鸡毒支原体病诊断报告

王良鸿 （广西荔浦县青山镇水产畜牧兽医站 546608）

鸡毒支原体病诊断报告

王良鸿 （广西荔浦县青山镇水产畜牧兽医站 546608）

当前由于一些小型养鸡场养殖户对鸡毒支原体病的危害性缺乏认识，没有形成对鸡毒支原体病的有效防控，鸡毒支原体病在小型养鸡场时有发生，养殖户往往认为是由于其它呼吸道疫病所引起，在预防、治疗方面没有很好把握住所发生疫病的确切病因，从而造成疫病的持续流行，造成严重的经济损失。鸡支原体，又称霉形体，是一类缺乏细胞壁，仅由胞浆膜包裹的原核微生物，是目前所知的能在无生命培养基中繁殖的最小微生物。它广泛存在于人、动物、植物和昆虫体内。部分支原体对人或禽、猪、牛及实验动物具有一定的致病性，主要侵害呼吸道和生殖系统，还能引起关节炎、乳腺炎以及眼部感染。因而在禽病中也是一类重要的病原微生物。鸡支原体根据其致病性的差异性分为三类，其中鸡毒支原体的危害最为严重，鸡毒支原体感染也称为鸡败血霉形体感染或慢性呼吸道病，临床上以呼吸道症状为主，特征表现为咳嗽、流鼻液，呼吸道罗音，严重者呼吸困难和张口呼吸。

2015年5月份桂林市A县有B、C、D、E 3个小型养鸡场发生呼吸道疫病，其中B、C、D、E 4个养鸡场存栏有48日龄的雏鸡分别为2500羽、3000羽、2700羽、4000羽，4个养鸡场的雏鸡不同程度存在呼吸道疫病，5月10发现疫情至5月24日4个养鸡场共死亡雏鸡2200羽。

1 发病雏鸡临床症状

病鸡刚出现症状时表现为精神不振，食欲减退，不爱活动，羽毛松乱，饮食明显减少，体重减轻较快，主要是以呼吸道症状为主，病鸡出现气管啰音，鼻有浆液性分泌物，咳嗽，频频摇头，喷嚏，有部分病雏鸡有结膜炎。

2 病死鸡解剖病理变化

解剖可见病死鸡消瘦，鼻道、气管、支气管以及气囊内含有混浊黏稠的渗出物，气囊壁变厚、混浊，呼吸道黏膜水肿，窦腔内充满黏液渗出物，有部分有脓性肝周炎和心包炎。

3 实验室诊断

3.1 病变组织涂片镜检 用经过消毒过的接种棒从已经无菌收集到的死雏鸡的鼻腔、眶下窦、气管挑取少量病变组织在载玻片上抹成薄片待自然干燥在涂抹面载玻片背面用酒精灯加热固定，然后用革兰氏染色，在电子显微镜油镜下观察未发现有细菌。

3.2 细菌分离培养 用经过消毒过的移液管从已经无菌收集到的死雏鸡的鼻腔、眶下窦、气管等冲洗物0.2ml接种于1.8ml支原体培养基中、依次稀释至10-3，密封置于37℃培养，同时将样品接种于支原体固体培养基中，置于8%的CO2培养箱中培养，培养至32h发现液体支原体培养基发生酸碱度变化(培养基变黄指示剂作用)，立即接种于固体培养基上，置于CO2培养箱中37℃培养，培养至第9d在90倍实体显微镜下观察发现有肉眼不易看出的中央突起呈荷包蛋样微小菌落。

3.3 鉴定 用间接荧光抗体试验(IFA)方法，取1.5cm的琼脂块，菌落面朝上置于载玻片上，第一块载玻片上放一块待检分离物、一块已知毒支原体菌落(R株)、一块已知其他支原体菌落，第二块载玻片上放一块待检分离物，第一块载玻片上每块琼脂上加一滴适当稀释的兔抗支原体血清，第二块载玻片上琼脂块上加一滴正常兔血清，琼脂块在湿盒中室温条件下反应30min后，分别放到含有磷酸盐缓冲液(PBS)pH7.2的不同器皿中，冲洗10min，共冲洗2次，将琼脂块放回原玻片，吸水纸吸取过多的水分，每块琼脂加上稀释好的抗兔荧光抗体结合物，反应、洗涤同前，最后将琼脂块放回玻片，吸干多余水分后放入射式荧光显微镜下检查，发现已知其他支原体菌落、第二块载玻片分离物呈暗淡菌落、与背景荧光颜色相似，第一块载玻片分离物以及已知毒支原体菌落有呈亮绿色荧光的菌落，

3.4 发病鸡快速血清凝集试验(RSA) 在B、C、D、E 4个发生疫情的养鸡场分别采集鸡血进行分离收集血清样品进行快速血清凝集试验(RSA)，操作方法，在玻片上加入20µl待检鸡血清，再加等量20ul的鸡毒支原体染色抗原，用棉签将血清与抗原充分混均，同时做阳性及阴性血清对照。在室温条件下，56℃30min处理后2min判定结果。每个鸡场采样量及快速血清凝集试验(RSA)试验结果见附表。

附表 鸡毒支原体病鸡快速血清凝集试验 (羽、%)

4 结论

（1）通过临床症状、病理解剖、实验室细菌培养、间接荧光抗体试验(IFA)以及快速血清凝集试验(RSA)可以明确A县B、C、D、E 4个小型养鸡场的雏鸡发生的疫病为鸡毒支原体病。（2）4个小型养鸡场发生雏鸡鸡毒支原体病可能的原因是由于应激刺激而诱发，因为这4个小型养鸡场栏舍过于封闭，鸡舍里温度达到30℃，氨气刺鼻，氨气浓度过高，因此改善鸡舍的内部环境是预防鸡毒支原体很重要的一个环节。（3）据调查这4个养鸡场均没有做过鸡支原体疫苗免疫预防，这也是引起雏鸡发生鸡毒支原体的原因，当前免疫接种是减少支原体感染的一种有效方法，目前国内外使用的疫苗主要有弱毒疫苗和灭活疫苗，弱毒疫苗既可用于尚未感染的健康雏鸡，也可用于已经感染的鸡群，免疫保护率在80%以上因此养殖户最好是在鸡舍环境改善的同时采用疫苗注射来预防鸡毒支原体病。（4）如发生鸡毒支原体病可用土霉素配合链霉素同时使用，效果也不错，具体是土霉素使用量为120mg/kg，连用2周，链霉素每羽110mg肌肉注射。

S858.31

B

1007-1733(2015)12-0025-02

2015–10–19）