唑酮成分的供试液，待用。②一次离心法：将所制得的含大肠杆菌的具有呋喃唑酮成分的供试液离心（3000/min，30min），取上清液适量，用于大肠杆菌的检验。将所取上清液加入胆盐乳糖增菌液中，增菌48h后，观察增菌液是否出现浑浊和产气现象；另取上清液，接种于伊红美蓝琼脂培养基上，进行平板分离检验，培养两周后，观察培养基上大肠杆菌菌落生长情况。③二次离心法：将所制得的含大肠杆菌的具有呋喃唑酮成分的供试液离心（3000/min，30min），充分取上清液，再次离心（3000/min，30min），取上清液适量，用于检验。将所取上清液加入胆盐乳糖增菌液中，增菌48h，观察增菌液是否出现浑浊和产气现象；另取上清液适量，接种于伊红美蓝琼脂培养基上[2]，进行平板分离检验，培养两周后，观察培养基上大肠杆菌菌落生长情况。④离心-滤膜法：取所制得的含大肠杆菌的具有呋喃唑酮成分的供试液适量，离心（3000/min，30min），取上清液，经0.45μm混合纤维素酯微孔滤膜过滤后，将所得溶液用于大肠杆菌的检验。取所得溶液加入胆盐乳糖增菌液中，增菌48h后，观察增菌液是否出现浑浊和产气现象；另取部分溶液接种于伊红美蓝琼脂培养基上，进行平板分离检验，培养两周后，观察培养基上大肠杆菌菌落生长情况。⑤离心-双重滤膜法：取所制得的含大肠杆菌的具有呋喃唑酮成分的供试液适量，离心（3000/min，30min），取上清液，分别依次经3.0μm和0.45μm孔径的混合纤维素酯微孔滤膜过滤后，将所得溶液用于大肠杆菌的检验。取适量溶液加入胆盐乳糖增菌液中，增菌48h后，观察增菌液是否出现浑浊和产气现象；另取部分溶液接种于伊红美蓝琼脂培养基上，进行平板分离检验，培养2周后，观察培养基上大肠杆菌菌落生长情况。

观察指标：根据胆盐乳糖增菌液试验和伊红美蓝琼脂培养基试验判断大肠杆菌的检测。胆盐乳糖增菌液试验中，若增菌48h后增菌液出现浑浊（+）和产气现象（+），则认为检出大肠杆菌（+/+），否则为未检出（+/-、-/+或-/-）；伊红美蓝琼脂培养基试验中，培养2周后，若培养基上产生有金属光泽的紫色菌落，则认为有大肠杆菌检出（+），否则为未检出（-）。

统计学分析：采用SPSS18.0统计学软件进行统计学处理，若P＜0.05则认为组间差异有统计学意义。

结果

一次离心法：胆盐乳糖增菌液略显浑浊，无气体产生，伊红美蓝琼脂培养基无菌落长出，认为未检出大肠杆菌；二次离心法：胆盐乳糖增菌液澄清且无气体产生，伊红美蓝琼脂培养基无菌落长出；离心-滤膜法：胆盐乳糖增菌液澄清且无气体产生[3]，伊红美蓝琼脂培养基无菌落长出；离心-双重滤膜法：胆盐乳糖增菌液浑浊且有气体产生，伊红美蓝琼脂培养基可观察到明显的菌落。采用4种不同的大肠杆菌检验方法检验呋喃唑酮片大肠杆菌的结果，见表1。

