体液添加EDTA-K2抗凝剂对细胞计数的影响

马 科，左路广，常晓彤，连晶晶，冯 博

体液添加EDTA-K2抗凝剂对细胞计数的影响

马 科，左路广，常晓彤，连晶晶，冯 博

目的：研究添加EDTA-K2抗凝剂对体液细胞计数的影响。方法：由临床送检的110份体液中取1、2、4、2 mL依次加入3支EDTA-K2抗凝剂及1支不含抗凝剂试管中，选用Sysmex XE-5000全自动血细胞分析仪测定白细胞（WBC）、红细胞（RBC）、单个核细胞（MN）、多个核细胞（PMN），分析添加EDTA-K2抗凝剂对体液细胞计数的影响；另收集体液，送检后及时测量并分装EDTA-K2抗凝剂及无抗凝剂试管中各2 mL，4℃冷藏2、4、6、12 h分别测量细胞含量，分析体液采集后不同时间细胞数量的变化趋势。结果：体液添加EDTA-K2抗凝剂各组相对于对照组细胞计数均无统计学差异；体液抽取后如无抗凝剂，随放置时间延长，白细胞计数出现下降趋势，EDTA-K2抗凝体液则无下降趋势。结论：体液中添加EDTA-K2抗凝剂可提高体液细胞计数的准确性，减小临床体液标本不能及时检测对细胞计数的影响。

体液；EDTA-K2抗凝剂；细胞计数

0 引言

体液（body fluid），细胞内液与外液的总称，主要包括脑脊液、胸腹水、关节液等。临床上产生胸腹水的病因主要有肝硬化、肝静脉闭塞、心脏衰竭、肾脏疾病、营养不良、厌食症、肿瘤、癌症等疾病[1-3]。计数胸腹水中的细胞含量可帮助临床研究疾病的发病机制，鉴别渗出液、漏出液，鉴别自发性细菌性腹膜炎等疾病[4-6]。检测关节液有助于区分关节肿胀为炎性或非炎性状态，计数脑脊液中的白细胞、红细胞含量可辅助诊断脑膜炎、脑炎、中枢神经系统疾病[7-10]。总之，精确计数体液对于疾病的鉴别诊断、病情预后评估具有十分重要的意义。随着临床检验医学技术的发展，传统手工计数体液细胞已不能满足临床需要，具有体液测定功能的仪器已逐渐应用于医疗领域[11-14]。临床工作中，体液标本受患者病情、采集时间、检测条件等多种因素影响，导致体液标本不能及时检测，同时体液标本易发生自凝、细胞溶解现象，影响细胞计数，使检测结果准确性降低，延误临床诊断与治疗。EDTA-K2具有良好抗凝作用，本文对是否可以在标本采集时加入EDTA-K2来保护体液中的细胞成分，提高细胞计数的准确性进行研究，现将结果报告如下。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 标本来源

110份体液标本均取自2013年11月至2014年6月河北北方学院附属第一医院住院、门诊患者的体液标本。其中，男58例，女52例；年龄15～81岁，平均（45.3±16.2）岁；胸水标本64例，腹水标本24例，脑脊液标本22例。标本由临床医师按标准操作规范采集后及时送检，所有患者均知情同意，符合本院医学伦理委员会标准。

1.1.2 仪器与试剂

日本Sysmex XE-5000血细胞分析仪及配套试剂、校准品、质控品；EDTA-K2抗凝管。

1.2 方法

1.2.1 添加EDTA-K2抗凝剂对体液细胞计数的影响

标本由临床医师按标准操作规范采集并及时送检，每份体液标本取1、2、4、2 mL，依次加入3支EDTA-K2抗凝剂及1支不含抗凝剂试管中，选用Sysmex XE-5000全自动血细胞分析仪测定白细胞（WBC）、红细胞（RBC）、单个核细胞（MN）、多个核细胞（PMN），分析添加EDTA-K2抗凝剂对体液细胞计数的影响。

