肺癌患者血清TK1水平与临床病理学特点及预后关系的研究

叶珩 钱科卿 黄薇

·临床研究与应用·

肺癌患者血清TK1水平与临床病理学特点及预后关系的研究

叶珩 钱科卿 黄薇

目的：探讨细胞质胸苷激酶1（TK1）在肺癌患者血清中的阳性率及其与肺癌临床病理学特点及预后的关系。方法：检测75例肺癌患者血清TK1水平，同时选取56例健康体检者作为对照。比较分析血清TK1水平与肺癌临床病理学特点及预后的关系。结果：肺癌患者血清TK1的阳性率（33.3%）高于健康对照组（12.5%），差异具有统计学意义（P=0.006）。有远处转移的患者血清TK1阳性率（53.8%）明显高于无远处转移的患者（22.4%），差异具有统计学意义（P=0.006）。TNM分期为晚期的肺癌患者血清TK1阳性率（54.5%）高于TNM分期早期的患者（16.7%），差异具有统计学意义（P=0.001）。肺癌患者血清中TK1的阳性率与患者性别、是否吸烟、有无淋巴结转移及肺癌的病理类型无相关性。血清TK1阴性患者的2年生存率（78%）显著高于TK1阳性患者（28%），差异具有统计学意义（P<0.001）。结论：血清TK1与肺癌远处转移相关，是肺癌患者预后不佳的标志之一。

肺癌 细胞质胸苷激酶1 预后

肺癌在全世界的发病率和死亡率均居于首位［1］。肺癌起病隐匿，临床上往往缺乏特异性表现，血清学检查也无高度特异性的肿瘤标志物［2］，70%以上的患者确诊时已是晚期。目前，肺癌的治疗效果尚不理想，肺癌的5年生存率仅17%左右［3］。早期诊断是提高临床疗效和降低病死率的关键。细胞质胸苷激酶1（thymidine kinase 1，TK1）与细胞的增殖有关，在DNA的合成中将脱氧胸苷转换为胸苷酸，是嘧啶补救途径的关键酶［4］。在肿瘤细胞中，这种高水平的TK1从S期可以持续到M期，其水平的增加和DNA的合成相一致，提示TK1可作为肿瘤生长和细胞增殖的一种标志物。本研究通过检测肺癌患者血清中TK1的水平，分析其与肺癌的临床病理学及预后的关系。从而探讨血清TK1在肺癌诊断、治疗和预后等方面的应用价值。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 一般资料 收集2012年3月至2013年4月，常州市第二人民医院收治的肺癌患者75例，其中男性52例、女性23例，患者年龄34～80岁，中位年龄59岁。其中非小细胞肺癌68例（鳞癌28例、腺癌40例），Ⅰ期28例、Ⅱ期10例、Ⅲ期5例、Ⅳ期25例；小细胞肺癌7例，其中局限期4例、广泛期3例。另取56例在常州市第二人民医院健康体检者（其中男性34例、女性22例；年龄28～76岁，中位年龄55岁）为正常对照组。

1.1.2 主要实验试剂 TK1诊断试剂盒、CIS-1型化学发光数字成像分析仪购自华瑞同康生物技术（深圳）有限公司，数字显示水浴箱购自上海精宏科学仪器有限公司，超速离心机购自德国Eppendorf公司，脱色摇床购自江苏省金坛市医疗器械厂。

1.2 方法

1.2.1 TK1测定步骤 患者及健康查体者早晨空腹抽血3 mL，30 min内经高速离心，取血清备用。TK1测定在本院肿瘤科实验室进行。制备好抗体稀释液、洗液、封闭液。将内含硝酸纤维素膜的模板平放在一张干净的滤纸上，不同浓度的标准品按1号、2号、3号的顺序点样到A1、A2及A3位置上，每孔3 μL；待检血清按每孔3 μL顺序点在后面的膜上，室温下自然晾干。打开模板，将膜放入反应盒内，用配制后的稀释液振摇洗膜2次，每次5 min。弃去洗涤液，加封闭液，室温下振摇封闭l h。加一抗（TK1-IgY），4℃下过夜。弃去反应液，用洗液漂洗3次后，振摇洗涤3次，每次5 min。加二抗（生物素化抗IgY二抗），室温下振摇反应40 min。弃去反应液，用洗液漂洗3次后，振摇洗涤3次，每次5 min。加链酶亲合素-酶复合物，室温下振摇反应1 h。弃去封闭液，用洗液漂洗3次后，振摇洗涤3次，每次5 min。加ECL发光试剂，过膜浸湿，精确反应1 min。将膜放入CIS-1型化学发光成像分析系统内进行分析。上述重复3次。取3次测量值均数，测量值波动范围为均数±0.5 mg。

