富血小板血浆在烧伤治疗中的应用方法及价值评估

李 彬，张科验

烧伤是一种特殊的创伤，烧伤之后不但涉及烧伤面的病理生理变化，而且还涉及机体其他组织器官的病理生理变化［1］。烧伤后烧伤面的组织遭到大量损伤，这些损伤涉及皮肤和皮下组织，包括皮下组织内的血管损伤，导致组织的缺血缺氧。这些损伤不但影响着烧伤组织的修复而且严重者会损伤其他组织与器官，导致其他组织器官的免疫功能紊乱，炎症介质释放，最终导致其他组织器官功能的衰竭［2］。富血小板血浆（plateletrich plasma，PRP）含有丰富的高浓度的各种生长因子，可以促进受损伤组织器官的修复，国内外学者已经将PRP用于临床多种损伤的修复［3－5］。为探讨PRP在烧伤治疗过程中的应用方法和应用价值，笔者进行了如下的临床研究。

1 材料与方法

1．1 主要试剂与设备 抗凝剂：枸橼酸钠（四川南格尔生物医学股份有限公司），凝血酶（山东绿叶制药有限公司），氯化钙（天津金汇太亚化学试剂有限公司），VEGF酶联检测试剂盒 （上海绿叶生物技术有限公司），TGF－β1酶联检测试剂盒 （上海绿叶生物技术有限公司），Centrifuge5417R型离心机（Eppendorf公司），iMARK 型酶标仪（Biorad 公司）。

1．2 病例来源 2013年1月—2014年1月笔者所在科收治深Ⅱ度烧伤患者66例。男40例，女26例；年龄21～67岁，平均46．3岁。将这些患者随机平均分为两组：PRP组，男20例，女13例，平均年龄45．6 岁，平均溃疡面（7．5±1．4） cm2；对照组，男 20例，女 13 例，平均年龄 47．1 岁，平均溃疡面（7．2±1．6）cm2。PRP组与对照组资料具有可比性。

1．3 PRP的制备 本实验制备PRP采用二次离心法制备，具体操作步骤如下。根据不同烧伤患者烧伤面积的大小，分别抽取不同量的静脉血，将抽取的静脉血与抗凝剂枸橼酸钠按照10∶1的比例混入离心管中，轻微振荡，将混匀后的离心管在离心机第一次离心，离心条件为：1500 r／min，10 min。第一次离心后将上部分的血浆和血浆与血细胞分阶层1 mm处的红细胞转移到另一离心管中，第二次离心，离心条件为：3600 r／min，10 min。弃去上层血小板含量极少的血浆，下层即为临床应用所需的PRP。上述所用步骤均需在无菌环境中进行，以免所制的PRP含有病菌，造成烧伤患者的感染。

1．4 治疗方法 将1．3制备的无菌的PRP和10%氯化钙混合，10%氯化钙含有少量的凝血酶，PRP与10%氯化钙的混合比例为1∶9，混合均匀后即得PRP凝胶。将PRP组与解毒烧伤膏组烧伤患者的烧伤面清洗干净，除去分泌物和脓痂，并对PRP组和对照组都采用相应的内科治疗。对于PRP组烧伤患者，将PRP凝胶均匀涂布于烧伤处，待PRP凝胶将烧伤处全部涂布后用单层的凡士林纱布覆盖烧伤处，最后用无菌敷料包扎，每天换药一次，直至烧伤面愈合。对照组除了相应的内科治疗外，仅用凡士林纱布和无菌敷料包扎，每天更换凡士林纱布和无菌敷料一次，直至烧伤面愈合。

1．5 指标观察与检测

1．5．1 肉芽组织的成熟度 参照相关文献［6］在治疗后的 5、10 d，用得分 0、1、2、3、4 患者数，对烧伤患者烧伤面肉芽组织进行形态学描述。

1．5．2 创面愈合时间 创面愈合时间的计算方法，将初次涂布PRP作为第一天，统计患者烧伤面完全愈合时所需的天数即为创面愈合时间。

1．5．3 患者血清中VEGF浓度 分别在烧伤患者受试的第五天和第十天抽取每个受试者的静脉血与采血管中，静止20 min，待管中血液分层后用低速离心机离心，离心条件为 3000 r／min，10 min。抽取上成血清，按照VEGF酶联检测试剂盒操作说明检测每位受试者涂布药物5 d和10 d后血清中的VEGF浓度。

1．5．4 患者血清中 TGF－β1 浓度 采用 1．5．3 中所分离的每位受试者第五天和第十天的血清，按照TGF－β1酶联检测试剂盒操作说明检测每位受试者涂布药物5 d和10 d后血清中VEGF的浓度。

1．6 统计学处理 等级计数资料采用秩和检验，计量资料以 （±s）表示，采用方差分析和t检验，以P＜0．05为有显著性差异。采用SPSS17．0进行数据处理。

2 结 果

2．1 PRP对肉芽组织成熟度的影响 烧伤创伤面涂布PRP凝胶后与对照组相比，涂布后5 d和涂布后10 d创伤面的肉芽组织的成熟程度均显著好于对照组，即P＜0．01。结果表明，PRP能促进烧伤后创伤面肉芽组织的成熟。见表1。

表1 PRP对肉芽组织成熟程度的影响

2．2 PRP对创面愈合时间的影响 在烧伤创伤处涂布PRP凝胶后，创伤面愈合时间显著减少，PRP组与对照组比较，创面愈合时间有显著性差异，即P＜0．01。结果表明，PRP能促进烧伤后创伤面愈合。见表2。