1.2.2 体液标本采集后不同时间细胞数量变化

收集体液标本，送检后及时测量，结果为对照组数据。由于脑脊液标本临床每次采集量较少，所以测量后的体液标本分装于EDTA-K2抗凝剂及无抗凝剂试管中各2 mL，置于4℃冰箱冷藏，分装后2、4、6、12 h分别测量细胞含量，分析体液标本采集后在不同时间细胞数量的变化趋势。

1.2.3 统计学方法

采用Excel 2007、IBM SPSS Statistics 19统计软件对数据进行统计处理，计量资料采用均数±标准差表示，即±s，选用Wilcoxon符号秩和检验进行分析，P＜0.05为有统计学差异。

2 结果

2.1 EDTA-K2抗凝体液细胞计数结果

实验中选用胸水12例、腹水10例。经处理的体液标本进行测量后记录结果，WBC范围（48～12 422）×106/L，RBC范围（0～128）×109/L。无抗凝剂体液为对照组，加入3支EDTA-K2抗凝管的体液依次记为实验组1、2、3。经正态性检验P＜0.05，数据属于偏态分布，选用IBMSPSSStatistics19统计软件进行Wilcoxon符号秩和检验，结果见表1。

表1 EDTA-K2抗凝剂对体液细胞计数的影响

结合表1及统计结果，对照组WBC与实验1、2、3组经Wilcoxon符号秩和检验，Z值依次为-1.804、-1.098、-1.883，RBC的Z值依次为-2.060、-0.412、-1.134，MN的Z值依次为-0.550、-0.863、-1.255，PMN的Z值依次为-1.688、-1.138、-1.374，P均大于0.05，体液添加EDTA-K2抗凝剂各组相对于对照组细胞计数均无统计学差异。

2.2 体液标本采集后不同时间细胞数量变化

实验选用胸水52例、腹水14例、脑脊液22例，送检后立即进行检测，WBC范围（5～466 027）×106/L、RBC范围（0～794）×109/L，检测结果作对照组数据，分装后2、4、6、12 h检测的非抗凝、抗凝体液标本依次记为实验组2-N、2-E、4-N、4-E、6-N、6-E、12-N、12-E，选用Wilcoxon符号秩和检验分析，结果见表2。用各时段抗凝组、非抗凝组细胞计数均值占对照组百分比作图，如图1～4所示。由图表可知，放置时间为4 h时，无抗凝剂组WBC、MN为91.1%、92.4%，减少8.9%、7.6%，相对于对照组具有统计学差异（ZWBC=-2.108、ZMN=-2.250，P＜0.05）；6 h后，WBC减少13.7%、MN减少11.7%、PMN减少22.8%（ZWBC= -3.515、ZMN=-2.830、ZPMN=-2.537，P＜0.05）；12 h后WBC减少22.3%、MN减少15.9%、PMN减少32.3%

（ZWBC=-3.975、ZMN=-4.673、ZPMN=-3.512，P＜0.05）。抗凝组各时段WBC数量变化与对照组无统计学差异（P＞0.05），抗凝组、非抗凝组标本中各时段RBC数量与对照组均无统计学差异（P＞0.05）。

3 讨论

随着现代医学的发展，体液常规检测日益受到临床工作人员重视，其对疾病的诊断及病情的评估及预后意义重大。手工计数体液红白细胞工作耗时费力，而体液细胞计数自动化可规避手工法的缺点[15]，使临床检验工作便捷、快速、精确。

