新疆某种猪场猪瘟净化试验

王 元，刘宏杰，沙依兰古丽，王长江，王 琴

（1.新疆天康畜牧科技有限公司，新疆昌吉 831100；2. 新疆畜牧科学院，新疆乌鲁木齐 830000；3.中国兽医药品监察所，北京 100081）

新疆某种猪场猪瘟净化试验

王 元1，刘宏杰1，沙依兰古丽2，王长江2，王 琴3

（1.新疆天康畜牧科技有限公司，新疆昌吉 831100；2. 新疆畜牧科学院，新疆乌鲁木齐 830000；3.中国兽医药品监察所，北京 100081）

[目的]有效控制猪瘟，探索净化方案，提供猪瘟净化模式。[方法]通过对新疆某种猪场猪间隔半年2次活体采集扁桃体及对应血清，分别采用猪瘟实时荧光定量RT-PCR（FQ RT-PCR）和ELISA方法进行猪瘟病原学和抗体进行检测，累计淘汰病原学阳性种猪4头，结合有效的疫苗免疫、完善生物安全措施和其他疫病防治等措施，进行猪场猪瘟净化试验。[结果]该种猪场的猪瘟病毒感染率由净化实施前的13%（3/23）降为0%（0/40），仔猪成活率由60%提高到95%。[结论]通过实施净化方案，达到了猪瘟净化的目的，建立了猪场猪瘟净化模式。

种猪场；猪瘟；控制；净化

猪瘟是由猪瘟病毒引起的严重危害养猪业的重要传染病之一，被OIE列为必须报告的传染病，我国将其列为一类动物传染病[1]。近年来，国内猪瘟的流行特点和发病特征发生了明显的变化，病程由急性变为慢性。临床症状由典型变为非典型的温和型猪瘟，特别是低毒力猪瘟病毒的存在，常导致猪瘟病毒持续感染，母猪表现不孕、流产、早产、产死胎或木乃伊胎，初生弱仔猪表现为精神沉郁、间歇性腹泻、死亡或免疫耐受，易形成持续性感染带毒猪，造成猪瘟长期流行[2，3]。为了有效控制猪瘟，特别是从源头控制猪瘟，我们在前期猪瘟净化技术研究的基础上，在新疆某规模化种猪场猪瘟开展了猪瘟净化试验示范。

1 猪场基本情况

新疆伊犁某父母代种猪场共存栏种母猪150头、种公猪6头。猪场其他生物安全措施一般，猪瘟净化前猪场仔猪成活率约60%。死亡仔猪采集病料检测，可检到猪瘟病原。其他疫病通过免疫等措施已得到有效控制。

2 净化方案

2.1 主要疫病控制和生物安全措施

2.1.1 对主要威胁的疫病进行免疫预防。猪场免疫程序为：采用猪瘟活疫苗（传代细胞苗，哈尔滨维科生物技术开发公司生产，批号：2013027）按使用说明进行全群免疫，免疫剂量为每头猪1头份，仔猪零日龄首免、30日龄二免，种母猪每次配种前免疫1次，种公猪每年免疫2次。伪狂犬、蓝耳病、圆环病毒、口蹄疫等按规定进行免疫。通过免疫有效控制猪瘟等疫病流行。

2.1.2 完善定期消毒、引进种猪隔离检疫、人员管理等生物安全措施，严防疫病传入。

2.2 样品采集方法

对免疫猪瘟疫苗免疫后28天的种公猪、生产母猪和后备母猪抽样活体采集扁桃体和血清，检测猪瘟病原和抗体情况。然后，每半年进行一次检测，共检测3次。每次采样时，对所有种公猪全部采样，对生产母猪则先分析全群生产母猪生产记录，优先选择产仔少、流产或有过产死胎、病胎、弱胎或仔猪成活率低的母猪采样。每次采10%～20%种猪的样品。

2.3 检测阳性猪的淘汰

对猪瘟病原阳性的种猪予以淘汰。对猪瘟抗体不合格的种猪进行补免，对多次免疫猪瘟抗体仍不合格的猪予以淘汰。

2.4 对新引进猪的监测和处理

对新引种猪检测猪瘟抗体和猪瘟病原，淘汰病原检测阳性猪；猪瘟抗体不合格的猪进行加强免疫，加强免疫后抗体仍不合格的猪予以淘汰。

3 检测材料和方法

3.1 材料

3.1.1 样品来源。新疆伊犁某种猪场血清109份、扁桃体108份。

3.1.2 试剂与仪器。扁桃体活体采样器；10ml一次性采血器；美国IDEXX CSFV抗体检测试剂盒；美国Thermo MK3酶标仪；德国ependorf微量移液器；德国1-14K高速、低温离心机；美国伯乐荧光定量PCR仪；TaKaRa Mini BEST Viral RNA/ DNA Extraction Kit；CSFV FQ-PCR检测引物；荧光探针（MGB-P）、Rnase-free H2O、TaKara One Step PrimeScript™ RT-PCR Kit。

3.2 方法

3.2.1 猪瘟抗体检测

按照美国IDEXX CSFV Ab试剂盒说明操作，并采用Herdchek软件判定结果。

3.2.2 猪瘟病原的检测

3.2.2.1 病毒RNA提取 按TaKara 提取盒RNA说明操作。

3.2.2.2 按下列组分配制FQ RT-PCR反应液（反应液配制最好在冰上进行）。

试剂 使用量 终浓度2×One Step RT-PCR Buffer Ⅲ 12.5 ul 1× TaKaRa Ex Taq HS（5U/ul） 0.5 ul PrimeScript RT Enzyme Mix Ⅱ 0.5 ul PCR Forward Primer（10 um） 0.5 ul PCR Reverse Primer（10 um） 0.5 ul TaqMan Probe 1 ul Total RNA 2 ul RNase Free dH2O 7.5 ul Total 25 ul