表2 PRP对创面愈合时间的影响

2．3 PRP对患者血清中VEGF的影响 PRP组与对照组比较，PRP组5 d后及10 d后血清中VEGF的浓度均有显著性差异（P＜0．01）。结果表明，PRP 可以促进烧伤患者血清中VEGF浓度的升高。见表3。

表3 PRP对患者不同时间点血清中VEGF浓度的影响

2．4 PRP对患者血清中 TGF－β1的影响 PRP组与对照组比较，PRP组5 d后及10 d后血清中TGF－1 的浓度均有显著性差异（P＜0．01）。结果表明PRP可以促进烧伤患者血清中TGF－1浓度的升高。见表4。

表4 PRP对患者不同时间点血清中TGF－1浓度的影响

3 讨 论

机体烧伤后，机体的组织生理结构遭到破坏，如组织内的血管受损，造成受损伤组织缺血缺氧，导致机体烧伤后组织难以得到新生修复。研究表明，血管的新生，组织的修复是在机体内生长因子的作用下进行的。微环境中多种生长因子浓度的升高可显著地促进血管新生和组织修复；当微环境中各种生长因子缺少时，可导致组织修复细胞的凋亡和新生血管的退化［7－9］。

PRP是人或动物的全血经过单次或多次低速离心后获得的血小板浓度较高的血浆，PRP与含有凝血酶的氯化钙混匀后，可以制成临床常用的易于涂布于创面处的PRP凝胶。PRP富含有丰富的血小板，而在机体中血小板可以合成多种生成因子，促进组织的生长发育，损伤组织的修复，如PRP中含有丰富的血小板源性生长因子、胰岛素样生长因子、转化生长因子、血管内皮细胞生长因子等［10］。大量的研究表明，单一的生长因子不能有效地促进细胞的增生，不能促进血管的新生，进而不能促进受损伤组织的修复，而只有当多种生长因子共同作用时才能促进细胞的增生，血管的新生，组织的修复［11］。而PRP所含有多种丰富的生长因子正符合了这一生理特点。故在本实验中涂布了PRP凝胶的烧伤创面肉芽组织的成熟度明显大于未涂布PRP凝胶的对照组，这一结果在涂布PRP凝胶5 d和10 d时作用同样明显；另外本实验结果同样也表明PRP可以缩短烧伤创面的完全愈合所需要的时间，PRP通过所含有的丰富多种的生长因子对烧伤的治疗起着非常显著的作用。

机体烧伤后的修复过程与血管的新生是密不可分的，血管的新生可以使新的血液运输到受损伤部位，一方面为受损的部位提供充足的氧气，供组织细胞的有氧呼吸；另一方面可以为受损伤组织提供充足的物质基础。VEGF是目前已知的最强的血管渗透剂，促进血管内皮细胞的增殖、迁移，并且可以促进毛细血管管腔的形成，最终使新生血管的数目在受损伤组织中增加。目前VEGF的治疗已广泛地应用于肌肉、骨骼、神经、肌腱、烧伤等创伤的修复。如 Lyras等［12］证实在兔跟腱损伤模型中给予PRP治疗术后2周新生血管密度显著增高，第2周达到最高值，并在第3、4周出现明显下降。Yin DK等［13］研究表明VEGF可以显著促进人脐静脉内皮细胞的增生。本实验中，当烧伤处涂布PRP凝胶后，不但促进烧伤处的愈合，而且升高了血清中VEGF的浓度，结合上述讨论表明，PRP通过促进血管的生成，增加烧伤处的供血，最终促进烧伤创面的愈合。

转化生长因子β（TGF－β）是一种具有多种作用功能的活性蛋白质，可以促进细胞增殖和细胞的分化，可以增加细胞外基质的分泌，参与机体多种生长发育和组织修复过程，如胚胎的发育、血管的形成、骨的重建、创伤的愈合等［14］，TGF－β 主要有三种亚型，近年来多个实验表明，TGF－β1对血管的形成、创面的修复起着重要的作用。TGF－β1是通过促进创面处修复细胞DNA的合成，促进创面处肉芽组织的形成与成熟，最终促进创面伤口的愈合。如Kashiwagi等［15］证实在大鼠跟腱局部予 TGF－β1 治疗后，可以提高Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维mRNA的表达，同时可以提高跟腱的最大断裂力和刚度。本实验中当烧伤处涂布PRP凝胶后，在促进烧伤处愈合的同时血清中TGF－β1浓度也升高，同上述讨论PRP通过自身所含有的丰富的生长因子来加速烧伤创面处的愈合。

通过上述可见PRP在治疗烧伤时具有很高的临床应用价值。①PRP是通过患者自身的静脉血液经过简单的步骤制的，具有操作简单，价格便宜，安全可靠。②在临床使用时只是将所提取的PRP与含有少量凝血酶的氯化钙混合制成凝胶，再涂布于切口处，具有使用方便，患者用药顺应性高的优点。③PRP中具有多种生长因子，各种生长因子从不同方面促进创面处的愈合，如VEGF促进血管的新生，TGF－β1促进修复细胞DNA的合成等；PRP促进创面的愈合疗效显著，可以显著的促进肉芽组织的成熟，缩短切口痊愈的时间。由此可见PRP在治疗烧伤时具有很高的临床应用价值，值得推广使用。

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