创伤性失血性休克大鼠血乳酸水平动态测定及其临床价值推定＊

李大鹏，王永清，张永军，吕春雷，郑文哲

创伤性失血性休克 （traumatic hemorrhagic shock，THS）是院前急救中常见的急危重症，为探讨THS发生过程中有效循环血量变化与组织细胞供氧相关性，笔者以快速失血建立收缩压下降曲线方式形成THS模型，以反映组织血液灌注及休克严重程度敏感指标的血乳酸（lactate，LA）为动态检测指标［1－3］，探讨组织血流灌注及组织供氧与 THS 发展过程相关性。

1 材料和方法

1.1 实验动物选择 选择 0.3～0.4 kg的健康雄性Wistar大鼠 （n＝19），无特定病原体动物（specific pathogen free animal，SPF），购于山东省鲁抗医药股份有限公司 （实验动物生产许可证：SCXK （鲁）2013－0001）。十万级亚屏障环境中恒温、恒湿条件下适应性饲养4 d以上。实验前禁食12 h，自由饮水。

1.2 实验方法

1.2.1 动物实验及模型 大鼠称重及10%水合氯醛麻醉稳定后固定在解剖台上，消毒后仔细解剖出其股动脉，分离完毕后对血管进行PE套管插管，并与生理记录仪（美国Biopac公司）相连，连接完毕打开三通监测大鼠收缩压、心率等变化。选择以上消毒方式，解剖出大鼠颈动脉，经颈动脉插入PE套管并与消毒的定量收集管相连，放血及留取检测血标本。实验前插管进行肝素化抗凝。

实验操作前稳定大鼠30 min，检测及记录相关生理功能指标基础值（T1）。选择颈动脉放血管路放血，大鼠收缩压随其放血量增加而快速下降，形成收缩压下降曲线，达到相应位置可封闭放血管路，维持并观察THS情况。选择带刻度EP收集管，标明 A、B、C、D、E， 分别收集收缩压降至基础值 3/4（T2）和由 3/4 至 1/2（T3）、1/2 至 2/5（T4）、2/5 至 1/5（T5）、1/5 至 10 mmHg（1 mmHg＝0.133 kPa）（T6）共5个时间点的放出血液，留取检测血样并常规分离后，－80℃超低温冰箱保存待检。

1.2.2 血乳酸含量水平检测 选择722型光栅分光光度计 （上海第三分析仪器厂、波长550 nm）及5415R台式冷冻小型离心机、5810R台式冷冻高速离心机（德国Eppendorf公司）等仪器设备。大鼠LA检测试剂盒购自南京建成生物工程研究所，使用NBT检测法。严格按试剂盒操作说明书要求进行标准品处理和实验操作，530 nm波长测各孔吸光度A。 检测范围为 0.05～0.35 mmol/L。

1.3 检测数据分组 19只实验大鼠在T2～T65个位置，分别使用A、B、C、D、E管分别留取血样，LA含量数据均以均数±标准差（x±s）表示，按 A～E 分组。

1.4 统计学处理 选择SPSS13.0统计学软件进行数据处理。计量资料以均数±标准差（x±s）表示，采用Shapiro－Wilk检验、F检验等进行相关分析，P＜0.05为有显著性差异。

2 结 果

2.1 大鼠体质量为（0.366±0.032） kg，收缩压基础值 T1 为（100.278±6.746） mmHg，A～E 各组 LA 含量水平见表1。

2.2 对各组进行Shapiro－Wilk检验 见表2。各组LA 含量水平均服从正态分布 （P＞0.05）； 应用Levene检验各组数据的方差齐性，结果表明各组数据方差齐性（P＞0.05）。

表1 各组 LA 含量水平（x±s，ng/ml）

表2 Shapiro－Wilk检验结果

2.3 实验数据资料 为重复测量资料，时间因素为检验的唯一影响因素，故对数据进行球型检验，检验结果为 W＝0.152，P＜0.001，拒绝球形假设。引用单变量检验方法需ε校正系数对自由度进行校正（选用Greenhouse－Geisser校正系数），F检验结果为F＝12.491，P＜0.001，重复因素（时间）在 5 个状态间差异具有显著性意义。见表3。

表3 球型检验结果

2.4 采用LSD法对数据进行多重比较 结果见表4，表明时间组A分别与时间组D、E间LA含量存在显著性差异（P＜0.05），时间组 B 分别与 D、E 间的LA 含量存在显著性差异（P＜0.05），时间组 C 分别与 D、E 间的 LA 含量存在显著性差异 （P＜0.05），其余各时间组间均无显著性差异（P＞0.05）。