1.2.2 参考值 依据以往的大样本临床试验研究数据确立血清TK1的参考值：血清TK1水平0～2.0 pmol/L为正常，>2.0 pmol/L为异常［5］。

1.3 统计学处理

所有的数据资料采用SPSS 19.0软件包处理。两组间TK1阳性率的比较采用χ2检验。P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 血清TK1在肺癌患者及健康对照组间的比较

在肺癌组患者的血清中，TK1的阳性率为33.3%，而在健康对照组中的阳性率为12.5%，差异具有统计学意义（P=0.006）。

2.2 肺癌组血清TK1与患者吸烟与否的关系

在肺癌组患者的血清中，吸烟者TK1的阳性率为38.3%，而在不吸烟组中的阳性率为25.0%，差异无统计学意义（P>0.05）。

2.3 肺癌组血清TK1与患者性别的关系

在肺癌组患者的血清中，女性TK1的阳性率为34.8%，而在男性中的阳性率为32.7%，差异无统计学意义（P>0.05）。

2.4 肺癌组血清TK1与病理学特点的关系

在肺癌组患者中，淋巴结转移阳性的患者血清TK1阳性率为40%，淋巴结阴性患者的TK1阳性率为28.9%，但差异无统计学意义（P>0.05）。有远处转移的患者血清TK1阳性率（53.8%）明显高于无远处转移的患者（22.4%），差异具有统计学意义（P=0.006）。TNM分期为晚期的肺癌患者血清TK1阳性率（54.5%）高于TNM分期早期的患者（16.7%），差异具有统计学意义（P=0.001）。另外，小细胞肺癌患者的TK1阳性率（42.9%）明显高于非小细胞肺癌患者（32.4%），但差异无统计学意义（表1，P>0.05）。

2.5 肺癌患者血清TK1与2年生存率的关系

至2年随访截止日，46例患者生存，血清TK1阴性患者的2年生存率为78%，TK1阳性患者为28%，差异具有统计学意义（表2，P<0.001）。

表1 TK1与肺癌临床病理学特点的关系Table 1 Relationship between TK1 and clinical pathological features of lung cancer

表2 TK1与肺癌患者2年生存率的关系Table 2 Relationship between TK1 and 2 year survival rate of lung can⁃cer patients

3 讨论

细胞质胸苷激酶1（TK1）是细胞S期DNA合成所需的关键酶之一，TK1酶是细胞增殖指数的测量标记物之一。TK1在非增殖细胞和健康人血清中含量极微或检测不到［6-7］，而在增殖细胞及肿瘤细胞G1期→S期→G2期早期升高明显［8］。研究发现［9］食管癌、胃癌、结直肠癌患者的血清TK1水平明显高于对照组，且TK1检测的阳性率明显高于CEA、CA199、CA50。因此TK1可用于观察肿物实体的细胞增殖度，判定其恶性程度，对细胞异常增殖病变的治疗效果和预后的判断有重要意义［10-11］。

有研究［12-13］认为TK1是肺癌患者一项可信的特异性高的肿瘤细胞增殖标志物。结合本研究结果显示，肺癌组血清TK1阳性率高于对照组（P=0.006）。因此说明TK1检测可成为肺癌的辅助诊断方法之一。

本研究结果显示TK1与患者性别无相关性。虽然提示在不同的病理类型中，小细胞肺癌患者血清TK1的阳性率高于非小细胞肺癌患者。有吸烟史的肺癌患者中其血清TK1阳性率比无吸烟史的肺癌患者高，淋巴结转移阳性的患者血清TK1阳性率高于淋巴结阴性患者，但是差异无统计学意义；有远处转移的患者血清TK1阳性率明显高于无远处转移的患者，且差异具有统计学意义（P=0.006）。因此，认为在诊断肺癌转移过程中，TK1在判断血行转移中有一定的临床价值。本研究发现TNM分期为晚期的肺癌患者血清TK1阳性率高于TNM分期早期的患者，且差异具有统计学意义，说明血清TK1阳性率与肺癌的发展程度相关。黄锐等［14］检测了63例肺癌患者血清TK1的表达情况，发现其与患者病理学类型相关，而与吸烟、TNM分期，淋巴结转移、远处转移不相关，这可能与样本量相对较少有一定的关系。

本研究生存率显示，TK1阳性率与患者的2年生存率显著相关，证实了TK1还可作为评价肺癌预后的一项新的生物指标。

综上，发现血清TK1阳性率与肺癌及其临床病理特征有一定的相关性，血清TK1检测可能对于指导肺癌临床分期和判断预后有一定的临床意义。

[1] Siegel R,Naishadham D,Jemal A.Cancer statistics[J].CA Cancer J Clin,2012,62(1):10-29.