表1 采用4种不同的大肠杆菌检验方法检验呋喃唑酮片大肠杆菌结果比较

讨论

人们服用被粪便污染的食品及药品后，有被其中可能存在的肠道致病菌等病原微生物感染的危险，因此常通过检测大肠杆菌用来判断食品或药品等是否被粪便污染[4]。一次离心法、二次离心法、离心-滤膜法以及离心-双重滤膜法都是常用的大肠杆菌检验方法，但对于呋喃唑酮片这类本身具有抑菌特性的抗菌药物来说，常规检测方法往往难以检测出其中含有的大肠杆菌。本实验中，一次离心法、二次离心法和离心-滤膜法，胆盐乳糖增菌液试验和伊红美蓝琼脂培养基试验均认为未检出大肠杆菌[5]，其中，一次离心法胆盐乳糖增菌液略显浑浊，而二次离心法中增菌液澄清，加之两种方法都没有检测到气体产生，因此并不能认为一次离心法有大肠杆菌检出，这种浑浊可能与离心不完全有关。4种检测方法中，只有离心-双重滤膜法试验均呈阳性，且伊红美蓝琼脂培养基中可观察到明显的深紫色、有金属光泽的大肠杆菌菌落，认为有大肠杆菌检出[6]，可见离心-双重滤膜法更适用于对呋喃唑酮这类抗菌药物的大肠杆菌检测。因为离心-双重滤膜法经离心和两次滤膜过滤，使呋喃唑酮的药物浓度降低至其有效抑菌浓度之下[7]，因此检测大肠杆菌的灵敏度更高。所以将离心-双重滤膜法用于呋喃唑酮这类抗菌药物的大肠杆菌检验具有一定的应用前景，有待进一步的研究。

[1] 张全温,冯云.呋喃唑酮片大肠杆菌的检验方法探究[J].中国医药指南,2012,10（29）：440-441.

[2]付兴祥,张忠平,张海琴,等.大肠杆菌自家灭活油乳苗的制备及疫苗质量检验[J].现代农业科技,2013,24（5）：274,276.

[3]林涛,兰敏,冯小军,等.VIDAS-VTTEK法快速检验食品中大肠杆菌0157的研究[J].中国卫生检验杂志,2008,18（8）：1660-1662.

[4]张朦.水活度用于食品微生物大肠杆菌安全检验控制的研究[D].华中农业大学, 2013.

[5]罗世容.不同方法下呋喃唑酮片对大肠杆菌的检出率分析[J].世界最新医学信息文摘（连续型电子期刊）,2015,12（8）：48-49.

[6]徐伟伟,张昔红,张静,等.大肠杆菌检验法分析[J].医学信息,2014,23（6）：456-456.

[7]白秀芝.小檗碱甲氧苄啶片中大肠杆菌的检验[J].微生物学杂志,2004,24（6）：64.

图2

图3

图4

讨论

上述几种情况在临床检验工作中比较常见，我们通过对血液分析仪结果显示的数据、图形和报警进行分析，对显示的异常情况进行分析，寻找原因，防止差错的发生。这就要求检验操作人员严格执行仪器操作规程，掌握仪器的工作原理和一定的临床知识。血液分析仪欲获得准确、可比的结果，除按照规定校准外，还需要做好日常的质量控制[2]，使检验的结果准确、可靠，才能在疾病的诊断和治疗中发挥最大作用。

参考文献

[1] 刘成玉,罗春丽.临床检验基础[M].北京：人民卫生出版社,2012：107-108.

[2] 叶应妩,王毓三,申子瑜.全国临床检验操作规程[M].南京：东南大学出版社,2006：141-142.

Explorationandanalysisofthemethodfortheinspectionofescherichiacoli

PengJianqiong
ThePeople'sHospitalofShehongCounty,SichuanProvince629200

Objective：Toinvestigatetheeffectofdifferenttestmethodsonthedetectionrateofescherichiacoli.Methods：One centrifugalmethod,twocentrifugalmethod,thecentrifugalfiltrationmembranemethodandthecentrifugaldoublefiltration membranemethodwereusedtodetecttheescherichiacoliinfurazolidonetablet.Results：Inonecentrifugalmethod,theincreasing bacterialliquidofbilesaltlactosewasslightlyturbid,andtherewasnogas,culturemediumofeosinmethyleneblueagarhadno bacterialcolonylength.Intwocentrifugalmethodandthecentrifugalfiltrationmembranemethod,theincreasingbacterialliquidof bilesaltlactosewasclear,andtherewasnogas,culturemediumofeosinmethyleneblueagarhadnobacterialcolonylength.Inthe centrifugaldoublefiltrationmembranemethod,theincreasingbacterialliquidofbilesaltlactosewasturbid,andtherewasgas, culturemediumofeosinmethyleneblueagarhadobviouscolony.Conclusion：Comparedwithothermethods,thedetectionrateof thecentrifugaldoublefiltrationmembranemethodforescherichiacoliwashigh,andtheoperationwasmoreconvenient.

Escherichiacoli；Testmethod；Furazolidonetablet

10.3969/j.issn.1007-614x.2015.30.70