表4 不同时间状态下LSD多重比较结果

综上所述，在α＝0.05的置信水平下，组A与D间存在显著性差异，与E间存在显著性差异；组B与D间存在显著性差异，与E间存在显著性差异；组C与D间存在显著性差异，与E间存在显著性差异，其余组间均无显著性差异。表明T2～T5及T2～T6、T3～T5及 T3～T6、T4～T5及 T4～T6时间段组内 LA 含量显著性升高，而 T2～T3、T3～T4、T5～T6时间段组内LA含量无显著性变化。

3 讨 论

选择大鼠颈动脉插入PE套管手段致动脉损伤，使用大量放血致快速失血引起休克方式建立THS模型，造模及实验方式简单、可靠、易行，易于观察。

失血性低血容量休克主要病理生理改变是有效循环血容量急剧减少，导致组织低灌注、无氧代谢增加、再灌注损伤等，组织氧供及氧需之间失衡，伴有静脉血氧含量下降和代谢性酸中毒［3，4］。LA是机体无氧代谢的产物，产生于骨骼、肌肉、脑、红细胞中，经肝代谢及由肾分泌排出，其水平高低可直接反映组织氧合状况及休克严重程度。危重病患者组织细胞功能障碍，导致血液灌注不良和组织缺血缺氧，无氧酵解增加致LA水平升高，LA水平及早期清除率与创伤患者严重程度及预后关系密切，可作为独立因素预测伴有休克等疾病的严重程度及转归，对于 THS 及预后评价具有重要意义［5－7］。

本实验表明：T2～T5及 T2～T6、T3～T5及 T3～T6、T4～T5及 T4～T6时间段组内 LA含量显著性升高 （P＜0.05），而 T2～T3、T3～T4、T5～T6时间段组内 LA 含量无显著性变化（P＞0.05），提示收缩压降至基础值 3/4时LA含量为基础值，分别与降至1/2及2/5间LA比较无显著性差异，可能与短时间迅速失血相关；降至 2/5时 LA含量分别与降至 1/5、10 mmHg间LA比较则显著性升高，提示因大量失血持续存在致血液灌流过低，组织细胞得不到充分氧供，造成LA转化生成丙酮酸过程受阻等，过量LA从组织释放到血液中，形成LA含量水平显著性升高并维持。THS发展过程中，收缩压降至基础值2/5前应尽快手术止血及充分输血输液复苏治疗，以恢复血容量及改善低灌注状态，提高LA早期清除率。

LA含量检测及在临床医学中应用是当前重要研究课题，体现于休克注重组织灌注及氧代谢指标监测，提高LA早期清除率的治疗方式，以及24 h内使LA、碱缺失等反映组织灌注指标恢复正常的复苏目标［5－9］。 本文以收缩压曲线结合常规经典ELISA方法，进行THS发展过程中LA含量动态监测，体现组织灌注及氧代谢状况，其水平可作为体现THS发展过程中LA产生与清除及酸碱代谢平衡调节的重要指标，为指导液体复苏治疗及判断预后提供了实验依据［10－12］。

［1］李维礁，陈媛，朱玮亚，等.家兔急性失血性休克及分组治疗的血压、微循环同步观测［J］.昆明医学院学报，2011（5）：20－23.

［2］刘卫华，黄群英，庞振瑶.高血压患者肾微循环功能障碍与冠状动脉病变相关研究［J］.陕西医学杂志，2010，39（12）：1611－1613.

［3］黄朝宗，郑思光，卢 敏.血乳酸测定在休克患者预后评估中的作用［J］.浙江临床医学，2007，9（1）：47.

［4］吴健锋，管向东，陈 娟，等.早期乳酸清除率评估与失血性低血容量休克预后的研究［J］.中华普通外科学文献：电子版，2010，4（4）：332－335.

［5］童风琴，姜海峰，管世江.危重病患者血乳酸测定的临床价值［J］.临床和实验医学杂志，2009，8（12）：86.

［6］叶 方，潘卫东，杨志军，等.血乳酸测定应用于预测创伤严重程度及预后［J］.安徽医学，2010，31（9）：1042－1043.

［7］崔恒熙，曹 苇.低压复苏治疗未控制性出血性休克的作用［J］.江苏大学学报：医学版，2007，17（2）：152－154.

［8］蔡建强，陈 凛.出血性休克的液体治疗［J］.中国实用外科杂志，2010，30（6）：463－465.

［9］刘红梅，孙海晨.创伤性休克复苏的研究进展［J］.创伤外科杂志，2011，13（1）：78－81.

［10］于天瑜.102例限制性液体复苏治疗创伤失血性休克的临床研究［J］.吉林医学，2013，34（21）：42－52.

［11］侯 丹，谭 雯.创伤性肝破裂合并失血性休克不同早期液体复苏方法疗效比较［J］.中国老年学杂志，2012，32（21）：4819－4820.

［12］程卫东，孙明寅.限制性液体复苏在创伤失血性休克急救中的应用［J］.安徽医学，2013，17（4）：662－663.