[2] Rhea JM,Molinaro RJ.Cancer biomarkers:surviving the journey from bench to bedside[J].Med Lab Observ,2011,43(3):10-26.

[3] Chen WQ,Zhang SW.Analysis of tumor incidence and mortali⁃ty in China Cancer Registry in 2007[J].Chinese Cancer,2011,20 (3):162.[陈万青,张思维.中国肿瘤登记地区2007年肿瘤发病和死亡分析[J].中国肿瘤,2011,20(3):162.]

[4] Mutahir Z,Clausen AR,Anderson KM,et al.Thymidine kinasel 1 regulatory fine-tuning through tetramer formation[J].FEBSJ, 2013,280(6):1531-1541.

[5] Chen ZH,Huang SQ,Wang Y,et al.Serological thymidine ki⁃nase 1 is a biomarker for early detection of tumours-a health screening study on 35 365 people,using a sensitive chemilumines⁃cent dot blot assay[J].Sensors(Basel),2011,11(12):11064-11080.

[6] Agarwal HK,McElroy CA,Sjuvarsson E,et al.Synthesis of N3-substituted carboranyl thymidine bioconjugates and their evalua⁃tion as substrates of recombinant human thyidine 1[J].Eur J Med Chem,2013,60:456-468.

[7] Liang QL,Wang BR,Li ZY,et al.Construction of eukaryotic ex⁃pression vector of TSLC1 gene[J].Arch Med Sci,2011,7(4):579-585.

[8] Arner ES,Eeiksson S.Mammalian deoxyribonucleoside kinases[J]. Pharmacol Ther,1995,67(2):155-186.

[9] Zhang ZJ,Zheng YP,Lin YF,et al.Clinical application of TK1 detection in diagnosis of common malignant tumor[J].Int J Medi Lab Med,2014,35(19):2636-2637.[张志坚,郑艳苹,林元峰,等. TK1检测对常见恶性肿瘤诊断的临床应用[J].国际检验医学杂志,2014,35(19):2636-2637.]

[10]Alegre MM,Robison RA,O'Neill KL.Thymidine Kinase 1:a universal marker for cancer[J].Cancer and Clin Oncol,2013,2(1): 159-167.

[11]Sharif H,von Euler H,Westberg S,et al.A sensitive and kinetical⁃ly defined radiochemical assay for canine and human serum thy⁃midine kinase 1(TK1)to monitor canine malignant lymphoma[J]. Veterinary Journal,2012,194(1):40-47.

[12]Kuroiwa N,Nakayama M,Fukuda T,et al.Specific recognition of cytosolic thymidne kinase in the human lung tumor by mono⁃clonal antibodies raised against recombinant human thymidine ki⁃nase[J].Immu Met,2001,253:1-11.

[13]Melissa MA,Michanel JW,Daine TB,et al.Serum detection of thymidine kinase 1 as a means of early detection of lung cancer [J].Ant Res,2014,34:245-2152.

[14]Huang R,Ye YZ,Chen ML,et al.Expression of cytoplasmic thy⁃midine kinase in lung cancer[J].J Clin Med,2015,20(3):402-404. [黄 锐,叶元滋,陈梅莉,等.细胞质胸苷激酶在肺癌中的表达极其临床意义[J].临床肺科杂志,2015,20(3):402-404.]

（2015-06-24收稿）

（2015-09-22修回）

（编辑：杨红欣）

Serum TK1 and its relation to the clinicopathological features and prognosis of patients with lung cancer

Heng YE,Keqing QIAN,Wei HUANG

Oncology Department,Changzhou Second People's Hospital affiliated to Nanjing Medical University,Changzhou 213000,China.

Objective:This study investigated the positive detection rate of cytoplasm thymidine kinase 1(TK1)in lung cancer patients and the relationship of TK1 with clinicopathological features and prognosis.Methods:Sensitive chemiluminescence dot-blot assay was used to detect serum TK1 levels in 73 lung cancer patients and 56 normal control subjects.Results:The positive detection rate of TK1 was elevated in the lung cancer patients compared with the controls(P=0.006).The positive detection rate of TK1 was also correlated with distant metastases,but not with other factors,such as smoking,sex,lymph node metastasis,and pathology types.The 2 year survival of the patients with negative TK1 detection was significantly longer than that of the patients positively detected with the marker(P<0.001).Conclusion: Serum TK1,a new tumor marker,has potential applications in the diagnosis and prognosis of lung cancer.

lung cancer,cytoplasm thymidine kinase 1,prognosis

10.3969/j.issn.1000-8179.2015.21.679

南京医科大学附属常州第二人民医院肿瘤内科（江苏省常州市213000）

钱科卿 oncol@foxmail.com

叶珩 专业方向为恶性肿瘤内科治疗。

E-mail：dongyi8816@126.com