脱落酸对人SACC-2细胞增殖作用的实验研究

谷爱玲何巍457000河南省濮阳市人民医院口腔科473058河南省郑州大学第一附属医院口腔颌面外科

脱落酸对人SACC-2细胞增殖作用的实验研究

谷爱玲1何巍2
457000河南省濮阳市人民医院口腔科1
473058河南省郑州大学第一附属医院口腔颌面外科2

目的：观察天然植物激素ABA对SACC-2癌细胞抑制增殖的影响。方法：从细胞增殖活力、DNA合成和周期分布等方面研究ABA对SACC-2细胞增殖的影响。结果：不同浓度的ABA对SACC-2细胞增殖的影响不同。结论：ABA在浓度(≥1×10-1mmol/L)下有较强抑制增殖作用。

脱落酸；抑制；人SACC-2细胞；增殖

涎腺腺样囊性癌有恶性程度高、易侵神经及远处转移等特性，探索新疗法成为必要[1]。国内外文献报道脱落酸有抗肿瘤作用[2]。本研究应用ABA作用SACC-2细胞后，观察细胞形态、计算生长曲线和细胞增殖抑制率的改变，以探讨ABA的作用机制，为腺样囊性癌的防治提供理论依据。

资料与方法

细胞株及试剂：人SACC-2细胞株(四川大学口腔医学院)。98％ ABA(Aldrich公司，美国)。

方法：①细胞形态学观察：将细胞分为对照组、ABA组，培养24h、48h后，观察各组细胞的数量、形态、染色质和胞浆的变化。②MTT法检测ABA对细胞抑制率：空白对照组、溶剂对照组、实验组，同样条件分别培养6h、12h、24h、48h、72h后，计算实验结果。③流式细胞术检测细胞周期分布和增殖指数：采用15mW氩离子激发器，应用Expo 32ADC进行免疫荧光数据分析，计算S期分数(SPF)和细胞增殖指数(PI)。

统计学处理：采用SPSS 13.0进行数据统计分析，采用(x±s)表示，采用χ2检验分析比较，以α=0.05为显著性检验水准。

结果

ABA对SACC-2细胞作用的形态学观察：在倒置相差显微镜下，对照组SACC-2细胞贴壁生长良好，细胞单层生长，形态为扁平的多角形，胞体较大，核分裂相多，胞质饱满，中央有细胞核，细胞具有连接成片的能力，生长迅速。实验组细胞生长明显减慢、脱落、悬浮培养液中，贴壁细胞变圆、缩小、连接松解，细胞堆集减少，呈散在，胞浆颗粒增多，核颜色加深，用药48h、72h后，生长停滞，脱落明显，细胞皱缩变小、裂解，胞内颗粒增多，核浆难分清。

ABA对SACC-2细胞生长的影响：不同浓度ABA分别为10-5mmol/L、10-4mmol/L、10-3mmol/L、10-2mmol/L、10-1mmol/L，分别作用6、12、24、48、72h后，利用MTT法测定了对SACC-2细胞生长的影响。随着剂量的增加，细胞生长抑制率上升，与对照组相比，差异有统计学意义(P＜0.05)，存在剂量依赖关系，即呈剂量-效应关系，见图1。随时间延长，细胞生长抑制率上升，有时间依赖关系，即呈时间-效应关系，见图2。

图1 不同浓度ABA对SACC-2细胞生长抑制作用

图2 不同时间、不同浓度ABA对SACC-2细胞生长抑制作用

表1 ABA对SACC-2细胞周期的影响(x±s)

流式细胞仪检测结果：结果显示，ABA在浓度10-1mmol/L时作用48h后，G0/G1期细胞构成比分别为80.13％和77.23％，G2/M期分别为6.47％和7.64％，而对照组G0/G1期仅68.19％，G2/M期达5.51％，可见实验组G0/G1期细胞构成比明显高于对照组，G2/M期明显低于对照组(P＜0.05)，见表1，说明ABA作用后延长了G0/G1期，缩短了S期和G2/M期。提示ABA抑制细胞生长的作用可能与G0/G1期阻滞有关，差异具有统计学意义(P＜0.05)。

讨论

肿瘤最根本的属性是细胞的增殖失去控制，这也是我们对于癌症研究的核心问题[3]。因此抑制肿瘤细胞增殖是筛选抗肿瘤药物的一个重要指标[4]。本研究显示，经ABA作用后细胞数目减少、排列疏松，部分细胞脱壁，漂浮于培养液中，生长增殖受到明显的抑制，且浓度越高，持续时间越长，受到的抑制作用越显著。MTT比色法是目前广泛使用检测抗癌药物对肿瘤增殖活性的方法[5]。本研究中，实验组的OD值越小，表明植物激素对肿瘤细胞的抑制作用越明显。细胞分化的启动，首先有细胞增殖停止，退出细胞周期。研究表明，G1-S卡点失常进入S期细胞增多是是肿瘤细胞去分化的一个重要标志。本研究明显降低了肿瘤细胞的PI、S期比率，破坏了DNA复制合成，减少增殖，发挥了抗肿瘤的作用。

总之，高浓度的植物激素ABA对细胞增殖局域较强的抑制作用，具有剂量-效应关系、时间-效应性，其具体作用机制仍需要继续进行研究。

[1] Barrett AW，Speight PM.Perineural invasion in adenoid cystic carcinoma of the parotid glands：Avalid prognostic indicator[J].Oral Oncol，2009，45(11)：936-940.

[2] Suzuki T，Ezure T，Ishida M.Synergistic effects of some pairsof antioxidants and related agents on mouse leukaemia L5178Y cell growth in-vitro[J].Pharm Pharmacol，1998，50 (10)：1173-1177.

[3] Ma J，Zhong M，Wang ZY.Anti-proliferation effectof genistein on salivary adenoid cystic carcinoma cell line SACC-83 in vitro[J]. Shanghai Kou Qiang Yi Xue，2005，14(1)：55-58.

[4] Dolezal K，Popa I，et al.Preparation and biological activity of 6-benzylaminopurine derivatives in plantsand human cancer cells[J]. BioorgMed Chem，2006，14(3)：875-884.

[5] Morgan DM.Tetrazolium(MTT)assay for cellular viability and activity[J].Methods Mol Biol，2008，79：179-183.

Experiment research of abscisic acid on the proliferation effectof human SACC-2 cells

Gu Ailing1，HeWei2
DepartmentofStomatology，PuyangCity People'sHospitalofHenan Province4570001

Objective：To observe the effectof natural planthormone ABA on the suppress proliferation of SACC-2 cancer cells. Methods：The effectof ABA on the SACC-2 cells proliferationwas studied from cellproliferation activity，DNA synthesisand cycle distribution and otheraspects.Results：The differentconcentrationsof ABA had differenteffectson the SACC-2 cells proliferation. Conclusion：ABA in the concentration(≥1×10-1mmol/L)hasstrongersuppressproliferation effect.

Abscisic acid；Suppress；Human SACC-2 cells；Proliferation

book=6,ebook=8

10.3969/j.issn.1007-614x.2015.22.2

DepartmentofOraland Maxillofacial Surgery，the FirstAffiliated HospitalofZhengzhou University，Henan Province 4730582