由实验可知，临床采集体液标本时添加EDTAK2抗凝剂不会影响体液细胞数量测定的准确性。未添加抗凝剂标本送检后不及时测定，标本中的WBC数量会随放置时间延长出现下降趋势。在标本送检2 h后，WBC、MN、PMN检测数量为原始对照的95.5%、95.2%、95.6%，检测数值减少4.5%、4.8%、4.4%（P＞0.05）；4 h后减少8.9%、7.6%、11.1%，其中，WBC、MN数量减少具有统计学差异（P＜0.05）；6h后减少13.7%、11.7%、22.8%（P＜0.05）；12 h后减少22.3%、15.9%、32.3%（P＜0.05）。RBC数量变化无统计学差异（P＞0.05）。由于EDTA-K2可有效保护体液细胞成分，实验中添加EDTA-K2抗凝剂后，WBC计数随着放置时间的延长下降趋势较小，标本采集后4℃保存12 h后WBC数量仅下降1.8%，RBC数量无明显变化。

表2 各时间段抗凝、非抗凝组细胞计数统计

图1 不同放置时间WBC数量变化趋势

图2 不同放置时间RBC数量变化趋势

图3 不同放置时间MN数量变化趋势

图4 不同放置时间PMN数量变化趋势

胸腹水计数的准确性对于渗出液、漏出液的鉴别以及结核性胸、腹膜炎，化脓性细菌感染，恶性肿瘤等疾病的诊断具有十分重要的意义。对于脑脊液标本，由于其细胞含量相对较低，参考值范围较窄（正常范围（0～10）×106/L），脑脊液细胞计数准确对于鉴别中枢神经系统疾病具有重要意义，检测结果不准确则严重影响临床诊断和治疗。因此，建议临床采集体液标本计数时，应抽取2～4 mL加入EDTAK2抗凝管中送检，以减缓体液标本中细胞数量因不能及时检测所造成的下降趋势，夜间急诊或不能及时检测的标本，可放置4℃冰箱冷藏，12 h内测定不影响计数结果的准确性。如未添加抗凝剂，则应在标本采集后2 h之内完成细胞计数，若检测时间延长，则会导致白细胞计数减少、准确性降低，延误病情的诊断和治疗。

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（收稿：2014-09-12 修回：2014-12-25）

Study on impact of EDTA-K2anticoagulant added into body fluid on cell count

MA Ke1,2,ZUO Lu-guang1,CHANG Xiao-tong2,LIAN Jing-jing1,FENG Bo1
（1.The First Affiliated Hospital of Hebei North University,Zhangjiakou 075000,Hebei Province,China; 2.Hebei North University,Zhangjiakou 075000,Hebei Province,China）

ObjectiveTo evaluate the impact of adding EDTA-K2anticoagulant to body fluid on humoral cell count. MethodsThere were 1,2,4 and 2 mL of body fluid were respectively extracted from each of 110 clinical specimens and then dropped into three tubes with EDTA-K2anticoagulant and one empty tube respectively.Sysmex XE-5000 automatic blood cell analyzer was used to detect WBC,RBC,MN and PMN so as to analyze the impact of EDTA-K2anticoagulant on humoral cell count.Some other specimens were tested,and then two 2 mL of body fluid were drawn from them and dropped into one tube with EDTA-K2anticoagulant and one empty tube respectively,cell count was carried out after the tubes were in the condition of 4℃for 2,4,6 and 12 hours to determine the trend that cell count changed with the time going by.ResultsEDTA-K2anticoagulant had no significant impact on cell count,while WBC count decreased with the time going by when EDTA-K2anticoagulant was absent.ConclusionAdding EDTA-K2anticoagulant into the body fluid can enhance the accuracy of humoral cell count,and can relieve the influence of delayed detection on cell count.[Chinese Medical Equipment Journal，2015，36（4）：91-93]

body fluid;EDTA-K2anticoagulant;cell count

R318.6；TH776

A

1003-8868（2015）04-0091-03

10.7687/J.ISSN1003-8868.2015.04.091

河北省高等学校科学技术研究青年基金项目（Q2012141）

马 科（1977—），男，主管检验师，主要从事临床检验方面的研究工作，E-mail：mkzyj@139.com。

075000河北张家口，河北北方学院附属第一医院（马 科，左路广，连晶晶，冯 博）；075000河北张家口，河北北方学院（马 科，常晓彤）

常晓彤，E-mail：changxt1212@vip.sina.com