3.2.2.3 反应条件：42℃ 5min，95℃ 10s ×1；88℃ 8s，60℃ 35s，×40。

3.2.3 结果判定

阳性对照CT≤35，并具有典型的扩增曲线；阴性对照无典型的扩增曲线，实验成立。样品CT≤35，并具有典型的扩增曲线判为阳性，否则判为阴性。

4 结果

4.1 猪瘟抗体ELISA检测结果（见表1）

4.2 猪瘟病原FQ RT-PCR检测结果（见表2）

5 结果分析与讨论

5.1 目前，世界上主要发达国家已经通过净化措施消灭了猪瘟。我国虽然采取了全国性的强制免疫措施，大规模的疫情暴发得到了有效控制，但是各地散发流行仍然十分普遍，尤其是“带毒母猪综合征”妊娠母猪的感染率可达43%。这是造成我国猪瘟长期持续存在和散发流行恶性循环的主要根源，这种持续带毒现象对猪瘟的控制产生了严重的影响[4，5]。

表1 三次采集猪血清样品检测猪瘟抗体结果

表2 三次采集猪扁桃体样品检测猪瘟病原结果

5.2 扁桃体是猪感染猪瘟病毒最先定居的器官，也是含毒量最多和带毒时间最长的器官。研究表明，FQ RT-PCR 方法具有快速、敏感、高通量等优点[6]。因此，采集扁桃体样品进行FQ RT-PCR检测，对猪瘟病毒感染可进行早期诊断与净化。

5.3 猪瘟病毒净化，首先要确保种公猪猪瘟病毒阴性，以防止在配种时引起的交叉感染。因此，必须逐头采集种公猪的扁桃体和血清，进行猪瘟病毒筛查。其次，通过日常对种猪生产性能记录的分析，对发过病或产仔少、流产、死产等母猪作为重点采集样品进行病原检测，可以减少检测的盲目性，提高检出率，加快猪瘟的净化进程。通过第三次检测结果可以看出，经2次检测淘汰病原学阳性种猪，使种猪的猪瘟病原学阳性率由13%降到0%。从2014年起，该猪场的仔猪成活率已由净化前的60%左右提高到95%，到达了净化要求。

5.4 从本试验结果可以看出，在采取严格消毒、引进种猪的隔离检疫、人员管理、高效猪瘟弱毒疫苗强化免疫等生物安全措施及做好其他猪病防治的基础上，定期进行2～3次有目的的猪瘟病原学和血清学检测，坚决淘汰病原检测阳性和多次免疫抗体不合格种猪，是规模养猪场进行猪瘟净化的有效方式。

[1] 陈溥言．兽医传染病学［M］.5版.北京：中国农业出版社，2006：210-216.

[2] 宁宜宝，亢文华，王琴. 非典型性猪瘟及其预防控制[J]. 河北畜牧兽医，2005，21（7）：11- 15.

[3] 郝飞，汤德元，罗险峰，等.规模化猪场猪瘟净化措施的研究[J]. 畜牧与兽医，2013，45（7）：89- 92.

[4] 邱惠深.猪瘟的持续性感染的根源在于带毒母猪[J].养猪，2004（3）：29-30.

[5] 王琴.猪瘟流行现状及中国猪瘟净化策略[J].中国猪业，2012（10）：45-47.

[6] 刘俊，王琴，范学政，等.猪瘟病毒野毒株TaqMan-MGB荧光定量PCR鉴别方法的建立与应用[J]. 中国农业科学，2009，42（12）：4366-4371.

Trial Eradication of Classical Swine Fever in a Breeding Pig Farm in Xinjiang

Wang Yuan1，Liu Hongjie1，Shah IIan Guli2，Wang Changjiang2，Wang Qin3
（1.Xinjiang Tiankang animal husbandry science and technology limited company，Changji 831100，Xinjiang；2.Animal Science Academy of Xinjiang Uygur Autonomous Region，Urumqi 830000，Xinjiang；3.China Institute of Veterinary Drug Control，Bejing，100081）

[Objective] For effective control of classical swine fever, the eradication scheme was explored to provide a model for eradication of classical swine fever. [Method] Samples of tonsils and corresponding sera were collected from pigs two times with an interval of half year in one breeding pig farm，and were detected for CSF pathogen and antibody respectively by RT-PCR（FQ RT-PCR）and ELISA，and the pathogen positive pigs were eliminated. Meanwhile, an effective vaccination was carried out and the bio-safety measures and other disease prevention and control measures were improved. [Result] CSFV infection rate in the pig farm was dropped to 0%（0 / 40） from 13%（3 / 23），the survival rate of piglets increased from 60% to 95%. [Conclusion] CSF was successfully eradicated in the breeding pig farm and an effective CSF eradication model was established for breeding pig farms.

breeding pig farm；classical swine fever；control；eradication

S858.28

B

1005-944X（2015）03-0008-03

新疆维吾尔自治区科技支疆项目“新疆部分种猪场猪瘟净化技术的集成研究与示范”（201291150）

王长江